摘要: 为研究俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti)补体C7基因(AgC7)的功能,采用RACE (Rapid-amplification of cDNA ends)技术,获得AgC7的cDNA全长序列为3103 bp,包括开放阅读框(Open Read Frame, ORF) 2502 bp,编码833个氨基酸, 5′-UTR (5′untranslated region)和3′-UTR的长度分别为44和554 bp。同源性分析表明, AgC7与其他鱼类补体C7如斑点雀鳝(Lepisosteus oculatus)、斑点叉尾鲴(Ictalurus punctatus)、斑马鱼(Danio rerio)、大西洋鲑(Salmo salar)、尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)氨基酸序列的一致性分别为56%、46%、49%、49%、47%,且都具有TSP1、LDLa、FIMAC和MACPF保守结构域。荧光定量qRT-PCR (quantitative Realtime PCR)结果表明, AgC7在血液、脑、鳃、性腺、心脏、头肾、肠、肝、肌肉、皮肤、脾、胃和后肾组织中均可表达,且在肠中表达水平最高;用含有壳寡糖的饲料饲喂俄罗斯鲟60d后, AgC7在这13种组织中表达均有增加,在肠中增加量最高,约为对照组的1.51倍;嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)可诱导AgC7,在血液、鳃、头肾、肠、肝和脾6种组织中瞬时上调表达,随着病原菌感染时间增加,基因表达量逐渐降低恢复至正常水平,其中,鳃中基因表达量的上调趋势最明显,最大表达量出现在感染后6h,为对照组的41.30倍, 12h后基因表达下降并恢复至正常水平,表明AgC7基因可能参与了俄罗斯鲟抗细菌感染的免疫应答。俄罗斯鲟AgC7具有典型的补体C7基因特征,且壳寡糖刺激和病原感染后均可引起AgC7基因表达变化,补体C7可能参与了俄罗斯鲟的免疫应答。

摘要: 为了解西伯利亚鲟(Acipenser baeri)骨骼系统的形态特征,采用传统的解剖法和透明骨法对西伯利亚鲟幼鱼进行解剖观察,为西伯利亚鲟在形态学和分类学的研究提供基础资料。结果表明:西伯利亚鲟幼鱼骨骼系统由主轴骨骼和附肢骨骼两部分构成,主轴骨骼包括头骨、脊柱和肋骨,附肢骨骼由鳍条、支鳍骨骼和带骨构成。对比分析发现,西伯利亚鲟和施氏鲟骨骼系统的组成与构造较为相似,其原因可能是其对高纬度低水温环境长期适应的结果。

摘要: G蛋白偶联受体54(GPR54,G protein-coupled receptor 54)是kisspeptin(Kiss)的受体蛋白。Kisspeptin/GPR54系统通过调节促性腺激素释放激素(Gn RH)的活性来参与鱼类生殖调控。为了研究Kisspeptin/GPR54系统对达氏鲟(Acipenser dabryanus)Gn RH的调控功能,克隆得到达氏鲟2个gpr54基因的全长c DNA序列,命名为dsgpr54-1及dsgpr54-2,分别编码379和368个氨基酸。氨基酸序列比对及进化树分析表明,达氏鲟Gpr54与四足动物Gpr54序列一致性较高,亲缘关系较近。荧光定量PCR研究发现,dsgpr54-1的转录本在精巢、卵巢、下丘脑、垂体、中脑及端脑等组织中均有表达,且在下丘脑中转录水平最高;而dsgpr54-2仅在脑组织中转录,且在垂体、中脑及下丘脑中表达丰度均较高。为了研究Gpr54是否可以与其配体Kisspeptin结合调控下丘脑中gnrh基因的表达,分别合成了达氏鲟Kiss-1和Kiss-2的核心十肽(10 nmol/L、1000 nmol/L),腹腔注射到9月龄达氏鲟。结果表明,不同浓度Kiss-1、Kiss-2注射均引起gpr54基因表达量升高,并且10 nmol/L Kiss-2注射能够显著促进dsgpr54-2的表达(P<0.05)。另外,不同浓度Kiss-1注射均造成了gnrh转录水平的下降;而10 nmol/L Kiss-2注射使得gnrh1表达量上升,而gnrh2的表达量下降,1000 nmol/L Kiss-2注射则引起gnrh1表达量的下降,gnrh2的表达量没有显著变化。上述研究结果表明,达氏鲟gpr54基因均能与其配体kiss-1、kiss-2相结合,但表现出一定的受体-配体选择性差异。Kiss-1、Kiss-2通过激活Gpr54的活性,调控下丘脑中gnrh基因的表达,且其调控功能存在差异。

摘要: 卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)被认为是一种理想的雌激素和类雌激素标志物,通过建立一种中华鲟Acipenser sinensis血浆Vtg水平的检测方法,进而开发一项中华鲟性腺成熟度的诊断技术。首先通过RACEPCR方法扩增得到中华鲟vtg基因cDNA序列,氨基酸序列分析预测其蛋白分子量大小为196 k D。构建Vtg功能区段融合原核表达载体p ET32a(+)-vtg并表达纯化重组蛋白,并以重组蛋白免疫兔子获得多克隆抗血清,Western blotting检测显示抗血清的特异性较好。以纯化的中华鲟重组Vtg蛋白为抗原,中华鲟Vtg多克隆抗血清为抗体,建立了中华鲟血浆Vtg的间接竞争酶联免疫检测方法(ELISA),标准曲线线性回归方程为y=–0.2916x+0.6794,相关系数R~2为0.9976。该方法检测的灵敏度为4.12μg/m L,最低检测限为0.3μg/m L,批内和批间变异系数分别为2.52%和3.42%。通过对不同发育时期雌性中华鲟血样检测,表明此ELISA方法可初步用于雌性中华鲟性腺发育时期监测。

摘要: 利用光镜和透射电镜技术对北京海洋馆养殖的40尾中华鲟(Acipenser sinensis)(介于4—30龄以上,包括野生、子一代和子二代共7个龄组)外周血细胞组成、大小、显微和超微结构进行研究。结果表明,在外周血细胞中可区分出以下六类细胞。形态结果:红细胞卵圆形,胞质内可见少量线粒体;淋巴细胞多圆形,有明显伪足样或指状胞凸,核质比大,可明显分为大淋巴和小淋巴;嗜中性粒细胞核型多样,胞质细胞器丰富,含有大小不等的特殊颗粒;嗜酸性粒细胞多为规则圆形,表面大量细小指状突起,胞质细胞器丰富,含有大量个体较大的嗜酸性颗粒;单核细胞变形现象多,胞质内大量空泡,核型多样;血栓细胞形状多样,胞质内大量小的空泡,散布或成团出现,常见直接分裂现象。各类血细胞从大到小依次为:单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、大淋巴细胞、红细胞、血栓细胞和小淋巴细胞,各龄组间无显著差异。外周血红细胞总数(RBC)平均为(5.56±1.19)×108/m L,18龄和11龄与其他龄组之间存在显著性差异(P<0.05);白细胞总数(WBC)平均为(16.53±4.94)×106/m L,18龄与4龄间存在显著差异,且分别与其他龄组间存在显著性差异(P<0.05);血栓细胞总数(15.53±15.82)×106/m L。白细胞分类计数(DLC)中大淋巴细胞、小淋巴细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞所占百分比分别为:(5.26±3.95)%、(77.74±11.73)%、(9.40±7.98)%、(1.90±2.06)%、(5.50±4.00)%,>30龄和4龄间显著差异,且分别与其他龄组间存在显著性差异(P<0.05)。结论认为中华鲟血细胞进化地位低,免疫系统为淋巴细胞系为主,主要包括淋巴细胞、粒细胞和单核细胞,结果对中华鲟的健康评价与保育研究有重要的参考意义。