摘要: 龟嗜皮菌(Austwickia chelonae)感染爬行类、鸟类、哺乳类等,造成野生动物和家养动物患皮肤病甚至死亡,近年来这种病原体在Ⅰ级保护动物鳄蜥(Shinisaurus crocodilurus)的救护种群中暴发。传统的病原检测方法费时耗力。本文基于龟嗜皮菌全基因组序列开发了特异性高、方便快捷的龟嗜皮菌检测方法,并应用于鳄蜥的皮肤病风险预测。本研究开发的3对检测龟嗜皮菌的特异引物中,AC3引物的使用效果最好。

摘要: 圈养草食性野生动物产生的大量粪便堆积容易造成环境污染,且处理耗时耗力。如果能筛选、利用粪食性金龟对草食性野生动物粪便进行处理,无疑具有一定的应用价值。本研究于2019年8和9月,以南京红山森林动物园3种圈养草食性野生动物,亚洲象(Elephas maximus)、黇鹿(Dama dama)和长颈鹿(Giraffa camelopardalis)的新鲜粪便为诱饵,在南京紫金山研究了粪便对粪食性金龟的引诱效果。本实验分为2个阶段,第1阶段采用更换陷阱法,第2阶段采用放置陷阱法,采用单因素方差分析(One-way ANOVA)对粪食性金龟诱捕数量进行检验。第1阶段更换陷阱法共引诱采集粪食性金龟4 597头,隶属于1科5属7种,优势种为中华嗡蜣螂(Onthophagus sinicus)和短亮凯蜣螂(Caccobius brevis),占总捕获量的比例分别为48.79%和30.95%。第2阶段放置陷阱法共引诱采集粪食性金龟3 512头,同样隶属于1科5属7种,物种与阶段1实验结果相同。粪食性金龟对3种野生动物粪便显示多食性特征,在3种粪便中取食活动的有效时间段主要集中在12 d内,活动时间较短,粪便放置第7天,基本不存在粪食性金龟的活动。粪食性金龟群落的Shannon-Wiener多样性指数和Pielou均匀度指数在亚洲象粪便中相对较高。本研究表明,动物园3种圈养草食性野生动物粪便对粪食性金龟具有较好的引诱效果,未来需进一步研究粪食性金龟对粪便的处理效果。

摘要: 红耳龟(Trachemysscriptaelegans)是世界上最危险的100种入侵物种之一,该种对环境适应能力极强。目前尚未见有关红耳龟细胞体外培养的研究报道,本研究旨在探索和建立快速稳定的红耳龟胚胎成纤维细胞分离培养体系,为进一步从细胞层面研究红耳龟对极端环境的耐受机制提供材料和方法支撑。本研究取发育至13或14期的红耳龟胚胎,采用酶消化法和差速贴壁法获得红耳龟胚胎成纤维细胞,在体外进行原代培养和传代培养;采用噻唑蓝(MTT)比色法分别绘制红耳龟胚胎成纤维细胞在不同温度、接种浓度和血清浓度下的生长曲线;采用反转录PCR对培养的红耳龟胚胎成纤维细胞进行分子水平的鉴定;采用脂质体转染法对红耳龟胚胎成纤维细胞进行基因转染。结果表明:1)红耳龟胚胎成纤维细胞呈典型的梭形、不规则星形或多边形,达到一定密度时呈多层生长,排列紊乱,随着传代次数的增加,细胞体积增大,梭形细胞有拉长趋势,细胞可至少传至15代;2)红耳龟胚胎成纤维细胞在3034℃条件下的生长状态良好,其生长速率随着温度的升高而增高;其接种密度不宜低于1.25×104个/cm2;其最佳血清浓度为10%;3)反转录PCR检测到成纤维细胞标记基因vim和acta2在红耳龟胚胎成纤维细胞中表达;4)脂质体转染法可以介导外源绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白进入到红耳龟胚胎成纤维细胞内表达,转染效率约为30%。本研究成功地在体外分离培养了红耳龟胚胎成纤维细胞,该细胞系可应用于外源基因转染和表达。

摘要: 设置3个盐度处理组(5‰盐度组、10‰盐度组和15‰盐度组,后面简称盐度5组、盐度10组和盐度15组)和一个对照组(以等体积经曝晒处理的自来水作为对照组)研究红耳龟(Trachemys scripta elegans)肌肉中游离氨基酸以及血液和肝中可溶性蛋白含量在急性盐度胁迫0 h、24 h和96 h的变化情况。结果显示,在24 h和96 h时,盐度组红耳龟肌肉中总游离氨基酸含量显著高于对照组(P<0.05),并且在红耳龟肌肉中天冬酰胺、组氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺和谷氨酸含量最为丰富。在不同取样时间下,谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、色氨酸、缬氨酸和甲硫氨酸的含量在3个盐度处理组间均没有显著差异(P>0.05);但在不同盐度组中天冬酰胺、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸和天冬氨酸含量随着时间的延长均上升。通过主成分分析发现,起主要作用的游离氨基酸是丝氨酸、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸和甘氨酸。方差分析发现,丝氨酸、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸和组氨酸对盐度和时间均响应显著(P<0.05),且盐度和时间之间存在显著的交互作用(P<0.05)。在24 h和96 h时,盐度10组和盐度15组血液中可溶性蛋白含量均显著低于对照组(P<0.05);而盐度5组肝中可溶性蛋白含量在24 h时显著高于对照组(P<0.05),在96 h时显著低于对照组(P<0.05)。结果表明,在急性盐度胁迫下,红耳龟可以通过肌肉中氨基酸的代谢以及血液和肝中可溶性蛋白的分解,产生游离氨基酸进入到血液中以维持机体的渗透压平衡。研究结果为红耳龟外来入侵生理适应机制的研究提供了重要参考,并进一步完善了对龟类渗透压调节机制的认识。

摘要: 通过对广州市花地湾花鸟鱼虫市场贸易龟鳖类进行为期3年27次调查,共记录了9科29属41种或亚种,包括鳖科(Trionychidae)2属2种,两爪鳖科(Carettochelyidae)1属1种,龟科(Emydidae)4属5种,淡水龟科(Geoemydidae)10属18种,侧颈龟科(Chelidae)3属3种,动胸龟科(Kinosternidae)2属3种,鳄龟科(Chelydridae)2属2种,陆龟科(Testudinidae)4属6种,海龟科(Cheloniidae)1属1种。其中,国内龟鳖类共13种,外来物种共28种。受保护种类30种,所占比例达73.17%,部分龟类来源为野外捕捉。大量实体商家转入互联网进行精确营销,尤其是针对高价值的濒危种类,未来将着重对该隐蔽领域进行深入调查。