摘要: 目的 应用2,4-二硝基氟苯（2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB）涂抹KM小鼠背部及耳后皮肤，建立特应性皮炎（atopic dermatitis,AD）氧化应激小鼠模型，以评价晚期糖基化终末产物受体-核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin域包含蛋白3轴（receptor for advanced glycation end products-NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3 axis,RAGE-NLRP3 axis）在AD氧化应激中的调控作用，从而为AD提供潜在的治疗靶点。方法 选取20只SPF级雌性KM小鼠，随机分为对照组（Control）和实验组（DNFB），每组10只。Control组小鼠背部和耳后涂抹丙酮-橄榄油基质（丙酮∶橄榄油=3∶1）,DNFB组小鼠背部和耳后涂抹0.5%DNFB（按100 mL丙酮-橄榄油基质加入0.5 g DNFB比例配制），每日1次，连续14 d。分别在处理后第2、4、6、9、12、14天时对小鼠的皮损症状严重程度进行评分，并在处理第14天时对小鼠的搔抓行为和耳缘厚度进行评价。实验结束当天，用游标卡尺测量小鼠双耳厚度，测量3次取平均值，以评估耳部肿胀程度。经HE染色来观测各组小鼠背部皮肤组织内的细胞形态和结构变化。通过实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和免疫组织化学染色法来检测各组小鼠皮肤组织中RAGE mRNA和蛋白的表达情况。并用实时荧光定量PCR法检测氧化应激相关分子NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteine-dependent aspartate-specific protease 1, caspase-1)、白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)的mRNA表达变化。结果 处理第14天，Control组和DNFB组小鼠背部皮损评分分别为（0.20±0.42）分和（9.93±1.30）分（P<0.000 1），小鼠搔抓行为评分分别为（5.00±2.05）次和（49.26±8.49）次（P<0.000 1），耳缘厚度分别为（213.00±11.87）µm和（765.93±140.47）µm(P<0.000 1);DNFB组小鼠背部处置部位皮肤出现明显干燥、脱屑、增厚等情况。HE染色结果显示，DNFB组小鼠皮肤炎症反应明显，符合AD的病理特征。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示，与Control组相比，DNFB组小鼠皮肤组织中RAGE mRNA表达水平明显增加（P<0.05）,RAGE蛋白表达水平也明显增加（P<0.01）。免疫组织化学染色结果显示，与Control组相比，DNFB组小鼠皮肤组织角质层增厚，间质内成纤维细胞纤维化增生，RAGE蛋白在小鼠皮肤组织中明显增加（P<0.01）。实时荧光定量PCR检测结果显示，DNFB组小鼠皮肤组织中NLRP3、caspase-1和IL-1βmRNA表达水平均明显增加（P<0.01）。结论 通过涂抹DNFB成功构建了AD小鼠氧化应激模型。该模型提示，RAGE可能通过调控NLRP3炎症小体与IL-1β释放，形成氧化-炎症级联反应，从而促进AD发生。这表明，RAGE可能是AD治疗的潜在靶点。

摘要: 目的 构建痘苗病毒天坛株（vaccinia virus Tiantan strain,VTT）感染AG6小鼠脑病动物模型。方法 通过以0.01的感染复数（multiplicity of infection,MOI）感染Vero细胞，扩增VTT并进行浓缩和滴定，孵育72 h后，收集含病毒的细胞进行浓缩；将浓缩的病毒悬浮液连续稀释（10倍梯度）并加入到含有形成致密单层Vero细胞的6孔板中进行噬斑实验，计数每孔形成的空斑数目，并根据样品的稀释倍数计算病毒滴度。将14只5～6周龄的AG6小鼠（雌雄各半，并按性别分笼饲养）随机分为对照组（n=3,PBS）、低接种量组（n=6,1×105 PFU）和高接种量组（n=5,5×105 PFU）。将小鼠经异氟烷吸入麻醉后，进行滴鼻感染。每日观察各组小鼠精神状态，记录其体重及死亡情况，并在感染后第13天经尾静脉注射2%伊文思蓝（Evans Blue）(4 mL/kg体重)以评估各组小鼠血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）的破损情况，然后收集小鼠脑组织样本进行星形胶质细胞和小胶质细胞活化的免疫荧光分析。结果 纯化后的VTT滴度为1×10～7 PFU/mL。与对照组相比，低接种量组小鼠的体重无明显变化，且未出现死亡；高接种量组小鼠在感染后第5天开始体重显著减轻（P<0.05），并伴有致死结果。感染后第13天，低接种量组小鼠的脑组织中未检测到伊文思蓝外渗，高接种量组小鼠的嗅球区域显示出明显的蓝色染色，提示BBB破裂。免疫荧光分析显示，感染后第13天，低接种量组小鼠嗅球区域星形胶质细胞和小胶质细胞没有明显增殖，高接种量组小鼠中可观察到明显的胶质细胞活化。结论 成功建立VTT感染AG6小鼠的脑病动物模型，其特征是小鼠BBB损伤和特异性定位于嗅球区域的反应性胶质增生（表现为星形胶质细胞和小胶质细胞增生）。

摘要: 目的 探讨腰舒逐瘀方调节微RNA-17-5P(microRNA-17-5P,miR-17-5P)/鼠双微基因2(murine double minute 2,MDM2)/p53轴对大鼠椎间盘纤维环细胞增殖和凋亡的影响及潜在分子机制。方法 取8周龄SPF级雄性SD大鼠的椎间盘纤维环组织，采用酶消化法和机械分散法分离获取纤维环细胞。将纤维环细胞分为6组：C组为空白对照组，纤维环细胞不经白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)处理，直接在RPMI 1640完全培养液中正常培养；β组为10 ng/mL IL-1β处理纤维环细胞24 h构建的退变模型组；β+B组为IL-1β+空白血清组，该组纤维环细胞先经IL-1β处理构建退变模型，后用含5%空白血清的RPMI 1640培养液处理24 h;β+W组为IL-1β+腰舒逐瘀方含药血清组，该组纤维环细胞先经IL-1β处理构建退变模型，后用含5%腰舒逐瘀方含药血清的RPMI 1640培养液处理24 h;β+I组为IL-1β+miR-17-5P inhibitor组，该组纤维环细胞先经IL-1β处理构建退变模型，后转染miR-17-5P inhibitor;β+I+W组为IL-1β+miR-17-5P inhibitor+腰舒逐瘀方含药血清组，该组纤维环细胞先经IL-1β处理构建退变模型，后转染miR-17-5P inhibitor，最后使用含5%腰舒逐瘀方含药血清的RPMI 1640培养液处理24 h。采用CCK-8实验检测各组细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡情况；采用实时荧光定量PCR检测细胞内miR-17-5P、MDM2mRNA、p53 mRNA表达量；采用蛋白质印迹法检测细胞中MDM2、p53蛋白表达量。双萤光素酶报告系统分析miR-17-5P和MDM2的靶向关系。结果 与C组相比，β组细胞存活率显著下降（P<0.001），细胞凋亡率显著升高（P<0.001）,miR-17-5P、p53 mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.001）,MDM2 mRNA及蛋白表达水平显著下降（P<0.001）。与β组相比，β+W组、β+I组、β+I+W组细胞存活率显著升高，凋亡率显著下降，miR-17-5P、p53mRNA及蛋白表达水平显著下降，MDM2 mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.001），且β+I+W组上述指标的变化幅度更大（P<0.001）。环状RNA相互作用组预测miR-17-5P与MDM2的3'非翻译区（3'untranslated region,3'UTR）有特异性结合位点，转染miR-17-5P模拟物可显著降低与之共转染的含野生型MDM2 3'UTR萤光素酶报告质粒的萤光素酶表达水平（P<0.05），但对含突变型MDM2 3'UTR萤光素酶报告质粒共转染细胞的萤光素酶表达无显著影响（P>0.05）。结论 腰舒逐瘀方通过下调miR-17-5P水平，促进MDM2蛋白合成，进而下调p53表达，促进大鼠椎间盘纤维环细胞增殖，抑制细胞凋亡。

摘要: 目的 旨在深入探讨脊髓压迫损伤和半横断损伤小鼠模型在亚急性至慢性期（1～28 d），局部微环境中相关基因的表达次序及其分子机制，从而揭示其脊髓修复的分子特征，并为脊髓损伤治疗靶点的选择提供理论依据。方法 选用36只8～9周龄SPF级ICR小鼠，随机分为假手术对照（CTR）组、脊髓半横断损伤（HSCI）组和脊髓压迫损伤（SCC）组，每组12只。CTR组小鼠经麻醉后，仅行椎板切除术暴露T₉～T₁₀节段的硬脊膜，并保持其完整，在空气中暴露10 min后缝合切口，不施加任何损伤干预；HSCI组小鼠在CTR组操作的基础上，通过显微器械横断70%的T₉节段脊髓组织构建脊髓半横断损伤模型；SCC组小鼠也在CTR组操作的基础上，采用自制压迫器（30 g实心小铁棒）持续压迫T₁₀节段脊髓10 min构建脊髓压迫损伤模型。在术后第1、3、7、14、21及28天，采用改良BBB（Basso-Beattie-Bresnahan）评分法评估各组小鼠运动功能的恢复情况；在术后第7、14天，将小鼠麻醉后，取损伤段脊髓组织，通过RNA测序（RNA-Seq）和富集分析来解析脊髓损伤小鼠模型中特异的分子网络演变，并利用实时荧光定量PCR法验证关键基因的表达情况。结果 BBB评分结果显示，SCC组小鼠的运动功能恢复情况显著优于HSCI组，其BBB评分在4周内呈持续上升趋势且高于HSCI组（P<0.001）。基于RNA-Seq差异表达基因的基因本体（gene ontology,GO）和京都基因与基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）富集分析显示：与CTR组相比，SCC组在术后第7天，细胞外基质相关基因显著上调（P<0.05），而轴突引导相关基因显著下调（P<0.05）；在术后第21天，SCC组免疫调控和视黄醇信号通路相关基因被显著激活（P<0.05）。相比之下，HSCI组在术后第7天，炎症和免疫反应基因显著上调（P<0.001），神经元分化和突触形成相关基因则显著下调（P<0.001）；在术后第21天，细胞-基质连接和N-甲基-D-天门冬氨酸受体相关基因显著上调（P<0.001）。此外，与SCC组相比，HSCI组在损伤后第7天和第21天的GO和KEGG富集分析中表现出不同的通路富集特征。术后第7天，HSCI组中的NOD样受体信号通路以及补体和凝血级联反应相关基因显著上调（P<0.001）；而在术后第21天，细胞外基质-受体相互作用和神经活性配体-受体相互作用通路相关基因被显著激活（P<0.001）。最后，实时荧光定量PCR验证结果与RNA-Seq结果高度一致，进一步确认了SCC组和HSCI组关键基因表达趋势的差异。结论 脊髓压迫损伤与脊髓半横断损伤模型可能驱动了不同的修复路径：SCC模型中部分轴突的保留使其更倾向于组织修复，而脊髓半横断损伤模型则需协调更复杂的分子网络以达成新的平衡。这一发现进一步深化了对脊髓损伤异质性调控机制的理解。

摘要: 目的 基于自研设备“多通道小动物长时连续烟雾暴露的自动控制系统”，采用新型香烟烟雾连续暴露方法，建立稳定可靠的慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）小鼠模型，并进行表型评估分析，为研究COPD发病机制及防治策略提供动物实验基础。方法 20只6周龄雄性C57BL/6J小鼠被随机分成对照组和模型组，每组10只。模型组小鼠每日进行6 h连续烟雾暴露（6支香烟/d，持续12周），对照组小鼠无干预。小鼠每隔2周进行一次体重监测；造模结束后，对小鼠进行小动物CT(micro-CT)活体成像；小鼠安乐死后，用ELISA法检测小鼠血清与支气管肺泡灌洗液中炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平；对肺组织进行HE染色和Masson染色检测，观察肺组织形态和炎症细胞含量的变化，计算小鼠肺泡平均截距（mean linear intercept,MLI），以综合评估小鼠模型的COPD临床特征。结果 从第4周开始，与对照组相比，模型组小鼠体重显著降低（P<0.01）。ELISA检测结果显示，与对照组相比，模型组小鼠血清和支气管肺泡灌洗液中的IL-6质量浓度分别增高了27.2%和140.0%，差异均具有统计学意义（P<0.01）；与对照组相比，模型组小鼠血清和支气管肺泡灌洗液中的TNF-α浓度分别增高了16.7%(P<0.01)和19.3%(P<0.05)。HE染色结果显示，与对照组相比，模型组小鼠肺泡壁变薄，肺泡出现不同程度扩张，部分肺泡间隔断裂，融合成肺大泡，肺泡数量减少，支气管管壁变厚，管腔变窄，周围有炎症细胞浸润，MLI显著增大（P<0.01）。Masson染色结果显示，模型组小鼠出现胶原沉积及支气管重塑。Micro-CT结果显示，模型组小鼠出现局部高密度影，呈现出慢性支气管炎的典型特征。结论 自研装置可实现长期连续烟雾暴露，构建的COPD小鼠模型病理特征与临床症状高度吻合，可为COPD研究提供高效可靠的工具。