摘要: 为探索重寄生车轮虫(Trichodina hyperparasitis Chen&Hsieh, 1984)种内分化的影响因素,研究通过广泛采样分离获得寄生于乌鳢(Channa argus)与月鳢(Channa asiatica)鳃部的重寄生车轮虫3个地理株系,即重庆沙坪坝乌鳢寄生株系(S株系)、重庆大足乌鳢寄生株系(D株系)与贵州凯里月鳢寄生株系(K株系),其中贵州凯里为重寄生车轮虫的地理新记录,月鳢为其宿主新记录。结合形态学与分子证据对重寄生车轮虫不同株系进行了比较研究,基于附着盘形态学量化与主成分分析的研究结果显示:三地理株系在虫体大小方面存在显著差异,其中S株系是虫体最大的株系(P<0.05),也是齿体最长的株系(P<0.05), K株系是齿体数最少的株系; S株系与K株系在附着盘整体结构与齿体形态方面存在一定的种内差异(P<0.05);基于SSU rDNA序列的株系比较结果显示, K株系与其他2株系间存在10个碱基变异位点,但3株系间序列相似度为99.45%—100%,遗传距离为0.001—0.003;基于SSU rDNA的系统发育分析显示,重寄生车轮虫与近缘种之间形成了宿主种类特有的单系,即“鲈形目Perciformes支系”与“鲇形目Siluriformes支系”;同时在其种内也形成了宿主种群特有的单系,即“乌鳢支系”与“月鳢支系”。综合研究结果表明,重寄生车轮虫并非一定营“重寄生”生活,且偏好寄生于鳢属(Channa)鱼类;其中乌鳢寄生的两株系间较近缘,与月鳢寄生的株系间则较远缘,且各株系间已存在一定程度的遗传分化与形态分化;推测对于外寄生车轮虫而言,第一生境即宿主的类型可能是影响车轮虫种间或种群分化最直接的因素。

摘要: 为了探究不同养殖模式下克氏原螯虾肠道微生物结构与功能是否存在差异,研究利用Illumina MiSeq高通量测序技术,测定了稻虾种养（Rice-crayfish co-culture, RC）、池塘单养（Single-crayfish pond culture, SC）和池塘混养（Mixed-crayfish pond culture, MC）模式下克氏原螯虾肠道微生物16S rDNA基因V3—V4区,解析了肠道菌群组成、结构与功能,同时探究了肠道细菌之间及其与水体理化因子之间的关系。结果发现:肠道微生物物种组成方面,在门水平上,不同养殖模式克氏原螯虾肠道细菌组成较为一致,柔壁菌门（Tenericutes）、变形菌门（Proteobacteria）和厚壁菌门（Firmicutes）是绝对优势类群;在属水平上,不同养殖模式之间存在一定差异,芽孢杆菌属（Bacillus）、乳球菌属（Lactococcus）和气单胞菌属（Aeromonas）细菌相对丰度分别在RC、SC和MC组最高。肠道微生物多样性方面, MC组肠道细菌物种丰富度和多样性最高,三种养殖模式下克氏原螯虾肠道细菌的群落结构存在显著性差异。肠道微生物功能方面, RC组显著富集维生素生物合成代谢通路, SC组显著富集乳糖降解和半乳糖降解代谢通路, MC组显著富集脂肪酸和脂质降解、CMP-pseudaminate生物合成和脂多糖生物合成的超途径代谢通路。肠道微生物之间及其与水体理化因子之间关系方面,肠道细菌之间的合作关系占比达83.76%,丹毒丝菌科（Erysipelotrichaceae）和鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonas）细菌是网络主要节点;肠道中乳杆菌属（Lactobacillus）细菌丰度与水体中TP浓度呈显著正相关关系,与N H₄⁺-N浓度呈显著负相关关系。综上,克氏原螯虾肠道具有特有的以柔壁菌门、变形菌门和厚壁菌门为主的核心微生物类群,不因养殖模式改变而变化,但在不同养殖模式下克氏原螯虾肠道细菌群落结构与代谢功能存在显著差异,该结果丰富了对克氏原螯虾肠道微生物的认识,为克氏原螯虾肠道益生菌的筛选及其在生产实践中的应用提供了理论依据。

摘要: 研究以草鱼(Ctenopharyngodon idella)为实验对象,通过在基础饲料中添加0(对照组, Control)、 0.9 g/kg(低剂量组, LD)、1.8 g/kg(中剂量组, MD)、2.7 g/kg(高剂量组, HD)的枯草芽孢杆菌源抗菌肽Sublancin,采用酶联免疫吸附测定、组织切片HE染色、透射电镜扫描(TEM)及实时荧光定量PCR等技术探究Sublancin对草鱼生长、抗氧化能力及肠道健康的影响。结果发现:(1)与对照组相比,中剂量组草鱼终末体重(FBW)、增重(WG)及增重率(WGR)显著提高,中、低剂量组特定生长率(SGR)显著升高(P<0.05);(2)相较对照组,抗菌肽组草鱼不同肠段的绒毛长度、宽度及肌层厚度显著增加,不同肠段的隐窝深度显著降低(P<0.05);(3)与对照组相比,中、低剂量组草鱼肠道微绒毛数量增加且排列更整齐,紧密连接电子密度更高;(4)与对照组相比,中、低剂量组草鱼血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性显著升高(P<0.05),中剂量组草鱼血清白细胞介素-22(IL-22)水平显著升高,抗菌肽组草鱼血清内毒素(LPS)含量显著降低,抗菌肽组草鱼中肠Claudin c、Occludin及低剂量组草鱼中肠ZO-2紧密连接相关蛋白基因表达水平显著提高(P<0.05)。综上,适量抗菌肽Sublancin能提高草鱼的生长性能、抗氧化能力,增强肠道屏障,对肠道健康有积极影响;但过量抗菌肽会抑制草鱼生长,减弱其氧化应激能力与肠道健康,研究结果为抗菌肽在水产养殖业中的应用提供理论依据。

摘要: 为研究大口黑鲈蛙虹彩病毒（Largemouth Bass Ranavirus,LMBV）传代致弱毒株LMBV-ZJDSS-F110的特性,研究开展了该病毒的复制效率、毒力、体内病毒载量变化、比较基因组、免疫保护率、免疫后免疫相关基因表达和毒力返强等试验。结果显示:采用FHM培养,F110代次毒滴度可达10^9.1 TCID₅₀/mL,以剂量10^8.0 TCID₅₀/mL×0.1 mL注射大口黑鲈,未见死亡。不同代次毒株体内组织病毒载量测试,结果显示:传代毒F5、F45和F110在7d时脾脏和鳃的病毒载量要高于3d,而F90在两时间点的病毒载量变化不显著,表明传代毒F90相较于F45,F110相较于F90都出现了特性改变。不同代次毒株F5与F110比较基因组学分析显示:LMBV-ZJDSS-F110出现了10处变异,其中有7处可能引起编码区的变化。将传代弱毒F110通过注射和浸泡免疫大口黑鲈,结果显示10^8.0 TCID₅₀/mL浓度组都获得了对强毒F5株70%免疫保护率,而头肾中免疫因子（TNF-α、CD8b、IgM、IgT、IFN-γ）基因表达量在免疫后14d达到峰值,且注射组显著高于浸泡免疫组,其中IFN-γ表达量接近对照组的50倍。活体传代毒力返强测试结果显示,F110活体盲传5代未引起死亡。以上研究表明,LMBV-ZJDSS-F110是一株安全有效的弱毒疫苗株,为大口黑鲈蛙虹彩病毒病的免疫预防提供了路径。

摘要: 长江“生态航道”建设在支持区域经济发展、河流生态与航运效益协同方面具有重要意义,同时也为全球河流治理的生态化转型提供了参考路径。文章系统回顾了“生态航道”理念的发展历程与长江流域的实践经验,基于河流功能视角重新阐释了“航道”的概念,提出其应被视为基于航运需求划定的功能区而非河流实体。结合长江航道整治的实践,文章分析了当前建设中存在的生态措施缺乏系统性规划和评估体系的复杂化两个核心问题,并从功能区划的科学性、技术体系的生态性和评估框架的高效性三个方面提出优化路径。文章提出,通过强化航运功能与生态功能的动态平衡、优化功能区划与技术协同设计,以及构建聚焦河流生态功能的精简评估体系,可实现航运效益与生态保护的协调发展。文章为长江“生态航道”的可持续建设提供系统化理论依据,并为国际河流航道生态化发展提供借鉴。

摘要: 为探究青霉素和氟苯尼考对黄姑鱼(Nibea albiflora)肝脏和肠道组织学结构、抗氧化能力及肠道菌群的影响,实验以黄姑鱼为研究对象,设置不同浓度的青霉素组(25、50和75 mg/kg)和氟苯尼考组(25、50和100 mg/kg),以基础饲料为对照,投喂期间,分别于5d后和10d后进行样品采集,检测肝脏和肠道组织学结构、抗氧化酶活性、相关免疫基因表达、肌肉中抗生素残余及肠道菌群组成变化。结果表明:(1)低浓度和中浓度的青霉素或氟苯尼考对黄姑鱼肠道和肝脏组织学结构没有明显影响,而高浓度组的肝脏和肠道组织均出现明显损伤;(2)无论处理5d或10d,与对照组相比,高浓度组肝脏中SOD、CAT和GSH-PX的活性均显著降低,而MDA含量显著升高;在肠道中,高浓度组的SOD活性均显著降低,而GSH-PX活性和MDA含量均显著升高;(3)肝脏和肌肉中均检测到2种抗生素残余,且高浓度的青霉素(54.48μg/kg)或氟苯尼考(1039.47μg/kg)处理10d后肌肉中抗生素残余均超出了最大残留限量;(4)无论处理5d或10d,高浓度的青霉素或氟苯尼考均显著抑制肠道中Arp2/3、ZO-1和Claudin4基因的表达水平,而促炎基因IL-6和TNF-α的表达水平显著上升,抑炎基因IL-10、TGF-β的表达水平显著下降;(5)青霉素或氟苯尼考对黄姑鱼肠道菌群的α-多样性无显著影响;变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度均显著增加,而厚壁菌门(Firmicutes)的相对丰度均显著降低。综上,饲料中添加低浓度的青霉素或氟苯尼考对黄姑鱼肝脏和肠道形态结构、抗氧化酶活性及肠道相关结构基因、免疫基因和肠道菌群结构均无显著影响;而高浓度会引起肝脏和肠道组织损伤、氧化应激反应、黏膜免疫应答及影响肠道菌群多样性和组成。

摘要: 实验室通过连续传代致弱获得一株具有良好免疫保护效果的大口黑鲈蛙虹彩病毒减毒株(LMBV-ZJDSS-F110)。为评估该减毒株对鱼体的免疫作用,采集免疫后1d、4d、7d及28d的肝、脾、头肾组织样本,进行组织病理学和病毒载量分析,结果发现该减毒株对鱼体组织的损伤较轻,且病毒载量随时间推移在各组织中下降。此外,为进一步探究该减毒株对大口黑鲈的免疫调控机制,通过对头肾样本的转录组测序(RNAsequencing, RNA-Seq),发现免疫早期(1d和4d)的4979和6891个差异基因主要富集于先天性免疫通路,如细胞因子-细胞因子受体相互作用、胞质DNA感知及凋亡等通路;免疫中后期(7d和28d)的1693和1758个差异基因则主要富集于适应性免疫通路,如T细胞受体、B细胞受体、Fc epsilon RI信号及Th1/Th2细胞分化等通路。此外,代谢通路中半胱氨酸和蛋氨酸代谢,谷胱甘肽代谢通路主要在免疫前期富集,糖酵解/糖异生代谢通路主要在免疫中后期富集。研究筛选IRF3、MX、TRIM25、NAMPT、DHX58、SRC、RSAD2、TMEM38和C4九个基因进行RT-qPCR验证。结果显示转录组测序具有可靠性。研究为大口黑鲈的免疫应答机制提供了新见解,并为疫苗的进一步开发与应用奠定基础。

摘要: 为开发安全有效的疫苗以预防虹鳟传染性造血器官坏死病毒(IHNV)暴发。研究重点开发了以香豆素为佐剂的IHNV灭活疫苗,疫苗安全性实验证明IHNV病毒液已被完全灭活。实验分为对照组、疫苗组和香豆素+疫苗组。疫苗注射剂量为150μL,对照组注射同等剂量的磷酸盐缓冲溶液(PBS),在疫苗接种14d(D14)后进行IHNV攻毒实验,并在D7、D14、D15、D21、D30进行虹鳟脾脏和血清的样本采集。IHNV攻毒后显示,香豆素+疫苗的存活率为66%,而单一灭活疫苗和对照组的分别为62%和24%。组织病理学分析显示, IHNV攻毒后香豆素+疫苗组脾脏组织损伤最小,出现轻微的炎症反应,而对照组出现严重的黑色素巨噬细胞中心(MMC)和组织炎症(TI)。此外,在D7—D30,香豆素+疫苗组血清的总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)活性水平显著高于疫苗组和对照组(P<0.05)。在D7—D14,香豆素+疫苗组血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)水平被显著升高;而IHNV攻毒后(D15—D30),香豆素+疫苗组GPT和GOT水平显著低于对照组(P<0.05)。在接种疫苗和攻毒后,香豆素+疫苗组中脾脏的MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ和IFN-γ基因被显著上调(P<0.05);同时,香豆素+疫苗组CD4、CD8、IgT、C3、VIG1和Mx1基因表达量显著高于疫苗组和对照组(P<0.05)。结果表明,灭活疫苗联合佐剂香豆素是预防IHNV感染的有效方法,有助于进一步控制虹鳟养殖中的IHNV暴发。

摘要: 研究以异育银鲫为研究对象,通过16S rDNA高通量测序分析,探究武汉单极虫感染对其皮肤微生物物种组成、丰富度和多样性的影响。结果显示,健康组和感染组异育银鲫皮肤微生物共有30门、80纲、188目、295科、475属、692种、939个OTUs,其中健康组特有OTU数为308个,感染组特有OTU数为342个。根据α多样性分析发现,感染组微生物多样性较健康组显著升高、丰富度显著降低; β多样性分析发现,健康组和感染组皮肤微生物群落结构存在显著差异。比较分析发现,在门水平上,健康组和感染组优势菌门均为厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、蓝藻门(Cyanobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes),但在丰富度上存在差异;在属水平上,丰富度在1%以上的有20个属级单元,健康组以乳球菌属(Lactococcus)为主,感染组以无色杆菌属(Achromobacter)为主,分别占各组总微生物数量的58.99%和48.67%。线性判别分析和功能预测发现,感染组中致病菌的丰富度和微生物潜在致病性较健康组显著增加。综上所述,武汉单极虫感染能够引起异育银鲫皮肤微生物失调和致病菌丰富度增加,进而可能导致细菌的继发感染。

摘要: 为探索全雌养殖大黄鱼(Larimichthys crocea)的生长性能及其对连续降温胁迫的响应,研究以正常繁殖的后代作为对照组[雌鱼体重:(14.01±2.52) g;雄鱼体重:(13.87±3.17) g],以全雌大黄鱼作为全雌养殖实验组[体重:(14.09±2.72) g],养殖周期120d,比较对照组雌鱼(CF)、对照组雄鱼(CM)和全雌养殖大黄鱼(AF)的生长性能并分析连续降温胁迫对其鳃和肠道的组织结构、免疫反应及肠道菌群的影响。结果显示,在30d和60d时, AF的体重与CF和CM相比均无显著差异;而在120d时, AF的末体重和增重率均显著高于CM,而与CF无显著差异。进一步的连续降温胁迫实验结果显示,随着温度的连续降低, CF、CM和AF的鳃细胞均出现空泡化、鳃丝严重变形;肠细胞融合、杯状细胞肿胀、黏膜细胞坏死和脱落; AF鳃和肠道组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量与CF和CM变化趋势相同,均呈现先显著升高后显著降低的趋势;在6℃时, AF鳃组织中SOD和CAT活性均显著低于CF和CM;AF肠道中CAT、GSH-Px活性及MDA含量也均显著低于CF和CM;免疫相关基因分析表明,在6℃时, AF鳃和肠道中IL-6基因的表达量均显著低于CF和CM;肠道菌群分析表明,低温胁迫显著影响CF和AF肠道菌群中优势门和优势属的相对丰度,而对CM无显著影响;低温胁迫显著影响CF、CM和AF肠道菌群网络结构组成。综上,全雌养殖大黄鱼具有较快的生长速度;低温胁迫可导致CF、CM和AF的鳃和肠道组织均出现损伤、氧化应激、炎症反应及显著影响肠道菌群网络结构。研究为大黄鱼全雌养殖模式的进一步研究提供参考依据。