摘要: 铁蛋白广泛存在于生物体内，能够使细胞内的铁元素含量保持相对稳定且能参与机体免疫反应。近年来因细菌侵染，黑龙江林蛙（Rana amurensis）种群数量出现下降趋势，本研究探究铁蛋白基因在细菌感染的林蛙中的表达模式，期望可以为黑龙江林蛙抗细菌感染的机制研究提供参考。本研究首先采用PCR技术扩增黑龙江林蛙铁蛋白H亚基基因的编码区序列并对其进行生物信息学分析；再应用实时荧光定量PCR技术（RT-qPCR）检测黑龙江林蛙被嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）侵染后，铁蛋白H亚基基因在其肝、脾、肾、皮肤以及肌肉组织中的转录水平变化情况；最后采用免疫荧光检测技术，分析嗜水气单胞菌侵染后，黑龙江林蛙铁蛋白H亚基蛋白表达情况。结果表明，该基因编码区长度534 bp，编码177个氨基酸；对该基因氨基酸序列进行分析，其与欧洲林蛙（R. temporaria）相应基因同源性最高，达到98.37%;RT-q PCR结果显示，铁蛋白H亚基基因在黑龙江林蛙组织中广泛存在，在嗜水气单胞菌侵染后，铁蛋白H亚基m RNA在黑龙江林蛙肝、脾、肾、皮肤以及肌肉组织中的表达均显著上调（P <0.01）。免疫荧光检测结果发现，在感染嗜水气单胞菌后，铁蛋白H亚基蛋白在黑龙江林蛙肝和肌肉组织的胞质中均有不同程度表达。综上结果表明，黑龙江林蛙铁蛋白H亚基基因会通过上调表达来响应细菌性感染，由此推测该基因参与了黑龙江林蛙的细菌性免疫应答。

摘要: 采用亲和素-生物素复合物(ABC)免疫组织化学法,对黑龙江林蛙(Rana amurensis)胚后发育各时期胃肠道中5-羟色胺(5-HT)细胞的发生过程进行了研究。结果显示,黑龙江林蛙胃中的5-羟色胺阳性细胞最早在第38期被检测到,小肠和大肠最早出现在第41期。从41期开始,5-羟色胺细胞分布于胃、小肠和大肠中,在同一发育时期中,胃部分布密度最大。同一部位在不同发育时期5-羟色胺细胞的分布密度不同,其中胃内5-羟色胺细胞在38期和43期分布最多,分布密度分别为1.8±0.62和1.8±0.89,45期分布数量最少,分布密度为1.1±0.31;小肠中5-羟色胺细胞在41期和43期分布最多,分布密度均为1.2±0.41,在44期和45期分布最少,分布密度分别为0.7±0.49和0.7±0.47;大肠中5-羟色胺细胞在第42期分布最多,分布密度为1.2±0.41,在44期分布最少,分布密度为0.7±0.47。5-羟色胺细胞最早分布在上皮细胞之间,随着胃肠道发育的日渐完善,在上皮基部或腺泡上皮之间也有分布。细胞形态变化不明显,有圆形、椭圆形、锥体形、长梭形和三角形。推测5-羟色胺阳性细胞的出现时间、形态以及分布型是与黑龙江林蛙的个体生长发育需要、胃肠道各段的功能以及食性转变相适应的。

摘要: 应用Wright染色法对桓仁林蛙、东北林蛙和黑龙江林蛙的血细胞进行比较,将所得数据用SPSS软件统计。结果表明:桓仁林蛙、东北林蛙、黑龙江林蛙的血细胞形态、数量上存在差别,这可能与其生活环境和分类地位密切相关。

摘要: 为初步了解林蛙油重金属的污染现状,采集东北林蛙、黑龙江林蛙和中国林蛙的林蛙油,以湿法消化法消化,利用荧光比色法测定锡含量、原子吸收法分别检测镉、铬、铜和铅的含量,并采用单因子污染指数及每周可耐受摄入量分别评价5种重金属在3种林蛙油中的污染程度并对其食用安全进行评价。结果表明,该批次样品中东北林蛙蛙油重金属含量分别为锡10～20、镉50～90、铬670～720、铜100～250和铅60～90μg/kg;黑龙江林蛙蛙油重金属含量分别为锡12～22、镉80～110、铬700～820、铜150～250和铅80～100μg/kg;中国林蛙蛙油重金属含量分别为锡2～10、镉30～60、铬590～700、铜800～130和铅30～60μg/kg,5种金属分别在3种林蛙油内的含量差异显著。单因子污染指数结果显示3种林蛙油中锡、铅的含量均未超过轻度污染指数;铬、镉的含量,除中国林蛙蛙油中铬为轻度污染,其余皆为中度污染,根据样本数据可知仅黑龙江林蛙油镉超标40%,其余皆在食品污染物限量国家标准范围之内。根据每周可耐受摄入量评定,其结果显示3种林蛙油的食用风险依次是铬>镉>铜>铅>锡。因此本批次所检测的林蛙油可食性良好,但仍有必要监测林蛙油中镉、铬的含量。

摘要: 为了解环境温度对东北林蛙(Rana dybowskii)和黑龙江林蛙(R.amurensis)体温调节能力的影响,研究了2种林蛙在不同时间(07:00、10:00、13:00、16:00、19:00)、室温及梯度变温(10、12、14、16、18、20℃)等条件时的体温变化规律。结果表明:2种林蛙体温调节均无显著的性别差异,林蛙体温与环境温度的变化趋势一致。环境温度最高时,2种林蛙的体温也达到最高,体温与环境温度显著正相关;体温的变化幅度、回归方程的斜率和等温点3个参数可以作为判断体温调节能力的重要指标。东北林蛙的体温日变化幅度大于黑龙江林蛙。体温与环境温度的线性回归分析表明,东北林蛙斜率的绝对值大于黑龙江林蛙,东北林蛙的等温点低于黑龙江林蛙。与黑龙江林蛙相比,东北林蛙的体温波动较大,其体温调节能力较低。