摘要: 根据铁蛋白基因的保守序列,搜索GenBank数据库中华鲟的EST数据库得到一条同源序列。通过RT-PCR的方法对该序列进行扩增,修改其测序错误,获得中华鲟铁蛋白亚基 cDNA 全长,经过注释提交 GenBank 数据库,获取序列登录号 EU348782。该 cDNA 长度为 896bp,包含 531bp 的完整编码区,推测编码的蛋白质为 176aa,分子量为 20339.9Mr,理论等电点为 5.66。它和大西洋鲑鱼铁蛋白序列同源性最高,达到 82.9%。该基因在中华鲟肝脏、胰脏、肌肉、脑、心脏、鳃和胃粘膜等多种组织表达,在胰脏和心脏中表达量较高,在肌肉组织中表达较低。根据同源模建的方法得到该蛋白质三维结构,其包括 5 个α螺旋和 10 个转角结构,和人、蛙和细菌的铁蛋白均能很好的叠合,表现了很高的相似性,表明该蛋白结构和功能在基因进化中的高度保守性。

摘要: 鲟鱼（Acipenser spp.）作为古老的鱼类类群，在生物进化研究中具有重要意义，同时也是我国重要的经济养殖鱼类，其鱼子酱具有极高的经济价值。由于鲟鱼雌雄个体无明显第二性征，形态学上难以鉴别性别，因此实现早期精确性别鉴定对养殖业至关重要。本研究开发了一种新的基于鲟鱼雌性特异性表达基因片段ZXJAscF418的DNA分子标记，以浙江已知性别鲟鱼样本110尾[施氏鲟（A.schrenckii）20尾、达氏鳇（Huso dauricus）20尾、达氏鳇（H. dauricus）♀×施氏鲟（A. schrenckii）♂杂交子一代20尾、俄罗斯鲟（A. gueldenstaedtii）20尾、西伯利亚鲟（A. baerii）10尾、西伯利亚鲟（A. baerii）♀×施氏鲟（A. schrenckii）♂杂交子一代10尾、欧洲鳇（H. huso）10尾]和黑龙江未知性别幼龄鲟鱼样本45尾[达氏鳇10尾、达氏鳇♀×施氏鲟♂杂交子一代10尾、西伯利亚鲟4尾、小体鲟（A. ruthenus）11尾、Bester鲟（欧洲鳇♀×小体鲟♂）10尾]为研究对象，建立了基于该标记的PCR检测方法，验证了其在多物种养殖鲟鱼中的性别鉴定准确性，并探究了其在低龄个体中的应用潜力。结果显示，该DNA分子标记的引物（Asc418F:5′-CAG AAA CCC AGA TAA CAA GA-3′；Asc418R:5′-CCA TGA AAA TTT GGG GCC CA-3′）扩增特异性良好，退火温度45～59℃均有效；同时，具有较高灵敏度，最低可检测的DNA模板浓度达6.55×10^-6 mg/L。运用该方法对浙江已知性别施氏鲟、达氏鳇、达氏鳇♀×施氏鲟♂杂交子一代和俄罗斯鲟4种鲟鱼样本的性别鉴定准确率达100%；对黑龙江5种未知性别低龄鲟鱼样本的性别预测结果显示，潜在雌性与雄性比例为1.25︰1。本研究为鲟鱼养殖和鱼子酱生产提供了可靠的早期性别鉴定DNA分子标记，有助于提升产业经济效益，同时也为濒危鲟鱼种群的保护与恢复提供了关键技术支持。