摘要: 用常规方法从患典型白底板病黄沙鳖的心脏、肝脏等处进行细菌的接种分离,通过人工感染确定分离菌株的致病性,API 20NE、16S rRNA基因序列分析进行病原菌鉴定和确定其系统发育地位,K-B纸片扩散法进行药敏试验,PCR检测病原菌的6种毒力基因。试验结果,共分离到13株病原菌,其中嗜水气单胞菌9株,温和气单胞菌4株。在9株嗜水气单胞菌中,有5株与Aeromonas hydrophila ATCC 7966菌株亲源关系最近,4株与Aeromonas hydrophila北京株QDC01的亲源关系最近;而4株温和气单胞菌与Aeromonas sobria ATCC43979的亲源关系最近。药敏试验结果,仅头孢哌酮对13株病原菌都高度敏感,来源于不同养殖区域的病原菌药敏结果相差较大。6种毒力基因的阳性率,Aer、Act和ahp均为100%,hly和Alt为92.31%,ahal为76.92%;毒力基因型共有4种,嗜水气单胞菌主要为hly+Aer+Alt+Act+ahal+ahp+基因型,而温和气单胞菌主要为hly+Aer+Alt-Act+ahal+ahp+基因型,同时携带hly基因的菌株其致病力更强。

摘要: 研究利用中华鳖为研究模型进行爬行类生殖细胞发育分化成熟等生物学研究,克隆了中华鳖vasa基因的c DNA序列,全长3865 bp,包括5′端非编码区90 bp,3′端非编码区1699 bp,开放阅读框长2076 bp,共编码691个氨基酸。中华鳖Vasa氨基酸序列包含DEAD-box家族蛋白8个保守保守功能域,在N末端有4个RGG重复序列和2个GG富集区,与小鼠Vasa蛋白的同源性较高(72%)。荧光定量PCR的结果表明,中华鳖vasa m RNA主要精巢和卵巢中表达,其他体组织中均难检测到表达。卵巢冰冻切片原位杂交结果显示:中华鳖vasa m RNA在生殖细胞中特异表达;在卵子发生过程中的不同发育期卵母细胞中呈现动态的变化。即vasa m RNA在初级卵母细胞及生长期卵母细胞中表达最强,且均匀分布在细胞质中,随着卵母细胞的逐渐增大,信号逐渐减弱,直至在成熟的卵母细胞中几乎检测不到表达信号,说明vasa可能在中华鳖早期卵母细胞发育中起重要作用。同时,vasa基因可作为中华鳖生殖细胞分子标记物,根据其m RNA的表达水平来鉴别不同发育时期的卵母细胞。研究结果为进一步开展中华鳖胚胎生殖细胞发育及配子生成,特别是研究中华鳖,乃至爬行类原始生殖细胞(Primordial Germ Cells,PGCs)的起源、迁移、分化等研究奠定了基础。

摘要: 2016年夏杭州某中华鳖(Pelodiscus sinensis)养殖场出现大量发病,病鳖呈厌食、反应迟钝、四肢无力、池边独游、濒死前不停摇头等病症,死亡率20%以上。用营养琼脂从典型症状濒死中华鳖分离到革兰阳性短杆状,芽孢近中生或中生的分菌株; API 50 CHB对分离菌株T91-1鉴定结果显示与蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)参考菌株ATCC 14579 97.4%相似; T91-116S rDNA和gyrB基因序列与ATCC 14579相似度为99%,确认T91-1为蜡样芽孢杆菌。T91-1在羊血平板呈典型β溶血,牛奶平板上出现明显透明圈,表明存在溶血性和胞外蛋白酶类毒素。用T91-1肌肉注射感染健康中华鳖LD50为4.91×10~5CFU/ind.,死亡鳖出现与自然发病鳖类似症状;感染发病中华鳖血和肝印/涂片瑞氏-姬姆萨染色可见组织间隙有大量芽孢杆菌。自然发病鳖肾、肝、肺、心病理切片可见大量芽孢杆菌,病鳖血管扩张充血,嗜酸性粒细胞浸润。T91-1灌胃ICR乳鼠3d后可全部死亡,死亡鼠呈皮下出血等症状; T91-1腹腔注射和灌胃ICR 4周龄小鼠12—24h可出现迟钝、厌食等症状, 1周内未出现死亡。上述结果表明蜡样芽孢杆菌对中华鳖有很强毒力,对小鼠有较强肠毒性,是引起本次杭州中华鳖暴发性疾病的病原。

摘要: 外源性激素在中华鳖(Pelodiscus sinensis)性别决定有重要作用,为给中华鳖性别决定机制研究提供生物学信息,首次克隆和分析了中华鳖Foxl2 cDNA部分序列。为研究其在遗传和生理水平的差异,以10 mg/kg剂量17α-甲基睾酮(MT)和17β-雌二醇(E_2)分别对中华鳖雌雄个体注射,检测0、6h、12h、24h、48h、7d和14d性腺Foxl2 mRNA表达水平。获得中华鳖Foxl2基因(GenBank登录号:KP734210)部分cDNA长903 bp,共编码300个氨基酸,属于叉头框转录因子家族,参与卵巢发育和功能维持;多重序列比对显示, Foxl2具有典型的FH结构域,与红耳龟的同源性最高,达到99%;系统进化树分析显示,中华鳖Foxl2基因与爬行动物Foxl2基因聚为一个亚支,且与西部锦龟Foxl2基因距离最近。荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,注射E_2后24h,卵巢Foxl2 mRNA表达水平被极显著上调(P<0.001), 7d和14d后,精巢Foxl2 mRNA表达水平极显著上升(P<0.001);注射MT后24h,精巢和卵巢Foxl2 mRNA的表达水平均极显著升高(P<0.001)。结果表明, E_2和MT促进Foxl2表达, E_2促进其表达的性别差异比MT明显。研究可为了解Foxl2的功能及明确外源性激素调控中华鳖Foxl2的分子机制提供基础资料。

摘要: 为了探究急性冷胁迫对中华鳖(Pelodiscus sinensis)幼鳖肠道不同区段黏膜组织学特征的影响,实验检测了急性冷胁迫前后血清二胺氧化酶(Diamine oxidase, DAO)的活性,同时观察了急性冷胁迫前后中华鳖肠道黏膜的相关组织形态的差异。DAO活性显示:(1)在第一次急性冷胁迫实验中,中华鳖血清DAO活性随急性冷胁迫时间的增加而呈现降低趋势,并在冷胁迫到达48h降到了最低水平;(2)在急性冷胁迫及复温实验中,中华鳖血清DAO的活性,在冷胁迫3d后显著降低,但随着温度的恢复, DAO活性又恢复到正常水平。组织病理结果显示:(1)急性冷胁迫对中华鳖肠道(回肠后段和大肠)黏膜上皮的形态没有明显影响;(2)急性冷胁迫对回肠后段的杯状细胞数目、肠绒毛长度和绒毛长度/隐窝深度的比值没有显著影响,但会使回肠后段黏膜厚度显著降低;(3)急性冷胁迫会使大肠的杯状细胞数目降低。这表明急性冷胁迫会改变中华鳖肠道黏膜的结构,但在不同的肠段,这种改变是不同的。回肠后段和大肠在同样的冷胁迫方式下黏膜机械屏障的不同变化情况,提示中华鳖肠道各段对急性冷胁迫具有特殊的应对方式。