摘要: 为了研究梅花鹿S100A4(S100 calcium binding protein A4)基因在鹿茸生长过程中的作用。用RT-PCR法从生茸骨膜细胞总RNA中克隆了梅花鹿S100A4基因,在NCBI中对基因序列进行比对;将完整的基因序列与逆转录病毒表达载体pLEGFP-C1重组,获得了重组质粒pLEGFP-S100;用脂质体法将pLEGFP-S100与pVSV-G(被膜载体)共转染包装细胞GP2-293,获得重组病毒上清液,感染角柄骨膜细胞后逆转录病毒携带的基因进入宿主细胞。结果显示:S100A4基因是一个相对保守的基因,与多个物种的匹配度达到90%;重组逆转录病毒载体pLEGFP-S100可以形成重组逆转录病毒粒子,将S100A4基因导入靶细胞,并表达S100A4与GFP(Green fluores-cent protein)的融合蛋白。

摘要: 麂属(Muntiacus)是亚洲热带、亚热带分布的中小型森林鹿科动物类群(马世来等,1986)。全球现生麂类共有13种(IUCN,2018),中国记载有8种(蒋志刚等, 2017)。由于在分类上长期以来存在的混乱与变动,麂属一些物种在中国的分布与状况尚不明朗,东喜马拉雅区域特有的贡山麂(M.gongshanensis)便是其中之一。贡山麂由马世来等(1990)根据在云南贡山县、福贡县采集以及附近地区购买的标本描述并发表,其主要特征为

摘要: 水鹿是我国二级重点保护野生动物。2016年5月到2017年5月,利用红外相机技术在四川鞍子河自然保护区的非盐井生境和盐井生境(盐场)对水鹿的群体结构、日活动节律及舔盐活动节律进行了研究。基于设置的108个红外相机,共收集到水鹿在非盐井区域的独立照片620张,盐井区域的独立照片401张。水鹿日活动节律在不同季节具有较大差异:春季日活动高峰出现在17:00～20:00;夏季无明显日活动高峰;秋季日活动高峰出现在17:00～19:00;冬季日活动高峰分别出现在08:00～10:00、17:00～19:00、23:00～02:00。舔盐活动高峰出现在22:00～04:00,雌雄个体舔盐活动节律大致相同(重叠指数Δ=0.738)。水鹿有单独舔盐和集群舔盐两种方式,其中单独舔盐出现频率较高(占总访问频次的57.6%);舔盐的群体一般大小为2～7只,但以2只的群体居多(占总访问频次的21.5%)。在非盐井区域和盐井区域独立照片中水鹿的雌、雄出现比例分别为2.05∶1和2.66∶1,表明雌鹿可能更需要补充盐分。本研究结果为保护区内水鹿的保护管理提供了基础的科学依据。

摘要: 为研究梅花鹿扣针蛋白5(Fibulin 5, FBLN5)在鹿茸再生过程中的作用,本研究通过RT-PCR获得了梅花鹿FBLN 5的cDNA编码区,并对其进行生物信息学分析。同时利用RNA干扰技术(RNA interference, RNAi)下调了梅花鹿角柄骨膜致敏区(Potentiated pedicle periosteum, PPP)细胞中FBLN5基因表达,并研究了基因表达下调后PPP细胞条件培养液对HUVEC细胞增殖的影响。结果显示:(1)梅花鹿FBLN5 cDNA编码区长1 347 bp,编码448个氨基酸;(2)生物信息学软件分析显示,梅花鹿FBLN5蛋白含有一个跨膜区,一段23个氨基酸的信号肽序列,vWA_Matrilin、cEGF和EGF_CA等重要的功能结构域;(3)构建了梅花鹿FBLN5基因的RNAi重组质粒并获得了一条能有效下调目的基因效率达88.72%的靶序列pLVTHM-FBLN2,MTT结果显示PPP细胞FBLN5基因表达量下调后,所获细胞条件培养液可显著促HUVEC细胞增殖,推测FBLN5可能参与了鹿茸再生过程中的血管生成及稳态维持等过程。

摘要: 半乳糖凝集素-1(Galectin-1)是最先被报道的哺乳动物半乳糖凝集素,存在于多种组织和细胞内,参与细胞的粘附、增殖、凋亡和炎症反应等多种生理病理过程,并且与免疫系统的调节和肿瘤的发生发展密切相关。鹿茸是哺乳动物中罕见的能够周期性的脱落和再生的附属器官,作为研究哺乳动物器官再生的新模型受到关注。鹿茸再生是一个基于干细胞的过程,定位于角柄骨膜的干细胞是鹿茸再生的基础,Galectin-1在角柄骨膜细胞(pedicle periosteum cell, PPC)中高度表达,提示其在鹿茸再生中发挥着重要的作用。由于尚没有商用的鹿Galectin-1蛋白及其抗体,为进一步研究Galectin-1在鹿茸再生中的生物学功能,需要制备相应的蛋白和抗体,本实验将梅花鹿Galectin-1基因与pET28a连接,并将重组质粒pET28a-Galectin-1转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达。用Ni-NTA Agarose亲和层析纯化融合蛋白,免疫兔制备多克隆抗体。酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法检测抗体效价、Western blot检测抗体特异性、细胞免疫荧光检测Galectin-1在角柄骨膜细胞中的表达情况。结果表明,本实验成功诱导重组原核表达载体pET28a-Galectin-1在BL21(DE3)中表达,通过Ni纯化获得融合蛋白。ELISA结果显示,抗体效价达到1∶64000,Western blot结果表明该抗体特异性良好,细胞免疫荧光显示Galectin-1在PPC全细胞中表达。本实验获得了纯化的鹿Galectin-1蛋白和特异性较好的多克隆抗体,为揭示Galectin-1在鹿茸再生调控中的作用提供了重要的实验材料。