摘要: 目的建立同时检测小鼠微小病毒（MVM）和小鼠细小病毒（MPV）的荧光定量PCR方法,并进行初步应用。方法比对NCBI上发表的MVM和MPV基因组序列,设计1对引物和探针,可同时检测MVM和MPV。考察MVM-MPV引物探针的特异性和灵敏度,并对178份清洁级小鼠粪便DNA样本进行检测。结果 MVM-MPV荧光定量PCR方法最佳线性范围为10～9¹0～4拷贝/μL,标准曲线的线性关系良好,R2值可达0.99,灵敏度为101拷贝/μL,特异性强。应用MVM-MPV探针对178份小鼠粪便DNA检测,结果为2份阳性样本,经MVM、MPV特异性探针鉴定,2份阳性样本均为MPV感染。阳性样本经全基因组测序后与NCBI网站上MPV（NC₀01630.1）序列比对,一致率为96%。结论建立的MVM-MPV荧光定量PCR方法,能够有效快速地同时检出小鼠细小病毒和小鼠微小病毒。

摘要: 目的观察白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)在大鼠颌下腺的表达情况以及在海洛因依赖时表达的改变。方法成年雄性SD大鼠,按配对原则随机分为正常对照组(normal control group,NCG)、盐水对照组(saline control group,SCG)、海洛因依赖组(heroin dependence group,HDG)。于大鼠腹部皮下注射海洛因药液,2次/d(上午8时,下午3时),至成瘾后取颌下腺组织,应用免疫组织化学Envision法及图像分析法进行研究。结果 1.在正常大鼠,IL-1、TNF阳性细胞分布于颌下腺导管系统,其中以颗粒曲管(Granular Convoluted Tubule,GCT)细胞为主,腺泡细胞为阴性;2.与正常大鼠相比,盐水对照组大鼠颌下腺IL-1、TNF阳性细胞的数量及平均灰度值均无明显改变(P>0.05);3.海洛因依赖组大鼠颌下腺IL-1、TNF阳性细胞的分布未见明显变化,但细胞数量增加(P<0.05);4.图像分析结果显示IL-1、TNF阳性细胞的平均灰度值低于正常及盐水对照组大鼠(P<0.05)。结论海洛因依赖期间大鼠颌下腺IL-1、TNF的合成和分泌增加,海洛因对颌下腺神经内分泌功能有明显影响。

摘要: 目的探讨GLP试验条件下的大鼠不同采血方法及优缺点,保证GLP试验的顺利开展。方法使用2 100只大鼠,分别通过眼眶静脉丛采血法、颈外静脉采血法、腋窝静脉采血法和腹主静脉采血法四种方法进行采血试验。结果眼眶后静脉丛采血法首次采血成功率95.2%,操作简单快速,但易污染。颈静脉采血法首次采血成功率89.3%。腋窝静脉采血法首次采血成功率82.8%,可作为颈静脉采血法的补充。腹主静脉采血法成功率100%,操作简单,采血量大。结论在GLP试验中,应根据不同的要求灵活选用或组合采血方法,保证完成试验的同时又满足动物福利的要求。

摘要: 目的建立快速诊断鼠脑心肌炎病毒感染的荧光定量RT-PCR方法。方法根据鼠脑心肌炎病毒(EMV)PEC9毒株全基因组序列(Gen Bank登录号:DQ288856.1),设计一对特异性引物和TaqMan探针,建立EMV的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法,进行条件优化,检测其特异性,敏感性,稳定性。结果建立的荧光定量PCR方法,标准曲线的线性关系良好,r2值可达0.99,敏感性最低检测限为1个拷贝数,高于普通PCR方法 1000倍,其特异性强,与其他常见感染的小鼠病毒株均无特异性扩增,批内和批间变异系数均小于2%。利用该方法对上海市120份小鼠心肌样品进行检测,未检测到阳性感染。结论本研究为鼠脑心肌炎病毒感染的分子检测,为制定国家标准提供良好的方法。

摘要: 目的分析Mylpf基因在糖尿病长爪沙鼠6种组织中的表达水平,进而探究长爪沙鼠糖尿病发生的分子机制。方法选取糖尿病长爪沙鼠和正常沙鼠各6只,使用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测动物的骨骼肌、肝脏、脂肪、肾脏、心脏和脑组织中Mylpf的mRNA和蛋白表达水平。结果 Real-time PCR的结果表明,在骨骼肌、心脏和脑组织中,Mylpf在糖尿病组mRNA表达水平高于对照组。在脂肪组织和肝脏组织中糖尿病组mRNA表达水平低于对照组。在肾脏组织中两组mRNA表达水平基本相同。Western blotting结果显示,在骨骼肌中Mylpf在糖尿病组蛋白表达水平高于对照组,且有统计学差异,在心脏和脂肪组织中Mylpf在糖尿病组蛋白表达水平低于对照组,在肾脏组织中蛋白表达水平基本相同,在肝脏和脑组织中没有检测出。结论 Mylpf与长爪沙鼠糖尿病的发生有一定相关性,该基因对长爪沙鼠糖尿病的影响可能主要发生在骨骼肌和心脏组织中。