摘要: 为研究环境依赖型性别决定的分子机制,研究把温度依赖型性别决定(Temperature sex determination,TSD)的黄喉拟水龟(Mauremys mutica)Dmrt1基因作为研究对象,通过黄喉拟水龟雌雄性腺转录组数据筛选和克隆了Dmrt1 cDNA全长序列, RACE-PCR结果显示该序列全长1811 bp,包括3′端非编码区572 bp,开放阅读框1110 bp,共编码370个氨基酸。氨基酸序列多重比对显示,黄喉拟水龟Dmrt1基因与红耳龟(Trachemys scripta)同源性最高,达97.57%;与中华鳖(Pelodiscus sinensis)Dmrt1同源性达75.54%。与小鼠(Mus musculus)Dmrt1同源性达63.25%,与中华鲟(Acipenser sinensis)Dmrt1同源性最低,为21.62%。定量PCR(RT-qPCR)结果显示,Dmrt1在成年黄喉拟水龟卵巢中表达较少,在精巢中表达较为明显,但其他体组织中表达量极少,且Dmrt1在25℃产雄温度下胚胎发育的19—22期表达量逐步增加且显著高于32℃产雌温度下表达量。原位杂交分析显示,黄喉拟水龟Dmrt1主要在支持细胞中表达,在精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞中有少量表达。以上研究结果表明, Dmrt1基因可能参与黄喉拟水龟性别决定和雄性性腺分化过程,参与雄性性腺的发育过程,研究为进一步揭示黄喉拟水龟温度依赖型性别调控机制奠定了基础。

摘要: 为研究Amh基因在TSD(Temperature-dependent sex determination,温度依赖型性别决定)中的功能,文章以红耳龟Trachemys scripta为TSD动物模型,分析了Amh在胚胎性腺中的精细表达特征和细胞定位;通过基因功能缺失和获得研究手段,验证了Amh在TSD中的具体功能。表达分析结果显示, Amh基因在性腺分化启动前的第15期便已呈现产雄温度(Male-producing temperature, MPT)性腺高表达; AMH蛋白主要定位在MPT性腺sertoli前体细胞上,而在各个发育时期的FPT(Female-producing temperature,产雌温度)性腺中仅检测到极其微弱的Amh mRNA和蛋白表达信号。RNA干扰实验显示,敲低Amh后的MPT性腺出现了雄性向雌性完全性逆转,雄性分化因子Sox9明显下调,雌性分化因子Foxl2和Cyp19a1显著上调;相反地,异位表达Amh后的FPT性腺则转向睾丸方向分化, Foxl2和Cyp19a1表达被抑制, Sox9表达上升。上述研究表明, Amh是启动红耳龟早期睾丸分化必需且充分的关键因子,处于TSD雄性分化分子通路上游。

摘要: 文章以黄喉拟水龟(Mauremys mutica)受精卵为材料,通过无壳孵化技术,对黄喉拟水龟胚胎发育进行活体观察,并记录胚胎发育全过程。在孵化温度为(32±0.5)℃时,孵化期平均为54d。在没有卵壳、没有外界水分和氧气的情况下,黄喉拟水龟胚胎能够完成发育全过程并成功孵出稚龟。根据胚胎发育的形态特征、时间将整个发育过程划分为1—19期。1—7期以卵黄囊血管丛、心脏形态与跳动作为分期依据;而8—19期主要以头部、四肢、背甲、颜色和尿囊等作为分期依据。无壳孵化技术在龟类胚胎发育观察中的成功应用,显示其有广泛的潜在应用前景。

摘要: 为对Hox基因在龟鳖目物种中进行系统地序列比较分析和进化研究，文章对目前具有染色体水平的龟鳖目基因组进行了Hox基因的鉴定,序列特征、进化和转录组分析。研究结果表明龟鳖物种的Hox基因簇是高度保守的。非重复序列的缺失导致鳖科HoxB9—HoxB13基因间区相对龟科短了10 kb。大量Hox基因编码区发生了鳖科或龟科特异的序列替换、插入和缺失。胸部骨骼发育相关的Hox基因在鳖科祖先发生了快速进化和受到正选择。Hox基因的表达具有组织、时期特异性,主要在胚胎时期的顶端外胚层嵴、背甲嵴和性腺表达。研究为龟鳖目Hox基因不同胚胎时期的多组学及表达调控分析提供了靶标,也为进一步厘清龟鳖物种演化创新提供了参考。

摘要: 乌龟大部分时间生活在水中,但要经常游出水面呼吸空气和摄食,夏秋时节有爬在岸边晒太阳的习性,冬、春两季有蛰伏休眠的习性。乌龟产卵季节和产卵窝数主要受温度制约,在湖南产卵时间为5—8月,产卵高峰出现在7月上旬,产卵多在夜间进行,龟卵一般产在高出水平面30厘米以上的泥土中。龟无护卵和孵卵的本能,龟卵在自然界靠地温孵出稚龟来,但人工孵化可使龟卵的孵化率提高到87.6％以上,孵化时间可以缩短到64天左右。