摘要: 为了研究盐酸双氟沙星(Difloxacin,DIF)在异育银鲫体内血浆蛋白结合率的变化及其与药代动力学之间的关系,实验采用超滤法测定了DIF在异育银鲫体内血浆蛋白结合率,运用HPLC测定其对应时间点药物浓度,并分析了血浆蛋白结合率变化对DIF体内处置的影响。实验以感染嗜水气单胞菌的异育银鲫为感染组,健康异育银鲫为对照组。结果显示:感染组各时间点DIF血浆蛋白结合率均高于对照组,感染组与对照组DIF血浆蛋白结合率与总药物浓度呈对数关系:y=9.01ln x+74.34和y=4.81ln x+65.15,DIF血浆蛋白结合率与游离药物浓度的对数关系式分别为:y=6.36ln x+64.91和y=4.36ln x+60.63;感染组和对照组血浆药时曲线均可使用开放性二室模型描述;感染组DIF的吸收和消除慢于对照组,其表观分布容积和曲线下面积大于对照组。结果显示异育银鲫体内感染嗜水气单胞菌促使DIF血浆蛋白结合率升高;血浆蛋白结合率升高导致药物以结合药物的形式储存于血液中可能是导致药物组织分布受限、消除缓慢、长时间滞留于血液原因之一。

摘要: 墨龙是一种由红鲫进化来的龙睛种金鱼(Carassius auratus)。随机取体长10—12 cm,重约35 g的墨龙和红鲫各4尾,解剖取出整个眼球及脑,并常规石蜡切片,HE染色。在光学显微镜下观察墨龙和红鲫的视网膜、视盖系统的显微结构变化并比较各层厚度,发现与红鲫相比,墨龙视网膜的总厚度下降29.9%,其中外网状层厚度增加2.5%、内网状层厚度增加11.8%;而内核层厚度下降21.6%、外核层厚度降低35.6%,神经节细胞层、杆锥层也变薄,且后两者分层不规则;墨龙视盖壁整体厚度增加28.9%,其中除围脑室层厚度减少22.6%外,中央纤维层厚度增加12.8%,中央细胞层厚度增加30.6%,表面纤维层厚度增加21.9%,且纤维远较红鲫密集,视神经层厚度增加91.7%,边缘层厚度增加35.6%。结果表明长期的人工选择不但改变了墨龙的外形,而且使其中枢神经组织结构也发生了较大变化,并推测墨龙的眼球直径及视网膜面积较大,从而导致自视网膜传入视盖的纤维增多,是视网膜和视盖中的传递神经冲动的神经元、神经纤维所在层段增厚的主要原因;同时墨龙视网膜中色素上皮层向杆锥层交错对插,富含神经元的视网膜外核层、内核层以及视盖中的围脑室层厚度也降低,可以减少因视网膜面积大而造成的强光伤害;此外由于墨龙的围脑室层厚度降低,导致其游动及平衡能力较红鲫差。

摘要: 为了揭示F系和A~+系的遗传差异以及解析F系的遗传特征,研究基于前期基因组Survey分析发现一个特异于银鲫F系大小为782 bp片段的基础,首先采用混合池筛选方法从银鲫F系BAC文库中筛选出一个包含该特异片段的BAC克隆(F782-BAC)。鸟枪法测序结果表明,F782-BAC序列全长大小为172625 bp,富含转座子序列,包含1个具备完整结构的Tc1-like转座子,以及不具备完整结构的transposase-like、PIF/Harbinger、target-primed reversed transcription(TPRT)和transpon X-element等6个转座子。用地高辛标记F782-BAC质粒得到的DNA探针进行了银鲫F和A~+系有丝分裂中期相的染色体荧光原位杂交,结果表明不论是在F系还是A~+系的有丝分裂中期相中,3个阳性荧光信号皆清晰地定位于3条大小相同的近端着丝粒染色体短臂的近着丝粒位置。进一步开展了银鲫A~+系相应同源的F782-BAC序列的差异鉴定和序列分析,揭示A~+系缺失了大小为3395 bp的一段序列,且特异于银鲫F系大小为782 bp的片段正好位于其中,并由此筛选出可作为区分银鲫F系和A~+系的SCAR标记。研究为银鲫的多倍化起源提供了进一步的染色体定位证据,鉴定的SCAR标记可为银鲫分子标记辅助育种提供新的遗传标记。

摘要: 研究以银鲫为材料,根据银鲫(Carassius auratus gibelio)卵母细胞生发泡(Germinal vesicle,GV)边移程度及剥离GV中减数分裂前期染色体的凝集状态,将银鲫Ⅳ时相的卵母细胞分为GV0、GV1、GV2和GV3四个时期;并进一步比较了分别处于这4个时期银鲫卵母细胞体外诱导培养的成熟率、卵裂率和孵化率。结果表明,GV1期之后的卵母细胞均可有效进行体外诱导成熟,可正常受精发育,由于GV1期卵母细胞有较长时间用于显微操作,因此GV1期卵母细胞被选为进行体外诱导的最早时期的卵母细胞。以GV1期卵母细胞为研究材料,摸索了银鲫卵母细胞体外诱导成熟的适宜条件:取GV1期的Ⅳ时相卵母细胞,放置于pH 8.5、加有1μg/m L孕酮激素(17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one,DHP)的格氏平衡盐溶液(Gey’s balanced salt solution,GBSS)中,在23℃培养箱中体外诱导12h后,将滤泡膜剥离后再进行人工体外授精,其所获胚胎的孵化率可达55.5%。此外,将体外转录合成的带GFP标签的h2af1o m RNA注射到GV1期卵母细胞,发现经显微操作和体外诱导后不仅可以通过GFP绿色荧光信号活体观察GVBD、受精、卵裂和早期胚胎发育的全过程,而且诱导成熟的卵子仍可正常受精和胚胎发育。研究建立的银鲫卵母细胞体外诱导成熟技术为银鲫和其他鱼类卵母细胞发育过程研究及其相关基因和细胞显微操作提供了技术平台。

摘要: 为了探讨CyHV-2疾病条件下异育银鲫胆汁酸肠肝循环代谢途径主要基因表达活性的变化,以患CyHV-2病的、正常的异育银鲫肠道黏膜为材料,提取总RNA,采用RNA-Seq测序、对单一基因进行注释,并进行KEGG富集分析、单一基因差异表达分析。结果显示,肠道黏膜组织有7770个基因显著性差异表达,其中,差异表达上调基因数为3335个、差异表达下调的基因数为4435个,表明CyHV-2病的发生对肠道黏膜组织基因表达产生了重大的影响。病鱼胆固醇、胆汁酸生物合成代谢途径的酶、蛋白质的基因显著性差异表达,显示肠道黏膜胆固醇、胆汁酸合成代谢受到显著性影响。参与胆固醇、胆汁酸合成代谢调节作用,以及胆固醇、胆汁酸分泌、吸收、转运等生理过程的蛋白质、酶的基因也是差异表达下调,胆汁酸肠肝循环有出现代谢障碍的趋势。结果表明,CyHV-2病的发生对肠道黏膜组织基因表达产生了严重影响,对胆固醇、胆汁酸的合成代谢途径、胆汁酸肠肝循环途径的基因表达产生了严重影响,将导致病鱼体内胆固醇、胆汁酸量的不足。患CyHV-2病病鱼血清胆汁酸含量下降了99%、胆固醇含量下降了10%,证实了上述基因差异表达的趋势。