摘要: 目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。

摘要: 目的基于TaqMan建立小鼠腺病毒(MAdV)特异的荧光定量PCR检测方法,用于调查长爪沙鼠和小鼠等实验动物中MAdV感染情况。方法从NCBI下载小鼠腺病毒(MAdV-A和MAdV-3)基因组序列,比对分析后选择保守性较好的基因设计引物和探针。筛选最佳引物对和探针,对其特异性、敏感性、重复性和稳定性进行验证,运用所建立的方法对长爪沙鼠和野鼠的共41份样本进行检测。结果经特异性和灵敏度鉴定,在设计的3对引物探针中确定一对最佳引物探针MAD-3,可区分小鼠腺病毒与猴腺病毒、禽腺病毒和树鼩腺病毒等24种病原,MAdV质粒DNA最低检测限为4.5 copies/reaction;MAdV纯病毒液和病毒/组织模拟样本的最低检测限均为440 copies/reaction。结论建立的Taq Man荧光定量PCR检测方法特异、灵敏和稳定,可用于大鼠、小鼠、长爪沙鼠等实验动物及鼠源性生物制品MAdV的检测。

摘要: 目的观察某天然山泉水对实验性高脂大鼠血脂及血流变学的影响。方法 24只SD大鼠根据血清总胆固醇(TC)水平随机分为某天然山泉水组和模型对照组。采用高脂饲料喂养建立高血脂大鼠模型,在给予高脂饲料的同时,某天然山泉水组自由饮用某天然山泉水,模型对照组自由饮用自来水,连续饮用60 d后,采血测定血脂和血流变学指标。结果与模型对照组比较,某天然山泉水组甘油三酯(TG)显著降低(P<0.05),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)极显著降低(P<0.01);与模型对照组相比,某天然山泉水组切变率为200s-、100s-和50s-时,全血黏度均极显著降低(P<0.01),切变率为10s-时,全血黏度显著降低(P<0.05);红细胞压积显著降低(P<0.05)。结论某天然山泉水具有降低实验性高脂大鼠甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇的作用,也具有改善血流变学的作用。

摘要: 目的建立及鉴定Pumilio1/Pumilio2(Pum1和Pum2)双基因条件性敲除的小鼠模型,为进一步研究PUF家族在哺乳动物精子发生中的生物学功能奠定基础。方法将构建的Pum1条件性敲除和Pum2条件性敲除的两个品系小鼠进行交配并繁殖,最终繁殖成功的子代小仔Pum1和Pum2两个基因均为纯合子。对子代以剪趾方式进行编号,提取子代小鼠脚趾或鼠尾基因组DNA,用PCR法和琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型。结果 Pum1和Pum2双基因条件性敲除的小鼠模型繁殖成功,同时获得更多PUF家族双基因条件性敲除的小鼠。结论成功建立了Pum1和Pum2双基因条件性敲除的小鼠模型;正确的交配繁殖策略和鉴定方法是获得PUF家族双基因条件性敲除小鼠的有效途径。

摘要: 心力衰竭是许多心血管疾病的最终阶段,严重威胁着人类的健康。大鼠心梗后心衰模型为深入研究心力衰竭的病理生理提供了实验基础。目前制备大鼠心梗后心衰的方法包括冠状动脉结扎、电凝法、冠脉微栓塞法、冷冻法、射频消融等方法,血流动力学、超声心动图及BNP等为筛选合格的心衰模型提供了评价技术手段。本文就大鼠心梗后心衰模型及心功能评价作了简要综述,为心力衰竭研究提供一些线索。