摘要: 为揭示鱼类IFN-γ的生物学功能,研究从日本鳗鲡(Anguilla japonica)中克隆获得了IFN-γ基因,命名为Aj IFN-γ。Aj IFN-γ具有脊椎动物IFN-γ的典型特征:包括4外显子/3内含子的基因结构、C端的IFN-γ特征性氨基酸基序和1个核定位信号,以及6个α-螺旋反向平行构成的二级结构。Aj IFN-γ在日本鳗鲡所有组织中均低水平转录表达,其中肝脏中表达量最高,其次是皮肤和头肾。Poly I:C刺激和迟缓爱德华氏菌感染均可显著诱导Aj IFN-γ在鳃、头肾、体肾和(或)脾脏中的转录表达,表明Aj IFN-γ能够参与日本鳗鲡抗菌和抗病毒的免疫过程。此外,研究还克隆了Aj IFN-γ基因的5′调控区序列共1536 bp,并构建了一系列Aj IFN-γ5′调控区删节突变体,分析其启动子活性,结果表明,上游–240/+136区域中含有起始Aj IFN-γ转录的关键启动子调控元件,–1062/–814区域存在转录的正调控元件,而–1252/–1062区域存在转录的负调控元件。上述结果进一步丰富了鱼类IFN-γ的基础知识。

摘要: 为研究TLR21(Toll like receptor 21)在低等脊椎动物中的功能及表达调控机制,我们扩增获得了日本鳗鲡TLR21(Aj TLR21)c DNA序列,其编码的蛋白具有TLR家族的共同特征。Aj TLR21基因结构与其他鱼类和两栖类TLR21相同,由单个外显子编码。荧光定量结果显示,Aj TLR21在血液、鳃、脾脏、中肾等11个组织/器官中转录表达,其中在血液中表达量最高。经Poly I:C诱导后8h,Aj TLR21在脾脏和中肾中的表达量显著性上调;诱导后16h,Aj TLR21在血液、鳃、肠和脾脏中的表达量显著性上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,在Aj TLR21 5′上游调控序列–1179 bp到+117 bp存在Poly I:C调节的正调控元件。经Edwardsiella tarda诱导后16h和72h,Aj TLR21分别在血液和中肾组织的表达量显著性上调,表明Aj TLR21同时也参与了抗细菌免疫应答,其在机体免疫系统中的功能具有多样性。研究对于理解日本鳗鲡Aj TLR21的免疫学功能具有重要的理论意义和应用价值。

摘要: 为开展鳗鲡病毒性疾病流行病学调查和病原生物学研究,进行鳗鲡病毒的分离、培养和鉴定,研究采用组织块培养法,以欧洲鳗鲡肾脏组织为材料,建立了欧洲鳗鲡肾脏细胞系(European eel kidney cell line, EEK),EEK形态呈类纤维状,经过约12个月的培养,已成功传至38代。通过对其培养液、血清浓度和培养温度等条件进行优化,发现DMEM/F12、L15培养液均适合其正常生长和增殖,而在MEM培养液中无法正常生长;在5%—15%FBS(Fetal Bovine Serum)浓度范围内,其生长速度随FBS浓度的升高而增快,当FBS浓度高于20%或过低于5%时,其生长速率有所减慢;在22—27℃时生长良好,但当温度低于17℃和高于32℃时细胞生长速度明显减慢。对EEK细胞进行鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus, AnHV)敏感性实验,结果表明该细胞系对鳗鲡疱疹病毒敏感,可产生明显的细胞病变。EEK的建立丰富了鱼类细胞系的种类,为鳗鲡病毒性疾病诊断、病毒性病原学研究和病毒疫苗研制提供了重要实验材料。

摘要: 研究于2015—2017年对珠江流域12个站位的日本鳗鲡(Anguilla japonica)及花鳗鲡(Anguilla marmorata)种群资源量与洄游路线等进行了初步调查,并对其资源量状况、空间分布特征与环境影响因素等进行了分析。结果显示在近3年的调查时间里,共采集到日本鳗鲡41尾,平均年龄为(4.2±1.3)龄, 93%的个体未性成熟;采集到花鳗鲡12尾,平均年龄为(4.3±1.0)龄, 83%的个体未性成熟。日本鳗鲡在珠江水系最远能分布到红水河的合山江段,其在渔获物中的数量百分比与重量百分比均低于百分之一;花鳗鲡最远能分布到西江的石龙江段,其在渔获物中的出现率低于两百分之一。珠江水系鳗鲡野生资源极度匮乏,保护形势十分严峻。同时发现日本鳗鲡空间分布主要受河流分维和河流宽度的影响;花鳗鲡的空间分布主要受河流宽度和水深的影响。该研究是珠江水系野生渔业资源长期调查的一部分,研究结果将对鳗鲡资源的保护和可持续利用具有指导意义。

摘要: 为了探讨日本鳗鲡(Anguilla japonica)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52, NAGase)的分离纯化及其酶学性质, 通过硫酸铵沉淀分级分离、Sephadex G-100分子筛凝胶柱层析和DEAE-32离子交换柱层析纯化NAGase, 经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-PAGE鉴定酶的纯度、测定酶蛋白亚基分子质量; 以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖为底物, 研究NAGase催化反应的动力学参数, 探讨其酶学性质。结果表明: 日本鳗鲡肠道NAGase纯酶制剂比活力为2517.40 U/mg, 酶蛋白亚基分子质量为69.98 kD, 酶的最适pH、最适温度、米氏常数K_m和最大反应速度V_(max)分别为6.0、60℃、0.336 mmol/L和7.634 μmol/(L·min); 酶在pH 4.8—7.2较稳定, 在温度60℃以下具有较好的热稳定性, 在65℃以上酶迅速失活。Mg~(2+)、Ca~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)和Fe~(3+)对NAGase表现出不同程度的激活作用, Na~+、Li~+和Ba~(2+)对酶活力几乎没有影响, Zn~(2+)、Fe~(2+)、Pb~(2+)和Hg~(2+)对酶活力有不同程度的抑制作用, Hg~(2+)对酶活力抑制作用最强, 1.0 μmol/L Hg~(2+)可使酶活力丧失83.69%。化学修饰法研究表明, 精氨酸胍基不是日本鳗鲡NAGase的必需基团, 而赖氨酸?-氨基、半胱氨酸巯基、组氨酸咪唑基、丝氨酸羟基和色氨酸吲哚基是酶的必需基团, 二硫键是NAGase活性所必需的。综上所述, 实验采用的日本鳗鲡肠道NAGase分离纯化方案有效可行, 酶活力易受环境中酸碱度、温度和金属离子的影响, 且与其他不同动物来源的NAGase具有相似的必需基团。