摘要: 为研究CADMs(Cell adhesion molecules)在草鱼构建抵御病害感染的第一道防线中发挥的作用,用RTPCR和RACE方法结合测序分析,在草鱼脑组织中检测到了该基因家族成员cadm2b基因的4条不同的c DNA全长序列。序列比对结果表明这4条全长c DNA在5′端的序列完全相同,在3′端的3个局部区域有不同片段的缺失。因此,可以确定这4条不同的m RNA是cadm2b的不同剪接体。这4条不同的剪接体被分别命名为cadm2b、cadm2b X2、cadm2b X3和cadm2b X6。cadm2b的c DNA序列全长1669 bp,开放阅读框(ORF)1203 bp,编码400个氨基酸。cadm2b X2的c DNA序列全长2783 bp,开放阅读框长1323 bp,编码440个氨基酸;cadm2b X3的c DNA序列全长2755 bp,开放阅读框1296 bp,编码431个氨基酸;cadm2b X6基因的c DNA序列全长2649 bp,开放阅读框1161 bp,编码386个氨基酸。根据碱基序列所进行的氨基酸序列和蛋白结构预测显示这4个CADM2b蛋白亚型都具有CADM家族保守的4个功能区,但其C端的蛋白结合位点存在差异。CADM2b具有近膜4.1蛋白结合位点和Ⅱ型PDZ蛋白结合位点,CADM2b X2、X3缺失了PDZ蛋白结合位点,而CADM2b X6则同时缺失4.1蛋白和PDZ蛋白的结合位点。实时定量RT-PCR检测结果显示cadm2b剪接突变体是该基因m RNA的主要形式。半定量RT-PCR和套式PCR实验检测结果表明cadm2b基因在草鱼成体脑中高水平表达,在肝、肾、心脏和肌肉组织中有微量表达。这种表达模式提示草鱼中CADM2b主要是由非免疫细胞,而不是由免疫肥大细胞合成分泌的细胞黏附因子,可能通过介导免疫肥大细胞与病原靶细胞的黏附而起非特异性抵御病害感染的作用。

摘要: 播娘蒿是极端耐寒的冷诱导植物,研究其低温胁迫下的冷响应基因对于揭示其抗寒性具有重要意义.根据拟南芥At KIN1和At KIN2同源比对,设计同源引物进行播娘蒿KIN基因克隆,通过RACE技术克隆得到Ds KIN1基因,利用Vector NTI11.5软件对其进行序列分析,采用Realtime-PCR测定Ds CBF1、Ds CBF2、Ds COR和Ds KIN1基因在不同处理方式[整株低温处理、同一植株局部低温处理和局部未受低温处理(两部分植株)]下各时间段(0.2 h、0.5 h、1 h、2 h、6 h、12 h、24 h)的表达,采用String数据库预测分析与Ds KIN1相互作用的蛋白.结果显示,Ds KIN1基因序列全长为462 bp,开放阅读框ORF长度为198 bp,编码66个氨基酸,分子量(Mr)为6.61×10~3,理论等电点为9.10,亲水性好.播娘蒿Ds CBF1和Ds CBF2在0.2 h开始表达,在2 h达到最大,随后下降.在冷诱导0.2 h后,Ds CBF调控的耐寒基因Ds COR和Ds KIN1基因开始表达,均呈现上调的趋势.整株、局部冷诱导植株与同一植株上未受低温胁迫部位的耐寒基因Ds COR和Ds KIN1表达模式类似.此外发现与Ds KIN1相互作用的蛋白大部分为低温诱导蛋白、盐和渗透压胁迫响应的信号蛋白、与渗透调节有关的家族蛋白、RING-H2锌指蛋白2B以及未知蛋白等.本研究说明播娘蒿局部冷诱导时,冷信号可进行传递,使未受冷诱导部位获得耐寒性能.

摘要: G蛋白偶联受体161(GPR161)是G蛋白偶联受体家族孤儿受体家族成员,在哺乳动物晶状体发育调节和神经胚形成中具有重要作用。近年来研究发现该蛋白罕见地拥有类似支架蛋白的结构特征,暗示其信号转导机制不同于其他G蛋白偶联受体。本研究以家鸡Gallus gallus为动物模型,探究GPR161基因序列信息、分子遗传进化关系以及其组织表达图谱。家鸡GPR161基因编码区序列全长1 566 bp,编码具521个氨基酸的前体蛋白。序列分析显示,家鸡GPR161基因编码区与人Homo sapiens、小鼠Mus musculus、斑马鱼Danio rerio的氨基酸相似度分别为83.0%、82.6%、65.8%。分子进化遗传分析结果显示,GPR161基因在家鸡与斑马鱼的进化关系比家鸡与人或小鼠都更为疏远。利用荧光定量PCR探究家鸡GPR161基因在各组织的表达分布,结果显示,家鸡GPR161基因mRNA在精巢或卵巢、大脑、心脏、肌肉中有较高表达。本研究是鸟类中关于GPR161基因的首次报道,研究结果为进一步探究GPR161基因在鸟类中的生理效应提供参考。

摘要: 促性腺激素释放激素(GnRH)由GnRH编码,是调节动物繁殖活动的核心神经内分泌物质。布氏田鼠Lasiopodomys brandtii是我国内蒙古东部草原区的害鼠之一,具有明显季节性繁殖特征,但其繁殖调控机制仍未完全明确。本研究克隆了来自布氏田鼠下丘脑的GnRH cDNA序列,使用实时荧光定量技术检测了不同组织、不同年龄阶段GnRH mRNA水平。结果表明,克隆获得GnRH cDNA序列497 bp,包含开放阅读框273 bp,编码90个氨基酸和1个终止密码子的GnRH前体。DNA序列比对和氨基酸序列同源性分析表明,布氏田鼠下丘脑GnRH基因属于Ⅰ型,与橙腹田鼠Microtus ochrogaste GnRH1相似性最高。GnRH mRNA在下丘脑、垂体、睾丸、肾上腺、肠、膀胱均有表达。雄鼠血清睾酮水平和雌鼠血清雌二醇水平在出生后8周、36周、80周处于高水平,显著高于4周龄鼠,但除80周龄鼠下丘脑GnRH表达量处于高水平,8周龄、36周龄鼠GnRH表达量与4周龄鼠差异均无统计学意义。推测4周龄鼠下丘脑GnRH受GnRH调节剂的中心抑制,而8周龄、36周龄鼠下丘脑GnRH受性类固醇介导的反馈抑制调控,当年龄增加至80周龄,性类固醇介导的反馈抑制消失或者应答时间延长。本研究结果为探究布氏田鼠繁殖调控规律提供了更多基础资料。

摘要: PDK1是PI3K/Akt信号通路中的一个重要的激酶。在哺乳动物中,PI3K/Akt信号通路是一条保守的通路,通过激活下游的因子对糖代谢、脂肪代谢以及蛋白质代谢,细胞的增殖、分化、凋亡等起调节控制作用。本研究基于东北林蛙转录组数据,从中鉴定出PDK1基因3条Unigene序列,并通过RACE法克隆了PDK1基因的全长cDNA,命名为rdPDK1,其全长为1 990 bp,开放阅读框长1 674 bp,编码557个氨基酸。进行生物信息学分析,推测该基因编码的蛋白质相对分子质量63.7 kD,等电点为7.21。该蛋白第82～344个和443～549个氨基酸是2段保守结构域STKc激酶域和PH调节结构域。同源性分析表明rdPDK1蛋白与HsPDK1蛋白氨基酸序列一致率为79%,相似率为100%;与MmPDK1蛋白氨基酸序列一致率为80%,相似率为100%。本研究结果有望为进一步研究东北林蛙PI3K/Akt信号通路中PDK1基因的特性及功能奠定基础。