摘要: 对三角帆蚌HSP70基因序列进行全长克隆及其分子生物学分析,并检测其在不同水温刺激下鳃组织中的表达变化。通过高通量转录组测序获得三角帆蚌HSP70基因(Hc HSP70)长片段,采用3′RACE对其进行了3′末端克隆,经拼接得到Hc HSP70 c DNA全长序列。采用多种分子生物学软件对Hc HSP70 c DNA全长序列进行了特征分析,采用实时荧光定量PCR技术检测了其组织分布,并结合Western-blot技术检测蚌鳃中该基因m RNA与蛋白经不同水温刺激后的表达变化。结果显示,Hc HSP70 c DNA全长为2298 bp,其中开放阅读框为1974 bp,编码657个氨基酸。预测分子量大小为71.6 Ku,p H7.0时的理论等电点为5.61。氨基酸序列分析表明,Hc HSP70氨基酸序列含HSP70家族的3个标签序列(I9DLGTTYS16、I197FDLGGGTFDVSIL210和I336VLVGGSTRIPKVQK350),与长牡蛎及泥蚶的HSP70同源性最高(91%)。实时荧光定量PCR检测结果显示,Hc HSP70在鳃、性腺、肝胰腺、外套膜及肌肉等5种被检组织中均有表达,以肝胰腺中的表达水平最高。实时荧光定量PCR与Western-blot技术检测皆表明,蚌鳃组织中Hc HSP70基因与蛋白的表达量在37℃时达到最高,而在40℃水温刺激下表达水平下调至正常值,表明其在适应高温刺激时发挥了重要作用。

摘要: 本研究以Cu²⁺(0、100μg·L^-1)对罗氏沼虾Macrobrachium rosenbergii进行处理,分别在胁迫后的0 h、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h收集血淋巴,检测血细胞中的细胞凋亡率、活性氧（ROS）含量、酯酶活性、一氧化氮（NO）含量以及细胞凋亡执行分子caspase-3和免疫因子α-2M基因的表达。结果显示,血细胞凋亡率和ROS含量的变化趋势一致,在胁迫后的6～48 h显著升高（P<0.05）。酯酶活性在胁迫后的3～48 h均显著下降（P<0.05）,最低值出现在48 h。在胁迫后的6～48 h,NO含量持续增加,并与对照组的差异有统计学意义（P<0.05）。caspase-3的相对基因表达量在胁迫后的6～48 h均显著升高（P<0.05）,并在24 h达到最高值。在胁迫后的12 h,α-2M基因的表达量显著升高（P<0.05）并达到峰值,在24 h有短暂降低,但与对照组相比仍显著增加（P<0.05）,在48 hα-2M基因的表达量显著降低（P<0.05）。相关性分析显示,血细胞凋亡率和NO以及ROS都呈显著的正相关（P<0.001）。实验表明,Cu²⁺胁迫显著抑制了机体的酯酶活性,诱导NO和ROS的产生以及免疫相关基因α-2M的表达来对抗Cu²⁺胁迫带来的损伤。随着胁迫时间的延长,过高浓度的NO和ROS对机体自身造成了伤害,并诱导凋亡相关基因caspase-3的表达,最终导致细胞凋亡,说明Cu²⁺对虾类具有免疫抑制性和毒性。NO和ROS的升高可能是细胞凋亡的主要诱因。

摘要: 目的研究美洲大蠊Periplaneta americana醇提物对大鼠血清和卵巢抗氧化指标的影响。方法 17只成年雌性SD大鼠适应饲养7 d后,随机分为3组:对照组(9 m L·kg^-1,生理盐水)5只、低剂量组(9 m L·kg^-1,0.03 g·m L^-1美洲大蠊醇提物)6只、高剂量组(9 m L·kg^-1,0.09 g·m L^-1美洲大蠊醇提物)6只。每2天灌胃1次,共饲养30 d。实验结束后,采集大鼠血清和卵巢,检测血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、一氧化氮（NO）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）指标和卵巢中SOD、GSH-PX、CAT基因表达的变化。结果与对照组相比,高剂量组（P=0.085）、低剂量组（P=0.091）血清中的NO含量均有降低的趋势;高剂量和低剂量的美洲大蠊醇提物均显著提高了大鼠血清中的SOD含量（P<0.05）,同时,高剂量组血清中的MDA含量显著降低（P<0.05）;此外,高剂量组和低剂量组卵巢SOD基因的表达显著升高（P<0.05）。结论美洲大蠊醇提物升高了大鼠血清SOD的含量,降低了NO和MDA的含量,同时,还提高了卵巢SOD基因的表达,说明美洲大蠊醇提物对大鼠卵巢具有一定的抗氧化应激功能。