摘要: 目的 建立UAS-Irk3-EGFP转基因果蝇品系，为转基因果蝇品系的构建与鉴定提供标准化流程，并为内向整流钾通道（inwardly rectifying potassium channel,Irk） 3基因的功能研究提供果蝇模型支撑，丰富国家果蝇资源。方法 利用PCR技术，从果蝇cDNA文库中扩增出Irk3基因的编码序列（coding sequences,CDS）。利用同源重组技术将其与增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因一起克隆到pUASTattB载体中。通过显微注射技术，将获得的重组质粒注射入果蝇品系attP-25C6的胚胎中，利用红眼表型筛选能表达UAS-Irk3-EGFP的转基因红眼果蝇，然后通过与平衡子果蝇杂交进行背景纯化和平衡保种，最后通过PCR扩增和翅成虫盘免疫荧光染色方法鉴定其正确性。结果 构建了pUAST-attB-Irk3-EGFP重组质粒，并成功获得UAS-Irk3-EGFP转基因果蝇品系。PCR扩增结果证实，Irk3-EGFP基因序列已成功整合到转基因果蝇品系的基因组中。翅成虫盘免疫染色实验发现，翅囊区特异性表达的MS1096-GAL4驱动Irk3基因在翅成虫盘翅囊表达，后隔间特异性表达的hh-GAL4可驱动Irk3基因在翅成虫盘后隔间表达。结论 成功构建了UAS-Irk3-EGFP转基因果蝇品系，为应用半乳糖凝集素4(galectin-4,GAL4)/上游激活序列（upstream activating sequence,UAS）基因表达调控系统深入研究Irk3基因功能奠定了基础。

摘要: 果蝇（Drosophila）作为一种经典的模式生物，它在器官发育中所涉及的分子调控网络、信号通路转导及细胞命运决定机制等方面，均展现出与哺乳动物高度的进化保守性。本文围绕果蝇背血管（心脏）、脂肪体与绛色细胞（肝脏）、马氏管及肾原细胞（肾脏）和气管系统（肺脏）等主要器官或组织，通过多维度对比分析，深入解析了果蝇与哺乳动物在器官发生中核心调控通路、关键基因功能及细胞行为模式上的保守特征，明确了二者发育机制的同源性基础。结合具体的研究实例，进一步阐述了果蝇在人类心血管疾病、代谢性疾病、肾脏疾病及呼吸系统疾病等模型构建中的应用价值，及其在药物靶点高通量筛选、疾病致病机制解析，以及进化发育生物学理论体系完善中的独特作用。果蝇与哺乳动物核心发育调控机制的进化保守性搭建了从基础发育研究到人类疾病转化的关键桥梁，为深入解析人类复杂疾病的分子机制和开发新型治疗策略提供了重要理论支撑与技术平台，对推动发育生物学与转化医学的交叉融合具有重要意义。

摘要: 目的 比较年轻与老年C57BL/6J小鼠感染甲型H1N1流感病毒后肺组织中CD8⁺T细胞在收缩期及记忆性免疫应答期的功能差异。方法 摘取未行流感病毒感染的年轻（3月龄）与老年（24月龄）雌性C57BL/6J小鼠肺组织，制备单细胞悬液，分别用佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA）/离子霉素或分化簇（cluster of differentiation,CD） 3/CD28抗体（T细胞抗原受体/共刺激信号）进行非特异性抗原刺激，通过流式细胞术对肺CD8⁺T细胞行细胞内细胞因子染色（flow cytometry intracellular cytokine staining,ICS）以检测其分泌肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）的能力。以490 PFU PR8流感病毒滴鼻感染年轻和老年C57BL/6J小鼠，28天后进行同源流感病毒的二次感染，于初次感染后第28天（收缩期）、第32天（记忆性免疫应答期）分离肺组织，采用流感病毒特异性MHC-Ⅰ四聚体染色法检测病毒特异性CD8⁺T细胞在肺组织CD8⁺T细胞中的比例，ICS法分析CD8⁺CD44^high T细胞亚群TNF-α、IFN-γ及颗粒酶B（granzyme B）的表达。结果 非特异性抗原刺激后，老年组小鼠的肺组织CD8⁺T细胞中TNF-α、IFN-γ分泌能力显著高于年轻组（P<0.05）。病毒特异性抗原刺激后，收缩期的两组小鼠间病毒特异性CD8⁺T细胞比例以及TNF-α、IFN-γ、granzyme B的表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）；而在记忆性免疫应答期，老年组小鼠的病毒特异性CD8⁺T细胞比例以及TNF-α、IFN-γ、granzyme B的表达水平均显著低于年轻组（P<0.05）。结论 老年小鼠肺部CD8⁺T细胞在非特异性抗原刺激下免疫相关因子表达功能正常，但在抗原特异性记忆免疫应答阶段的免疫相关因子表达功能受损，提示衰老导致CD8⁺T细胞免疫记忆形成或维持发生缺陷。

摘要: 目的 探讨寡肽中草药复合制剂的减肥功效及其机制，为肥胖治疗提供新思路。方法 将23只SPF级雌性SD大鼠随机分为对照组（3只）和造模组（20只），对照组连续6周饲喂普通饲料，造模组连续6周高脂饮食诱导构建单纯性肥胖大鼠模型。造模成功后，随机将造模组分为模型组（10只）和治疗组（10只），治疗组开始通过膏摩寡肽中草药复合制剂（3 g/只/次，1天1次，1次20 min）记作第1天，对照组和模型组不作寡肽中草药复合制剂处理但施以相同的按摩处理，并分别继续饲喂普通饲料和高脂饲料。将模型组和治疗组各10只大鼠分别分为3组，每组为3、3、4只，分别于治疗后第3、6、9天将3组大鼠经异氟烷呼吸麻醉后称重并行心脏采血，继续心脏放血法安乐死后采集腹部皮下脂肪组织（abdominal subcutaneous adipose tissue,aSAT）和肾周白色脂肪组织（perirenal white adipose tissue,pWAT）样本并称重。检测血清甘油三酯（triglycerides,TG）和高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）水平。用Image J软件测量腹部皮下脂肪组织厚度、肾周白色脂肪细胞以及腹部皮下脂肪细胞直径和面积；通过免疫荧光技术观察腹部皮下脂肪组织单位面积的特络细胞（telocytes,TCs）、细胞连接、外泌体数量；通过透射电子显微镜统计腹部皮肤真皮及皮下TCs突起（telopodes,Tps）长度，并观测外泌体囊泡、粗面内质网、线粒体、细胞连接的分布。结果 与对照组相比，造模组大鼠的体重显著增加（P<0.05）。与对照组相比，模型组大鼠血清TG水平显著升高，HDL-C水平显著降低，肾周白色脂肪组织质量显著增加（均P<0.05）。与模型组相比，治疗组大鼠的体重下降率显著增高，肾周白色脂肪组织质量显著降低，血清TG水平显著降低，HDL-C水平显著升高（均P<0.05）。与模型组相比，治疗组腹部皮下脂肪组织厚度、腹部皮下脂肪与肾周白色脂肪组织的细胞直径和面积显著减小（均P<0.05）。与模型组相比，治疗组腹部皮下脂肪组织单位面积TCs数量、腹部皮下脂肪组织TCs外泌体数量、Tps长度显著增加（均P<0.05）；治疗组TCs细胞内线粒体、粗面内质网，细胞连接数均有增多趋势。结论 膏摩寡肽中草药复合制剂通过调节TCs及其细胞间通讯，有效改善肥胖大鼠的血脂紊乱和脂肪堆积等肥胖相关症状。

摘要: 目的 基于系统综述和荟萃分析优先报告条目（Preferred Reporting Items for Systematic reviews and Meta-Analyses,PRISMA）指南，利用Meta分析（Meta-analysis）对文献报告中利用动物实验研究黄芪（纯黄芪制剂）或其成分治疗急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）的药理药效结果进行定量合并，以获得精准可靠的综合效应结论。方法 检索中国知网（China National Knowledge Infrastructure,CNKI）、维普中文科技期刊数据库（VIP Database for Chinese Technical Periodicals,VIP）、万方数据知识服务平台（Wanfang Data Knowledge Service Platform）、中国生物医学文献数据库（China Biomedical Literature Database,CBMdisc）、PubMed以及Web of Science（WOS）数据库中从建库初始到2025年3月关于黄芪（纯黄芪制剂）或其成分治疗AP的动物实验相关文献。使用SYRCLE工具对纳入文献进行偏倚风险评估；对于各研究间的异质性评估遵循Cochrane手册，采用Cochrane's Q检验和I²统计量进行评价；采用留一法进行敏感性分析，并使用Egger's test检验检测发表偏倚风险。结果 本文共检索得到297篇文献，经筛选及评价后，最终纳入19项动物实验进行Meta分析。这19篇文献涵盖了SD大鼠，以及C57BL/6小鼠、BALB/c小鼠和昆明小鼠3个品种的小鼠，SYRCLE评分为3～4分；敏感性分析结果显示未发现有能显著影响异质性指标的研究；Egger's test检验结果为P<0.05，显示研究间存在一定的发表偏倚；Cochrane's Q检验和I²统计量显示研究间异质性较大。19项动物实验相关文献的Meta分析结果显示，纯黄芪制剂（黄芪注射液）能降低AP特异性指标血清淀粉酶（serum amylase,AMY）的水平；黄芪成分可使AMY与脂肪酶（lipase,LPS）的水平降低。黄芪注射液或黄芪成分可使血清中肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α、白细胞介素（interleukin,IL）-6、IL-1β的水平降低，使IL-10的水平升高；并使血清中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）与谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）的水平升高，使丙二醛（malondialdehyde,MDA）的水平降低。黄芪注射液或黄芪成分的高剂量组相较低剂量组更能降低AMY、TNF-α和IL-6的水平，同时升高SOD的水平，但未证明剂量对MDA水平的影响。结论 动物实验结果的循证学分析显示，在SD大鼠、C57BL/6小鼠、BALB/c小鼠、昆明小鼠等多种动物模型中，黄芪注射液或黄芪成分能有效降低AP特异性指标（AMY、LPS）的表达或分泌水平，其机制可能与部分炎症介质有关，包括降低TNF-α、IL-6和IL-1β的水平，升高IL-10的水平；同时也可能干预氧化/抗氧化平衡过程，如升高SOD和GSH-Px的水平，降低MDA的水平；除MDA外，黄芪注射液或黄芪成分对于降低AMY、TNF-α和IL-6水平以及升高SOD水平呈现剂量相关性。但由于现有研究中存在异质性较高、发表偏倚风险、动物模型与人类疾病之间的种属差异等问题，未来仍需进一步开展高质量的临床试验或动物实验研究。

摘要: 围绝经期综合征（perimenopausal syndrome,PS）是女性在绝经前后因雌激素水平减少或波动而出现的月经紊乱、烘热汗出、焦虑抑郁、头痛失眠等一系列生理和心理症状，严重影响生活质量。目前，针对PS的治疗方式主要为绝经激素治疗和中医治疗2种。其中，绝经激素治疗起效速度快，但常常受激素治疗禁忌证和患者接受度的制约。中医治疗则通过整体调节及个体化治疗，在改善潮热、情绪障碍等症状方面具有独特优势，且具有较高的安全性，为不愿或不宜接受绝经激素治疗的患者提供了有效替代选择。然而，中医治疗PS及其并发症的机制阐释不清、循证证据薄弱等问题，限制了其在PS中的进一步应用。因此，构建既能精准模拟复杂证候演变规律，又能系统解析中药多靶点调控机制的病证结合PS动物模型，对于探究PS发生机制、药物的筛选评价，以及中药复方、中药单体和针灸治疗的效果评估尤为重要。本文从PS的中医病因病机、治疗方法与效果，PS动物模型的建模方法与评价指标，以及动物模型在PS中医治疗中的应用3个方面，对近年来中医病证结合PS动物模型的最新研究进行总结与分析，不仅为后期应用PS动物模型开展的实验研究提供了科学支撑，而且有助于深化人们对中医治疗PS效果及其作用机制的理解。

摘要: 目的 选用版纳微型猪近交系品系建立猪的同种异体肾脏移植手术技术体系，通过血常规检测、肝功能和肾功能检测评估受体猪的生理指标和移植肾脏的功能，为同种异体肾移植手术模型的制备提供参考数据。方法 本研究共进行4例同种异体猪肾移植手术，其中1例为健康猪（R）接受单肾移植，2例为猪（DR1和DR2）单肾切除后肾移植，另1例为猪（DR3）双肾切除后肾移植。肾移植术前，采用交叉配血和补体依赖的细胞毒性（complement-dependent cytotoxicity,CDC）实验对供体猪与受体猪进行配型。肾移植术后，定期采集猪外周血样本进行血常规、肝功能和肾功能检测，并通过彩色多普勒超声技术检测移植肾的血流供应情况。实验到达终点后，剖取猪DR1双肾和猪DR3左肾并进行苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色，以评估未移植肾和移植肾的病理变化。结果 受体猪DR1和DR3分别于术后17 d和30 d死亡，受体猪R和DR2在为期30 d的观察期内，状况良好。肝功能和肾功能检测结果显示，猪DR1术后1 d，丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）水平升高（>1 000 U/L），术后7 d达到高峰（1 300 U/L），术后1 d天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）即达到高峰（>3 000 U/L），术后17 d时ALT和AST的含量仍处于较高水平（ALT,500 U/L;AST,700 U/L）；猪R、DR2和DR3的ALT和AST的含量均于17 d左右恢复到正常水平。猪R血清中的肌酐（creatinine,Crea）含量较为稳定，术后未有上升；猪DR1和DR2的Crea含量在术后第1天时有一过性升高，之后逐渐恢复到正常水平（<100μmol/L）；猪DR3的Crea水平在术后2～10 d均低于500μmol/L，术后11～28 d间Crea含量升高，最高达到1 500μmol/L，表明其肾脏逐渐失去功能。超声结果显示，受体猪R的术前阻力指数（resistive index,RI）为0.91，术后24 d肾皮质、髓质血流信号丰富，RI值为0.88，与未移植前的RI值接近。猪DR2术后17 d时的RI值为0.89，肾皮质血流较差，肾髓质较好。猪DR1在术后17 d时，移植肾中未检测到血流信号。HE染色结果显示，猪DR1未移植的健康右肾结构正常，移植的左肾肾小球结构模糊，细胞核溶解，表明左肾在取出之前已失去功能。猪DR3移植的左肾肾小球和肾小管中可见大量红细胞和淋巴细胞浸润，表明该肾脏移植后可能出现了凝血功能异常和排斥反应。结论 本研究以版纳微型猪近交系为实验动物，实施了4例猪-猪的同种异体肾移植手术，术后借助血常规、肝功能、肾功能、彩色多普勒超声以及病理学检测，对受体猪的生理指标和移植肾脏的功能展开监测。本研究构建的猪-猪同种异体肾移植技术体系，可为临床医生开展肾移植手术奠定基础。

摘要: 目的 通过组织动物照度检测实验室能力评价的活动，评定参比实验室检测数据的准确性，并对检测方法提出建议。方法 2024年9月，中国食品药品检定研究院（简称“中检院”）采用公开报名的形式组织参比实验室开展现场检测，共有35家实验室参与、完成现场检测和提交报告。待测样品为中检院实验动物设施内相邻的2间豚鼠饲养间。为降低房间电压波动对动物照度的影响，使用稳压电源供电的板上芯片封装（chip on board）光源，通过调节电压输出来调整亮度。采用分割水平样品对的形式设定2个房间的动物照度，参比实验室参照《实验动物环境及设施》（GB 14925—2023）进行检测。每个参比实验室被赋予了1个3位数随机代码，分别对2个饲养间进行2次测试，并提交现场检测报告、原始记录和照度计检定或校准证书。使用WPS表格12.1汇总数据，通过格拉布斯（Grubbs）检验法（α=0.01）检查数据并剔除离群值，使用SPSS 26.0软件进行数据处理、绘制图形。各参比实验室的中位值作为指定值，稳健标准差作为不确定度，采用稳健z比分数法（实验室内z比分数和实验室间z比分数）评价各实验室检测结果，并从人员、设备、操作环境等方面分析影响结果的因素。结果 在检出水平α=0.01的条件下，未发现离群值，房间1指定值和房间2指定值分别为17.80 lx和19.00 lx。34家实验室结果被评定为“满意”，1家实验室结果为“不满意”。通过分析各家实验室的照度计计量证书，发现部分参比实验室照度计计量位点数量及范围不足，使检测结果未能准确反映设施的实际照度。结论 本次活动发现人员、设备、操作环境等因素对动物照度检测具有不同影响。本次研究仅针对豚鼠饲养间的动物照度，房间内测试环境较昏暗，未来应开发更高效的检测位点筛选方法，并结合具备无线探头和存储功能的照度计来提高检测效率。

摘要: 基因编辑小鼠模型作为现代生物医学研究的核心工具，在疾病机制解析、药物研发及基因功能研究等领域发挥着不可替代的作用。然而，高校在基因编辑小鼠的制备、饲养和数据分析过程中常面临技术复杂、资源分散、管理效率低下等挑战。为解决上述问题，构建整合全链条技术服务与智能化管理体系的基因编辑小鼠一站式服务平台，已成为高校实验动物中心突破现有困境的必然选择。该平台须具备基因编辑小鼠构建、繁殖扩群、生物净化、品系保种、濒危品系拯救等核心功能，形成覆盖“靶点设计-模型构建-种群扩繁-遗传质量控制-生物样本保存”的全流程技术服务体系，以促进高校实验动物中心从提供“单一技术服务”向提供“全流程解决方案”的战略转型。以上海交通大学实验动物中心为例，该中心通过技术优化解决了显微操作成功率低与基因型鉴定缺乏标准化操作流程等技术缺陷，通过可追溯性管理和信息共享解决了课题组小鼠品系管理混乱与重复构建造成的科研经费浪费等问题，通过系统性整合与优化技术服务解决了以往服务体系碎片化可能导致的效率低下、资源浪费、协作困难等问题。本文从集约化管理、服务能力建设和支撑体系建设三个方面，系统探讨了基因编辑小鼠服务平台的建设路径与实践经验，以期为高校同类平台的建设提供可借鉴的管理模式和实施路径。

摘要: 本专栏前2期的文章《无替代，何谈取消》^[1]和《非动物实验替代知多少》^[2]一同从宏观层面梳理了动物实验替代的现状、方法和适用范围，让读者系统、全面了解了动物实验替代的法规、技术等内容。本期，我们将目光聚焦于其中的一个细分领域——类器官，让读者更直观地理解类器官的含义、价值与缺陷等，从而更客观地评价这项技术。