摘要: 为了提高CRISPR/Cas9基因编辑系统的基因编辑效率,研究设计优化了Cas9蛋白,并通过大肠杆菌密码子优化、原核表达、固定化金属亲和层析、分子筛层析及超滤离心浓缩获得了具有较高纯度和活性的HeiCas9蛋白。将HeiCas9蛋白、Cas9蛋白(T品牌)、zcas9 mRNA分别以不同的浓度梯度,配合斑马鱼黑色素合成关键基因tyr的gRNA,在斑马鱼胚胎中进行了tyr基因敲除,比较了不同组别的tyr基因编辑效率。在400 ng/μL的工作浓度(为获取最佳基因编辑效果而建议的剂量)下, HeiCas9蛋白比T品牌的Cas9蛋白发挥出更高的基因编辑效率,并保持了较低的胚胎毒性。进一步将HeiCas9蛋白用于稀有鮈鲫dnd和金鱼prkdc的基因敲除,取得了良好的效果。综上,研究成功制备出了高活性的HeiCas9蛋白,并在3种实验室小型鱼类胚胎的基因编辑中取得了良好的应用效果。

摘要: 为了探究肾上腺素对Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)感染的影响,实验以稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)感染GCRV-JX02为研究模型,利用逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot, WB)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法研究肾上腺素在稀有鮈热休克反应与GCRV-JX02感染宿主中的作用。结果显示,稀有鮈鲫腹腔注射浓度为5μg/mL肾上腺素后,体内肾上腺素呈先上升后下降的趋势,并在30min时浓度最高。注射肾上腺素后0、15min、30min、45min和60min收集稀有鮈鲫的肝脏、肠道、脑和肌肉组织,通过RT-qPCR与WB检测HSP70的表达水平,发现肝脏与脑组织中HSP70的表达随时间上升,在45min时达到最高水平; WB检测肝脏与脑组织中的HSP70在转录翻译水平随时间上升。将肾上腺素(5μg/mL)与GCRV-JX02病毒(2.1×10～8个/mL)液混合腹腔注射后,稀有鮈鲫死亡率明显上升。实验结果表明注射肾上腺素能够引起稀有鮈鲫的热休克反应,导致HSP70表达显著上调,并增强了GCRV-JX02感染稀有鮈鲫的能力。研究建立了稀有鮈鲫腹腔注射肾上腺素的应激模型,初步阐明了肾上腺素促进GCRV-Ⅱ感染宿主的反应机制,有助于了解应激反应在草鱼出血病流行中的作用,且为草鱼呼肠孤病毒的防控提供了新思路与理论依据。

摘要: 为达到养殖环境生态平衡,研究了稻田环境中混养鲫（Carassius auratus）[（48.53±2.11） g/尾]对中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）[（23.48±0.82） g/尾]生长和营养成分的影响。实验设置4个鲫密度:0 （T0,对照组）、100（T1）、200 （T2）和300尾/667 m² （T3）,分别与中华绒螯蟹（300只/667 m²）混养,实验周期90d。结果显示:T1组中华绒螯蟹的终末体质量、增重率、特定生长率、摄食率、出肉率、肝胰腺指数、性腺指数和总可食率显著高于其他组,饵料系数显著低于其他3组, T1组鲫的终末体质量、增重率和特定生长率显著高于其他组（P<0.05）; T2组中华绒螯蟹肌肉的总氨基酸、必需氨基酸含量和必需氨基酸评分最高,其中苏氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸含量显著高于其他各组（P<0.05）。研究表明,在中华绒螯蟹养殖过程中,混养不同密度鲫对其生长、可食性状和肌肉营养品质存在显著影响,其中混养100—200尾/667 m²鲫更有利于提高中华绒螯蟹品质。

摘要: 为了厘清湖北省异育银鲫(Carassius gibelio)繁殖群体的种质资源现状,研究以湖北省6个苗种繁殖场的异育银鲫亲本为研究对象,比较不同群体的生物学特征和品质性状的差异,利用基因组重测序进行品种与克隆系鉴定和遗传多样性分析。研究结果表明,根据180尾异育银鲫全基因组重测序的SNPs,共鉴定出10个异育银鲫克隆系,其中2个异育银鲫“中科3号”亚克隆系, 5个异育银鲫“中科5号”亚克隆系和3个其他克隆系。遗传多样性分析表明,单核苷酸密度(SNP/kb)、单核苷酸多态性(p)、多态信息含量(PIC)和观测杂合度(Ho)分别为11.17、0.0050、 0.4332和0.5612。系统发育树和主成分分析结果显示,不同群体之间表现出中度到高度的遗传分化,同时也存在较为显著的交叉聚类现象,结合异育银鲫克隆系分布,表明除了梁子湖和正大群体外的繁殖亲本存在一定的种质混杂现象。不同克隆系之间的形态上存在差异,体高/体长和头长/体长可以作为初步判断异育银鲫形态的两个参考指标。异育银鲫“中科5号”和异育银鲫“中科3号”的肌肉营养成分中粗脂肪含量差异显著,而粗蛋白含量无明显差异。不同克隆系间的肌肉中17种脂肪酸含量均存在显著差异,DHA+EPA总量在不同克隆系之间也存在差异。研究不仅有利于异育银鲫种质资源的合理开发与保护,而且有助于异育银鲫新品种选育和养殖产业的可持续发展。

摘要: 实验以初重(8.70±0.03) g的异育银鲫“中科5号”(Carassius gibelio var. CASⅤ)幼鱼为研究对象,分别投喂低鱼粉饲料中添加0、2%、4%赖氨酸的饲料49d,以探究低鱼粉饲料中添加不同水平赖氨酸对异育银鲫“中科5号”生长性能、鱼体生化组成、营养沉积、血浆代谢物及肌肉中赖氨酸感知和应答、肌肉生长相关基因表达的影响。实验结果显示,饲料中添加不同水平的赖氨酸对异育银鲫“中科5号”的摄食率、特定生长率、饲料效率、蛋白沉积率、脂肪沉积率没有显著性影响(P>0.05)。饲料中添加2%赖氨酸组,全鱼蛋白质含量显著高于其他组(P<0.05),全鱼总氨基酸含量、总必需氨基酸含量显著高于其他两个处理组(P<0.05),其中赖氨酸、精氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸和缬氨酸等7种必需氨基酸含量显著高于其他各组(P<0.05)。肌肉的氨基酸组成在各组间无显著性差异(P>0.05)。血浆葡萄糖、甘油三酯和总胆固醇含量在各组间无显著性差异(P>0.05)。血浆游离氨基酸组成没有受到饲料赖氨酸水平的显著影响(P>0.05)。饲料中添加赖氨酸对肌肉中赖氨酸感知和应答相关关键基因表达无显著性影响(P>0.05), 4%赖氨酸组肌肉myog的基因表达量高于2%赖氨酸组(P<0.05)。结果表明,低鱼粉饲料中添加2%赖氨酸可以在一定程度上提高异育银鲫“中科5号”全鱼必需氨基酸和蛋白质含量,可为异育银鲫“中科5号”的配方设计提供支撑。