摘要: 研究采用冷休克方法诱导黄姑鱼(Nibea albiflora)三倍体并进行鉴定,进一步采用组织学和生殖相关基因表达分析比较了三倍体黄姑鱼的性腺发育特征。研究结果表明:(1)在受精后2.5min以3℃进行10min的冷休克处理,冷休克处理组的受精率和孵化率分别为(70.31±4.49)%和(21.5±6.63)%,其受精率和孵化率显著低于二倍体对照组;(2)经流式细胞仪倍性检测和染色体核型分析发现,三倍体的DNA含量为二倍体的1.5倍,染色体数目为72条,而二倍体的染色体数目为48条,三倍体的比例为100%;(3)三倍体的生殖腺指数显著低于二倍体,进一步通过组织切片观察发现三倍体的精巢和卵巢发育较二倍体滞后,在12月龄时,二倍体精巢和卵巢处于Ⅴ期,而三倍体精巢和卵巢分别处于Ⅲ期和Ⅰ期;(4)三倍体精巢的dmrt1和vasa基因及三倍体卵巢的cyp19a基因表达量均显著低于二倍体(P<0.05);三倍体卵巢的vasa基因表达量也比二倍体低(P>0.05)。综上结果表明:研究通过冷休克处理成功诱导了黄姑鱼三倍体;三倍体的性腺发育较二倍体滞后,育性明显降低。

摘要: 为探究青霉素和氟苯尼考对黄姑鱼(Nibea albiflora)肝脏和肠道组织学结构、抗氧化能力及肠道菌群的影响,实验以黄姑鱼为研究对象,设置不同浓度的青霉素组(25、50和75 mg/kg)和氟苯尼考组(25、50和100 mg/kg),以基础饲料为对照,投喂期间,分别于5d后和10d后进行样品采集,检测肝脏和肠道组织学结构、抗氧化酶活性、相关免疫基因表达、肌肉中抗生素残余及肠道菌群组成变化。结果表明:(1)低浓度和中浓度的青霉素或氟苯尼考对黄姑鱼肠道和肝脏组织学结构没有明显影响,而高浓度组的肝脏和肠道组织均出现明显损伤;(2)无论处理5d或10d,与对照组相比,高浓度组肝脏中SOD、CAT和GSH-PX的活性均显著降低,而MDA含量显著升高;在肠道中,高浓度组的SOD活性均显著降低,而GSH-PX活性和MDA含量均显著升高;(3)肝脏和肌肉中均检测到2种抗生素残余,且高浓度的青霉素(54.48μg/kg)或氟苯尼考(1039.47μg/kg)处理10d后肌肉中抗生素残余均超出了最大残留限量;(4)无论处理5d或10d,高浓度的青霉素或氟苯尼考均显著抑制肠道中Arp2/3、ZO-1和Claudin4基因的表达水平,而促炎基因IL-6和TNF-α的表达水平显著上升,抑炎基因IL-10、TGF-β的表达水平显著下降;(5)青霉素或氟苯尼考对黄姑鱼肠道菌群的α-多样性无显著影响;变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度均显著增加,而厚壁菌门(Firmicutes)的相对丰度均显著降低。综上,饲料中添加低浓度的青霉素或氟苯尼考对黄姑鱼肝脏和肠道形态结构、抗氧化酶活性及肠道相关结构基因、免疫基因和肠道菌群结构均无显著影响;而高浓度会引起肝脏和肠道组织损伤、氧化应激反应、黏膜免疫应答及影响肠道菌群多样性和组成。

摘要: 从创伤弧菌(Vibrio vulnificus)中提取菌体脂多糖(lipopolysaccaride,LPS)和外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)并制备福尔马林灭活全菌苗(FKC),腹腔注射接种黄姑鱼。分别在注射第0、7、14、21和28天后测定了受免鱼血清中凝集抗体效价、血清溶菌酶活性和血液白细胞吞噬活性,以及免疫28d后的相对免疫保护率。结果表明,3种抗原对黄姑鱼均有较强的免疫原性。免疫后,免疫组血清凝集抗体效价逐渐增高,第28天时最高;溶菌酶活性(LMZ)、白细胞吞噬活性(PP)和吞噬指数(PI)显著升高(P<0.01),第21天达到峰值,随后逐渐下降。各组之间比较表明,受免后7、14、21和28d,免疫组黄姑鱼凝集抗体效价、PP、PI和LMZ显著高于对照组(P<0.05),LPS和OMP组凝集抗体效价低于FKC组,LPS和OMP组的相对免疫保护率高于FKC组,各组间免疫保护率大小顺序为LPS组>OMP组>FKC组>对照组。

摘要: 为探究黄姑鱼(Nibea albiflora)幼鱼肠道菌群变化、关键细菌类群及其与养殖水体细菌群落的相关性,实验以黄姑鱼幼鱼为研究对象,分别于36、46、66、86和106日龄采集黄姑鱼肠道内容物样品和同时期的养殖水体菌群样品,利用16S rRNA高通量测序手段,基于生物信息学方法,系统解析黄姑鱼幼鱼肠道菌群的组成、结构、时序变化、核心物种及其与生长和养殖水体菌群的相关性。研究结果表明,不同日龄黄姑鱼肠道菌群中Chao1指数均显著低于同时期养殖水体,而Shannon指数均显著高于同时期养殖水体;不同日龄黄姑鱼肠道菌群中Chao1指数呈现先显著升高后逐渐稳定的趋势,而Shannon指数则呈现相反的趋势;随着黄姑鱼幼鱼的生长,养殖水体细菌群落中Chao1指数呈现先下降后上升的显著趋势(P<0.05);而Shannon指数呈现先上升后显著下降的趋势(P<0.05)。PERMANOVA和ANOSIM分析揭示,随着黄姑鱼幼鱼的生长,其肠道菌群结构显著改变(P<0.05),同时,幼鱼肠道菌群与同时期的养殖水体细菌群落结构差异显著(P<0.05)。黄姑鱼幼鱼肠道菌群中优势菌门为拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria),其中,拟杆菌门的相对丰度在46日龄后显著升高(P<0.05);相反,厚壁菌门和变形菌门的相对丰度在46日龄后显著降低(P<0.05)。在养殖水体中,优势菌门为拟杆菌门、髌骨菌门(Patescibacteria)和变形菌门;其中,拟杆菌门和髌骨菌门的相对丰度呈现显著升高的趋势,而变形菌门的相对丰度显著下降。在科水平上,黄姑鱼幼鱼肠道菌群中优势菌科为毛螺菌科(Lachnospiraceae)、Muribaculaceae、普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)和链球菌科(Streptococcaceae),其中毛螺菌科、普雷沃氏菌科和链球菌科的相对丰度在46日龄后显著降低(P<0.05),而Muribaculaceae的相对丰度显著升高(P<0.05)。在养殖水体中,优势菌科为Clade＿I、黄杆菌科(Flavobacteriaceae)和红杆菌科(Rhodobacteraceae),其中, Clade＿I相对丰度呈现显著下降趋势(P<0.05),而黄杆菌科和红杆菌科的相对丰度呈现先上升后下降的趋势(P<0.05)。普鲁克分析和溯源分析揭示,黄姑鱼幼鱼肠道菌群与其养殖水体细菌群落相关性不显著(P<0.05)。生境特异性分析、随机森林分析和Mantel检验等方法相结合,揭示了与黄姑鱼生长相关的关键细菌类群。此外,通过黄姑鱼幼鱼肠道菌群的体外分离培养获得2株与其生长相关的潜在原籍益生菌菌株。综上,本研究揭示了黄姑鱼幼鱼肠道菌群的时序变化、关键细菌类群及其与养殖水体细菌群落的相关性,为黄姑鱼幼鱼原籍益生菌的研发提供参考依据。