摘要:

摘要: 为了解我国西北地区野生鲫鱼的遗传多样性,鲫鱼样品从新疆伊犁河中采用小型拖网捕获。通过解剖观察性腺鉴定性别;采用碘化丙啶(PI)染色,经流式细胞仪测定血细胞核DNA含量;采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,考马斯亮蓝染色分析血清转铁蛋白多态性。结果表明:新疆伊犁河鲫鱼群体为具雌、雄的两性个体的群体;伊犁河鲫鱼血细胞核DNA平均含量为(5.315±0.215)pg/个细胞核,血细胞核DNA含量约为二倍体彩鲫DNA含量的1.53倍,与银鲫血细胞核DNA含量相当;在所采集的鲫鱼样品中共发现9种转铁蛋白表现型,由7个等位基因调控,等位基因频率依次为Tfa0.063、Tfb0.063、Tff0.095、Tfg0.169、Tfc0.174、Tfe0.175和Tfd0.270。基因型频率分别为Tfcd0.043、Tfcdf0.043、Tfabdg0.043、Tfdef0.087、Tfce0.13、Tfde0.13、Tfdf0.13、Tfabeg0.13和Tfcdg0.26。综合分析,伊犁河现存野生鲫鱼为银鲫,且具有两性融合生殖能力。伊犁河鲫鱼表现出的遗传特性可能与该特定水环境有关。

摘要: DNA重组激活基因(Recombination activatinggenesRAG)是脊椎动物特异性免疫反应的关键基因,也是脊椎动物进化分析的标记基因之一。鲫鱼具有很强的适应性和抗病能力,是我国广泛养殖的重要经济淡水鱼;由于具有不同的倍性和丰富的遗传多样性,又是研究鱼类基因组进化的独特材料。本研究用PCR方法扩增、克隆了鲫鱼的Rag基因。鲫鱼Rag1基因从起始密码到终止密码总长4188bp,由三个外显子和两个内含子组成,其中开放阅读框长3192bp,编码1063个氨基酸。Rag2基因从起始密码到终止密码总长1593bp,没有内含子,只有单一的编码区,编码530个氨基酸。Rag1和Rag2基因的ORF和氨基酸序列在不同鱼类中的对比结果表明其在进化过程中非常保守。不同鱼类Rag1基因的第二内含子也是高度保守的,转录因子结合位点分析表明在第二内含子的保守区域中有许多转录因子的可能结合位点。其中有一段在所有已知鱼类中都存在的保守区域是与性腺发育相关的转录因子SRY和SOX5的可能结合位点,提示Rag1基因的表达可能与性腺发育具有相关性。用RT-PCR方法进行的组织特异性表达分析表明Rag1基因在鲫鱼成体的头肾和精巢都能检测到表达,提示Rag基因不仅主导了免疫组织中的DNA重组,也可能参与了生殖细胞的DNA重组。RT-PCR检测证明Rag1基因在鲫鱼胚胎发育至第5天开始表达,在第7天鲫鱼胚胎的胸腺原基中可检测到Rag1基因mRNA的杂交信号,在第9天鲫鱼胚胎的胸腺原基中可以检测到很强的Rag1 mRNA原位杂交信号,说明该时期可能是鲫鱼免疫基因重组的活跃时期。

摘要: 鲫鱼对低氧具有极强的耐受性。在低氧状态下鲫鱼鳃瓣表面积增加,无氧代谢增强,能量消耗降低。但是人们对鲫鱼产生这些低氧反应的分子机理还缺乏了解。本研究以1%低氧处理24h的鲫鱼囊胚细胞(CAB)作为检测子(Tester),常氧条件下培养的CAB细胞作为驱赶子(Driver),分别提取总RNA,利用SMART cDNA技术合成双链cDNA,经差减杂交和抑制性PCR扩增获得差减PCR产物。然后将差减PCR产物连接到pGEM-T载体上,构建差减cDNA文库。以管家基因β-actin作为指标检测差减效率,发现该文库差减效率达28倍。随机挑选阳性克隆进行PCR检测,显示差减片段在0.1—2kb之间。挑取含有插入片段的1300个克隆进行测序,通过生物信息学分析获得267个基因序列(e≤0.001;Identity>40%)。该差减cDNA文库的成功构建对克隆鱼类耐低氧相关基因和深入认识鱼类耐受低氧的分子机制有非常重要的意义。

摘要: 该试验采用同位素示踪技术和肠道离体灌流模型分别测定了鲫鱼、草鱼肠粘膜中结合在蛋白质与脂类中的酪氨酸、脯氨酸的量。结果表明:用于合成脂肪的酪氨酸和脯氨酸比例在鲫鱼和草鱼均极显著高于用于合成蛋白质的相应氨基酸比例(p<0.01),但草鱼用于合成脂肪的酪氨酸和脯氨酸比例均显著高于鲫鱼(p<0.05)。在酪氨酸各浓度组中鲫鱼肠道利用其合成蛋白质与脂肪的绝对量几乎都高于草鱼,但从相对量上看,鲫鱼利用酪氨酸合成蛋白质和脂肪的能力显著不如草鱼(p<0.05)。对于每一浓度组的脯氨酸,鲫鱼肠道利用其合成蛋白质的绝对量和相对量均显著高于草鱼(p<0.05),说明鲫鱼利用脯氨酸合成蛋白质的能力显著高于草鱼;但从相对量来看,除了1.0mmol/L试验组外,鲫鱼利用脯氨酸合成脂肪的能力显著低于草鱼(p<0.05)。