摘要: 目的 通过小鼠肺炎病毒（pneumonia virus of mice,PVM）感染近交系BALB/c小鼠建立病毒感染肺炎动物模型，观察PVM感染过程中促炎症警报素分子高迁移率族蛋白B1 （high mobility group box 1,HMGB1）的变化，以及HMGB1抑制剂甘草酸（glycyrrhizic acid,GA）对小鼠肺脏感染损伤的在体干预作用。方法 将3周龄的雌性BALB/c小鼠随机分为3组，每组6只。一组未经PVM感染，作为对照组（Control）；另外两组先以1×10～4半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID₅₀)/25μL剂量滴鼻接种PVM，然后分别给予GA生理盐水溶液灌胃（GA组）或单纯生理盐水灌胃（normal saline,NS组）处理，连续15 d。其间，观察并记录各组小鼠体重、外观等改变。在实验终点采集各组小鼠的肺脏组织样本，通过苏木精-伊红染色和免疫组织化学法检测小鼠肺脏组织内PVM和HMGB1蛋白的分布情况；通过实时荧光定量PCR法检测小鼠肺脏组织中HMGB1、Toll样受体4 （Toll-like receptor 4,TLR-4）、晚期糖基化终产物特异性受体（advanced glycosylation end-product-specific receptor,AGER），以及白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-2和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）等炎症因子的表达水平。结果 与Control组相比，NS组小鼠6 d后体重显著下降（P<0.05），组织病理学结果显示其肺脏有明显的炎症病变，免疫组织化学结果显示HMGB1从细胞核释放至细胞质，实时荧光定量PCR结果显示HMGB1、IL-1β和IL-2的表达水平均显著上调（P<0.05）;GA干预组的临床症状和体重无明显变化。而与NS组相比，GA干预组肺组织的病理损伤明显减轻，且肺组织中HMGB1、IL-1β、IL-2和干扰素γ（interferon-γ,IFN-γ）的表达水平显著下降（P<0.05），但AGER的表达水平显著增高（P<0.05）。结论 PVM感染能引起明显的小鼠肺部炎症性病理损伤，而GA能有效减轻其损伤，其作用机制可能与激活HMGB1信号通路相关。

摘要: 目的 通过慢性不可预知性应激（chronic unpredictable stress,CUS）联合完全弗氏佐剂（complete Freund's adjuvant,CFA）和福尔马林诱导建立妊娠期疼痛-抑郁共病小鼠动物模型，对其相关表型进行系统评价，并初步探究其共病的病理基础。方法 选择8周龄的C57BL/6J雌性小鼠，依据糖水偏好实验数据，采用随机分层方法将其分为对照组（妊娠前不干预）和CUS组（妊娠前予以CUS干预）。CUS造模完成后，将雌雄小鼠合笼配对，妊娠期小鼠分别于右后肢足底皮下注射50%CFA和5%福尔马林溶液，诱导建立妊娠期疼痛-抑郁共病小鼠模型。实验共分8组，即为对照-空白组、CUS-空白组、对照-CFA组、CUS-CFA组、对照-福尔马林组、CUS-福尔马林组、对照-CFA+福尔马林组、CUS-CFA+福尔马林组，每组10只。各组小鼠均在CUS干预前后、妊娠后和分娩后，通过糖水偏好实验、强迫游泳实验、悬尾实验和旷场实验评价行为学变化，并通过机械刺痛实验和热辐射痛实验测定各组小鼠对痛觉的敏感性变化；最后处死小鼠，用酶联免疫吸附法检测各组小鼠海马体中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)，以及血清皮质醇（cortisol）和促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone,ACTH）的含量。结果 与对照-空白组相比，CUS-空白组模型小鼠产生了明显的抑郁样行为，并伴随痛阈明显降低（P<0.001）。与对照-空白组相比，对照-CFA+福尔马林组在CFA注射与福尔马林注射后均出现痛阈下降（P<0.01）。与对照-空白组和对照-福尔马林组相比，CUS-福尔马林组的痛阈明显降低（P<0.01），且三者依次下降。与对照-空白组和对照-CFA组相比，CUS-CFA组的痛阈明显降低（P<0.001），且三者依次下降。与对照-空白组、对照-CFA+福尔马林组相比，CUS-CFA+福尔马林组小鼠的机械痛阈显著降低（P<0.001）且三者依次下降，热辐射耐受时间缩短（P<0.01）且三者依次缩短。与对照-CFA+福尔马林组和CUS-空白组小鼠相比，CUS-CFA+福尔马林组小鼠的糖水偏好百分比显著降低（P<0.001），强迫游泳时不动时间显著延长（P<0.001），悬尾时不动时间也显著延长（P<0.001），在旷场中央探索的时间显著缩短（P<0.001），旷场探索总路程显著缩短（P<0.001），中央探索路程占比减少（P<0.001）。与对照-CFA+福尔马林组和CUS-空白组相比，CUS-CFA+福尔马林组小鼠血清皮质醇和ACTH水平显著升高（P<0.01），海马体中IL-6、TNF-α水平升高（P<0.05）。结论 CUS联合CFA和福尔马林注射可作为建立妊娠期疼痛-抑郁共病C57BL/6J小鼠模型的理想方法。该模型小鼠的行为学改变可能是通过调节海马区的炎症反应水平和下丘脑-垂体-肾上腺（hypothalamic–pituitary–adrenal,HPA）轴的激素水平导致的。

摘要: 目的 探讨微RNA (microRNA,miRNA或miR)-887-3p对大鼠椎间盘纤维环细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法 取8周龄SPF级雄性SD大鼠的纤维环组织，离心制备并鉴定纤维环细胞。实验随机分为4组：正常组（Normal group）是不做任何处理的原代纤维环细胞；对照组（Control group）用10 ng/mL白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)处理纤维环细胞24 h，形成退变细胞模型；干扰组（miR-887-3p inhibitor）是在对照组的基础上用Lipo3000转染miR-887-3p抑制子；过表达组（miR-887-3p mimics）是在对照组的基础上用Lipo3000转染miR-887-3p模拟物。采用CCK-8法检测各组细胞活力；流式细胞术检测各组细胞凋亡率；实时荧光定量PCR法检测miR-887-3p和鼠双微体4 (murine double minute 4,MDM4) mRNA的表达；蛋白质印迹法检测MDM4、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达水平。结果 免疫荧光染色法鉴定分离培养的细胞发现，大鼠椎间盘纤维环细胞中Collagen I的阳性率在90%以上，提示纤维环细胞纯度大于90%。实时荧光定量PCR结果显示，利用IL-1β构建纤维环退变细胞模型后，miR-887-3p表达水平与正常组相比显著上升（P<0.001）；与对照组相比，转染miR-887-3p抑制子后，miR-887-3p表达水平显著下降（P<0.001）。CCK-8法检测结果表明，与正常组相比，对照组细胞活力显著下降（P<0.001）；与对照组相比，抑制miR-887-3p的表达后，细胞增殖能力显著增强；miR-887-3p过表达后，细胞增殖能力显著下降。流式细胞仪检测结果表明，与正常组相比，对照组的细胞凋亡率显著增加（P<0.001）；与对照组相比，miR-887-3p干扰组的细胞凋亡率显著降低（P<0.001）,miR-887-3p过表达组的细胞凋亡率显著增加（P<0.001）。蛋白质印迹法检测结果发现，与正常组相比，对照组中Bcl-2的表达水平显著降低（P<0.001）,Caspase-3的表达水平显著升高（P<0.001）；与对照组相比，miR-887-3p干扰组中Bcl-2和MDM4表达水平显著升高（P<0.01）,Caspase-3的表达水平显著降低（P<0.01）；而miR-887-3p过表达组中Bcl-2和MDM4表达水平显著降低（P<0.05）,Caspase-3的表达水平显著升高（P<0.05）。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果显示，干扰miR-887-3p后，MDM4蛋白和mRNA的表达增加（P<0.001）；过表达miR-887-3p后，MDM4蛋白和m RNA的表达降低（P<0.01,P<0.001）。结论 miR-887-3p可能通过调控MDM4的表达来影响大鼠椎间盘纤维环细胞的增殖和凋亡，进而影响椎间盘退变的发生和发展。

摘要: 目的 观察1 470 nm波长的半导体激光对离体动物组织的汽化切割、凝固和热损伤情况，以探讨其应用于前列腺增生治疗的可行性。方法 实验组和同类对照组分别使用HANS-D1型和ML-DD01FI型1 470 nm半导体激光治疗仪。取新鲜离体猪膀胱组织，光纤距离组织0.5 cm和1 cm的条件下工作5 s，观察60、90、120、150、160 W功率的半导体激光对组织的损伤影响；取离体犬前列腺和猪肾组织分别进行汽化消融和汽化切割，观察60、90、120、150、160 W功率的半导体激光对组织的汽化和热损伤作用；另在凝结模式下照射离体猪肾组织5、10、15 s后，观察30、40、50 W功率的半导体激光对组织的凝固作用。结果 光纤照射距离组织1 cm时，1 470 nm半导体激光对邻近正常膀胱组织不会产生意外损伤；但在距离0.5 cm时，120、150、160 W的1 470 nm半导体激光对膀胱组织有轻微的损伤。另外，随着输出功率的增大，60～160 W半导体激光对犬前列腺组织的汽化消融效率逐渐提高，且汽化量和消耗总能量之间呈良好的线性相关（P<0.001）。病理组织学HE染色结果显示实验组的凝固层厚度为292.20～309.98μm，汽化层深度为1.49～4.52 mm；同类对照组的凝固层厚度为289.91～303.53μm，汽化层深度为1.88～4.43 mm，两组间比较均未见明显差异（P>0.05）。同时，汽化切割截面积为1 cm²的离体猪肾组织时，60～160 W的1 470 nm半导体激光对肾组织的汽化切割效率随输出功率的增大而提高（P<0.05），其中实验组的凝固层厚度为496.04～514.47μm，同类对照组的凝固层厚度为489.39～518.53μm。此外，凝结模式下30、40、50 W的半导体激光对离体猪肾组织照射5、10、15 s时，随着激光输出功率的增加，凝固瘢直径、凹槽深度和凝固效率均逐渐增大（P<0.05）；其中实验组和同类对照组的凝固层厚度分别为399.10～449.98μm和392.97～447.65μm，汽化层深度分别为3.05～7.09 mm和2.70～7.14 mm，两组间比较均未见明显差异（P>0.05）。结论 1 470 nm半导体激光对离体动物组织具有良好的汽化消融、切割和凝固作用，其效果与输出能量之间具有良好的线性相关。

摘要: 创伤性骨折及应力性骨折为骨科常见疾病，其愈合过程中的骨转换、骨修复以及促进骨折愈合的相关研究具有广泛的发展前景。基础医学实验常选用动物四肢长骨骨折模型来研究各种干预措施对骨折愈合的作用机制，而骨折愈合是一个受到多因素影响，并涉及多分子、多通路的复杂过程。因此，为了更深入地探究其作用机制、加速成果转化和提高临床疗效，在实验研究中选择适宜的动物骨折模型制造方法显得尤为重要。基于此，本文对实验研究中常用作长骨骨折模型的动物种类和造模方法进行文献综述，归纳出骨缺损法、物理撞击法、力学弯折法、开放截骨法和钻孔法等5种方法，并对其优缺点及适用范围进行横向对比，旨在为骨折愈合干预机制研究提供适宜的骨折模型参考。

摘要: 目的 研究成年蜂猴的肠道菌群组成情况，以探讨人工圈养蜂猴的健康影响因素。方法 采集4只成年雄性蜂猴的粪便样本，运用细菌16S rDNA通用引物扩增V4区，应用Illumina NovaSeq测序平台对蜂猴粪便微生物进行测序分析，并使用Qiime软件分析样本的复杂度和相似度。基于有效数据分析样本肠道菌群在门、属水平上的物种结构和丰度，同时应用PICRUSt软件进行菌群的代谢功能预测。结果 年龄最小的蜂猴的肠道菌群多样性指数shannon高于其他蜂猴。PCoA分析显示4只蜂猴的样本菌群组成具有一定的相似度。4只蜂猴的粪便中细菌共鉴定出了12个门、18个纲、28个目、49个科、93个属和59个种。其中，优势菌门是拟杆菌门（Bacteroidetes）和厚壁菌门（Firmicutes），平均相对丰度分别为46%和28%；拟杆菌属（Bacteroides）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）和梭菌属（Fusobacterium）的丰度较高，平均相对丰度分别为33%、6%和6%；有益菌群双歧杆菌属在4个蜂猴粪便样本中都存在，且在年龄较小的蜂猴中相对丰度最高。PICRUSt功能预测分析显示，蜂猴粪便菌群中氨基酸转运和代谢、碳水化合物转运和代谢等功能基因的丰度相对较高。结论 应用Illumina NovaSeq高通量测序技术可以较全面地检测蜂猴的粪便菌群。蜂猴粪便中细菌组成具有丰富的多样性，其中还有许多未被分类鉴定且相对丰度较高的细菌，需要进一步研究。

摘要: 无特定病原体（specific pathogen-free,SPF）鸡在禽病及疫苗研究中应用广泛。垂直传播性疾病以垂直传播的方式传递给雏鸡，降低雏鸡成活率、增加生产成本、给整个养殖行业带来巨大经济损失的同时，严重影响SPF鸡的培育与使用。因此，需要加强研究及管理人员对鸡垂直传播性疫病病原的认识，并制定出行之有效的监测措施。质量监测是保证SPF鸡质量的重要环节，其中病原检测是首要环节。在此基础上，应结合净化方式以及生物安全防控手段来培育合格的SPF鸡群。本文综述了包括病毒性病原、细菌性病原和支原体在内的鸡主要垂直传播性病原和这些病原的检测方法，比较美国企业标准和中国国家标准中有关SPF鸡微生物检测项目及方法的差异。结果分析显示，在两种标准中，垂直传播性病原大肠埃希菌、奇异变形杆菌以及沙门菌、禽白血病等垂直传播性疾病均未被列入SPF鸡微生物检测项目。而这些病原存在混合感染特征，一旦爆发，将严重影响鸡群健康。为生产更高质量的SPF鸡群，有必要将其列入必检项目。本文旨在帮助人们了解SPF鸡微生物监测的相关标准以及垂直传播性病原的危害和防控策略，为SPF鸡病原检测及净化提供参考。

摘要: 目的 研究不同颗粒饲料硬度对实验小鼠生长繁殖性能、饲料利用率和笼内环境粉尘的影响。方法 选用3周龄的SPF级C57BL/6JGpt和ICR实验小鼠各150只，随机平均分成3组，雌雄各半，分别饲喂饲料硬度为18.62 kg (1 kg=9.8 N)、23.15 kg和27.89 kg的日粮，记录并计算3～10周龄小鼠体重增加量、饲料利用率和笼盒内粉尘量。另外，两个品系各选取45只6周龄雄鼠和90只4周龄雌鼠，随机平均分为3组，分别饲喂3种不同硬度的颗粒饲料。饲喂同一种硬度饲料的同品系小鼠适应2周后，以1∶2的比例雄雌合笼饲养，3个月内每周统计每个繁殖笼内动物繁殖信息。结果 C57BL/6JGpt小鼠4周龄时，饲料硬度23.15 kg组的雄鼠体重显著高于饲料硬度为18.62 kg和27.89 kg组（P<0.01），饲料硬度18.62 kg组的雌鼠体重显著高于27.89 kg组（P<0.05）；不同饲料硬度组间3～10周龄ICR小鼠的体重无显著差异（P>0.05）。饲喂不同硬度饲料组中，两个品系各周龄雄鼠的饲料利用率均高于雌鼠（P<0.01）。与饲料硬度27.89 kg组相比，饲料硬度18.62 kg组和饲料硬度23.15 kg组4～8周龄（除7周龄C57BL/6JGpt小鼠外）两品系笼盒内50目粉尘量均显著增加（P<0.05）。C57BL/6JGpt和ICR小鼠在实验周期内初产胎间隔及月生产指数等基本繁育性能在3种不同硬度饲料组间均无显著差异（P>0.05）；但C57BL/6JGpt小鼠月生产指数随饲料硬度升高先增加后降低，ICR小鼠月生产指数则随饲料硬度升高而增加，但差异尚无统计学意义（P>0.05）。结论 不同品系、不同性别的实验小鼠对饲料硬度的耐受性不同，其中C57BL/6JGpt小鼠适合选择较低硬度的饲料，而ICR小鼠适合选择略高硬度的饲料。

摘要: 实验动物微生物质量对科学研究数据的有效性和重复性以及人类健康和动物福利至关重要。目前，独立通风笼具（individual ventilation cage,IVC）已成为主流的啮齿类实验动物饲养系统。针对这种饲养方式的病原体监测方法最常用的是脏垫料哨兵动物法（soiled bedding sentinels,SBS），该方法是以间接接触和延迟反馈的方式监测鼠群的微生物携带状况，能有效监测通过粪-口途径传播的病原体如小鼠肝炎病毒、呼肠孤病毒等。但这种方法难以监测到主要通过气溶胶、直接接触等途径传播的病原体，例如仙台病毒、嗜肺巴斯德杆菌等。排风粉尘（exhaust air dust,EAD）-PCR监测方法分为在IVC笼架排风管道中拭子采样，用以监测管道相对应的笼架；主机初效过滤前拭子采样，用以监测整个IVC笼架；EAD收集装置采样，用以监测同一个主机连接的所有笼架。不同IVC厂商针对各自的IVC系统开发了相应的EAD收集装置，使操作便捷，容易实现标准化。目前，与SBS方法相比，EAD-PCR方法的检出率和时效性都有显著提升，最快暴露一周就可检出，可作为SBS方法的补充或替代，有利于维护实验动物福利。本文对上述两种病原体监测方法的应用进展进行综述，同时结合本实验室和送检单位EAD-PCR监测的实施情况，对该方法存在的局限性进行分析并提出解决方案。EAD-PCR方法有助于减少活体哨兵动物的使用量，可以更好地维护实验动物福利的“3Rs”原则。

摘要: 湖南省实验动物生物安全应急管理工作是湖南省贯彻落实国家生物安全战略的重要组成部分。为加强实验动物生物安全风险防控，快速有效应对实验动物生物安全突发事件，最大限度减轻其对从业人员、公众健康、实验动物产业等造成的损害，保障人民群众生命财产安全，维护公共安全及社会稳定，湖南省制定了《湖南省实验动物生物安全突发事件应急预案》。本文分析了应急预案编制的必要性、指导思想、原则和依据等，阐述了预案的主要内容，包括适用范围、事件分级、组织体系及职责、监测预警机制、应急报告、应急处置、后期评估和保障措施等，并对近年来湖南省实验动物生物安全应急管理工作进行了小结和展望。