摘要: 动物卵子形成及卵黄发生的研究多集中于鱼类[1]和两栖类[2],而对其他动物的实验报道则比较少。不同种类的动物,其卵子发生的形态变化过程存在较大差异。关于爬行动物卵子形成的研究,有鳞目的蜥蜴类和蛇类已有报道[3,4],但对龟鳖目卵黄发生的过程描述则很少。中华鳖是广泛分布于我国的水生爬行动物,具有较

摘要: 以红条毛肤石鳖Acanthochiton rubrolineatus(Lischke)齿舌为材料,通过切片和酶组织化学技术,在光镜和电镜下对齿舌主侧齿的微结构及高铁还原酶的存在进行观察,从微观角度了解齿舌主侧齿齿尖的矿化机理。结果显示,成熟主侧齿由齿尖和齿基组成。齿尖结构由外至内分为三层,最外层为磁铁矿层,前后齿面磁铁矿层的厚度不等,后齿面约50μm,前齿面约5—10μm。向内依次为棕红色的纤铁矿层,厚约10μm,及略显黄色的有机基质层,有机基质层占据着齿尖内部的大部分结构。高分辨透射电镜下显示磁铁矿由条状四氧化三铁颗粒组成,长约2—3μm,宽约100—150nm。齿舌的矿化是一个连续过程,不同部段处于不同的矿化阶段,齿舌囊上皮细胞沿囊腔分布,并形成齿片。未矿化的新生主侧齿齿尖中存在由有机基质构成的网状结构。随矿化的进行,有机基质内出现矿物颗粒。初始矿化的齿尖外表面有一个细胞微突层,微突的另一端为囊上皮细胞,矿物质经由微突层达齿尖并沉积于有机基质中,齿尖随之矿化并成熟。初始矿化齿尖的外围有大量的三价铁化物颗粒,稍成熟的齿尖外围同时还出现二价铁化物。新生或初始矿化主侧齿齿尖外围的囊上皮细胞中有大量球形类似于铁蛋白聚集体的内容物,直径0.6—0.8μm,球体由膜包围。齿舌囊上皮组织中存在三价高铁还原酶,此酶分布于上皮细胞的膜表面,可能与齿尖表面磁铁矿的生成有一定的关系。

摘要: 转铁蛋白是呼吸链的关键因子,参与体液和免疫系统的调节,具有抗菌抗病毒等功能。研究从嗜水气单胞菌诱导的中华鳖肝脏SMART c DNA文库中,分离克隆了中华鳖转铁蛋白基因c DNA和g DNA全序列,对其序列特征、组织表达及原核表达进行了分析研究。结果显示,中华鳖转铁蛋白对应全长c DNA的基因组DNA全长为19100 bp,由17个外显子和16个内含子组成;c DNA全长为2359 bp,开放阅读框为2094 bp,编码697个氨基酸;转铁蛋白的分子量为76.6 k D,包含2个糖基化位点,存在4个二硫键形成区域的缺失,两个同源结构域的相似性为37%,信号肽位于第1—19位点。荧光定量PCR结果显示,正常组中华鳖转铁蛋白基因在肝脏中的表达量最大;以嗜水气单胞菌刺激后,其在心、肝、脾和肾脏组织中的表达,均有一个上调后减少的趋势。此外,实验还进行了重组转铁蛋白原核表达和Western blot检测鉴定,为深入研究中华鳖转铁蛋白功能的提供了基础数据。

摘要: 通过点种法初筛和牛津杯法复筛,从中华鳖肠道筛选到1株对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、温和气单胞菌(A.sobria)以及豚鼠气单胞菌(A.caviae)具有拮抗作用的益生菌株Dec-43。对该菌株进行形态、生理生化特征分析,结果与《常见细菌系统鉴定手册》中屎肠球菌(Enterococcus faecium)的生理生化特征一致。提取细菌基因组DNA,通过16S r RNA基因通用引物进行PCR扩增,从该菌株的16S r RNA基因中克隆到了一个长度1448 bp的片段,经测序和序列比对,该片段与Genbank中屎肠球菌的序列相似性达99%,因此,该菌株确定为屎肠球菌。通过单因素试验确定了该菌株的最佳生长温度、盐度、初始p H、接种量等参数分别为:36℃、盐度0.6%、培养基初始p H 7、接种量10%;通过正交试验,确定了该菌株培养基中碳源(葡萄糖)、氮源(蛋白胨)最适含量分别为15和10 g/L。研究发现了一株中华鳖肠道潜在益生菌,并研究了其生长特性,为中华鳖养殖行业益生菌的应用提供了基础。

摘要: 中华鳖(Pelodiscus sinensis)性别决定的方式一直存在较大的争议,分子机制更是不清楚。在大部分脊椎动物中,雌激素在性别决定和性腺分化中扮演重要的调控作用。实验通过对性别分化前胚胎进行雌二醇(E2)和芳香化酶抑制剂(AI)处理,研究雌激素在中华鳖性腺分化中的作用及机理。实验结果显示,与对照组(雌性比例49%)相比,E2处理组中雌性中华鳖仔鳖比例显著增加,高达92.3%;而在AI处理组中,雌性比例显著下调至13.1%。HE染色分析表明,ZZ(雄性)和ZW(雌性)胚胎分别经过E2和AI处理后,ZZ和ZW性腺结构呈现明显的雌性化和雄性化特征。同时,通过RT-PCR和免疫荧光染色发现,E2能显著降低雄性性别关键因子DMRT1和SOX9 mRNA和蛋白表达水平;AI则表现相反的调节作用。综上所述,雌激素通过抑制雄性性别关键因子DMRT1和SOX9的表达来抑制雄性分化,促进雌性分化,揭示雌激素在中华鳖雌性性别分化中起着重要的调控作用。