摘要: 实验以0.1%三氧化二钇(Y_2O_3)为外源指示剂, 用“70%基础饲料+30%待测饲料原料”的方法配制实验饲料。测定初始体重为(19.28±0.10) g的大口黑鲈(Micropterus salmoides)对荚膜甲基球菌蛋白、乙醇梭菌蛋白、黄粉虫粉、酶解大豆、小球藻和棉籽浓缩蛋白的干物质、蛋白质、脂肪、能量和氨基酸的表观消化率。结果显示, 6种实验原料干物质的表观消化率在37.27%—86.43%(荚膜甲基球菌蛋白>乙醇梭菌蛋白>酶解大豆>黄粉虫粉>小球藻>棉籽浓缩蛋白), 其中荚膜甲基球菌蛋白干物质的表观消化率最高, 乙醇梭菌蛋白次之, 黄粉虫粉、酶解大豆和小球藻之间没有显著性差异, 均显著高于棉籽浓缩蛋白(P<0.05); 蛋白质的表观消化率在79.97%—88.45%(荚膜甲基球菌蛋白>乙醇梭菌蛋白>黄粉虫粉>酶解大豆>小球藻>棉籽浓缩蛋白), 其中荚膜甲基球菌蛋白和乙醇梭菌蛋白均显著高于酶解大豆、小球藻和棉籽浓缩蛋白(P<0.05); 脂肪的表观消化率在51.19%—97.48%(乙醇梭菌蛋白>荚膜甲基球菌蛋白>酶解大豆>小球藻>黄粉虫粉>棉籽浓缩蛋白); 能量的表观消化率在43.25%—85.43%(荚膜甲基球菌蛋白>乙醇梭菌蛋白>酶解大豆>黄粉虫粉>小球藻>棉籽浓缩蛋白); 水解总氨基酸表观消化率在70.52%—90.51%(荚膜甲基球菌蛋白>乙醇梭菌蛋白>黄粉虫粉>酶解大豆>小球藻>棉籽浓缩蛋白)。各原料17种氨基酸表观消化率变化趋势与蛋白质表观消化率变化趋势基本一致。综上所述, 荚膜甲基球菌蛋白和乙醇梭菌蛋白的脂肪、能量和氨基酸的表观消化率最高, 且和黄粉虫粉、酶解大豆及小球藻的脂肪、能量、氨基酸的表观消化率均优于棉籽浓缩蛋白。因此, 荚膜甲基球菌蛋白、乙醇梭菌蛋白、小球藻、酶解大豆和黄粉虫粉均是大口黑鲈比较理想的蛋白质来源, 可作为大口黑鲈饲料中替代鱼粉的候选物。

摘要: 为探讨发酵豆粕替代鱼粉对大口黑鲈(Micropterus salmoides)幼鱼生长、脂质代谢、血清非特异性免疫及肠道菌群的影响,试验在基础饲料中用发酵豆粕分别替代0、10%、20%、30%和40%鱼粉,用晶体氨基酸平衡各组间蛋氨酸与赖氨酸的差异,配制成共5种等氮等能(CP47%, GE19 MJ/kg)的试验饲料,分别为FM、FSM10、FSM20、FSM30和FSM40。将初始体重为(22.05±0.09) g的大口黑鲈随机分成5组,每组设3个重复,养殖58d。生长试验结果表明:各组之间增重率(WGR)、特定生长率(SGR)、肥满度(CF)、肝体比(HSI)和脏体比(VSI)均无显著差异(P>0.05),但替代组饲料系数(FCR)均显著高于FM对照组(P<0.05), FSM40组的存活率(SR)和干物质表观消化率(ADDM)显著低于其余各组(P<0.05)。脂质代谢方面结果显示, FSM30和FSM40组的血清甘油三酯(TG)水平显著低于FM对照组(P<0.05), FSM40组的血清总胆固醇(T-CHO)水平显著低于FM对照组(P<0.05)。血清非特异性免疫方面结果表明, FSM40组的溶菌酶(LZM)和超氧化物歧化酶(SOD)活性有显著增加的变化(P<0.05)。对肠道菌群进行了Illumina Mi Seq高通量测序分析,结果表明:各组肠道菌群的Alpha多样性指数(Sobs、Shannon、Simpson、Ace和Chao)无显著差异(P>0.05),但OTU数量发生了变化。在门水平上,优势菌群为软壁菌门(Tenericutes)、变形菌门(Proteobacteria)和梭杆菌门(Fusobacteria);而属水平上,优势菌群为支原菌属(Mycoplama)、邻单胞菌属(Plesiomonas)和鲸杆菌属(Cetobacterium)。FSM20组与FM对照组相比,软壁菌门和支原菌属的相对丰度显著提高(P<0.05),变形菌门和邻单胞菌属的相对丰度显著降低(P<0.05)。综上所述,在试验条件下,大口黑鲈饲料中发酵豆粕替代20%鱼粉不会对大口黑鲈幼鱼生长、脂质代谢、血清非特异性免疫及肠道菌群多样性造成负面影响,且能显著降低肠道中邻单胞菌属在内的有害菌的相对丰度,因此,发酵豆粕替代鱼粉的适宜比例为20%。

摘要: 防御素是鱼类天然免疫的重要组成部分,通过杆状表达系统表达大口黑鲈β-防御素,研究其具有高效、广谱的不同于抗生素的独特抗菌的能力。研究通过序列分析,发现大口黑鲈β-防御素(MSBdefe)与其他物种β-防御素具有相似的特征,都包含6个保守的半胱氨酸。将MSBdefe基因进行昆虫密码子优化合成后,克隆至穿梭载体pYBDM-IM质粒中,构建成为重组质粒MSBdefe-pYBDM-IM,重组质粒转化感受态细胞MultiBac/rSW106/asd-/inv+,阳性重组菌株MSBdefe-pYBDM-IM-Am直接用于Sf9细胞的感染,获得重组杆状病毒AV-MSBdefe。通过SDS-PAGE和Western Blot检测AV-MSBdefe感染Sf9细胞后蛋白表达,结果表明成功获得MSBdefe重组蛋白。通过对淡水鱼类最常见的病原菌嗜水气单胞菌的抑菌活性分析,结果显示当MSBdefe重组蛋白的终浓度为30μg/mL时,抑菌效率为83.00%,并随着蛋白稀释2倍、4倍后,即终浓度为15和7.5μg/mL时,抑菌效果逐渐减弱,抑菌效率分别为54.33%和33.67%,进而验证了大口黑鲈β-防御素能够抑制嗜水气单胞菌的生长,且随着蛋白浓度的降低抑制能力下降。这些结果为利用昆虫生物反应器规模化生产鱼类β-防御素奠定了基础,以期为开发能够替代或部分替代抗生素的天然抗菌剂提供良好的候选者和技术途径。

摘要: 为探究胆酸(Cholic acid, CA)作为饲料添加剂对大口黑鲈(Micropterus salmoides)生长及糖代谢的影响,实验以饲料中添加300 mg/kg胆酸钠(Sodium cholate, CAS)作为胆酸钠组,以不添加胆酸钠作为对照组。在饲养8周后,分析胆酸钠对大口黑鲈生长性能、肠道菌群、糖代谢及与糖代谢相关酶的活性和基因表达的影响。结果显示:与对照组相比,胆酸钠组中大口黑鲈的生长指数和体成分的变化均没有显著差异;胆酸钠组中大口黑鲈的肠道菌群组成无显著差异;胆酸钠组中肝糖原含量和肝中糖原合成酶(Glycogen synthase, GCS)的活性显著增加,肝中糖原分解酶糖原磷酸化酶a(Glycogen phosphorylase a, GPa)活性无显著变化,而胆酸钠组中肌糖原含量、肌肉GCS与GPa的活性无显著差异;胆酸钠显著促进肝中糖异生途径中果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose-1,6-bisphosphatase, FBPase)和葡萄糖-6-磷酸酶(Glucose-6-phosphatase, G6Pase)基因的表达;胆酸钠显著降低肝中糖酵解基因丙酮酸激酶(Pyruvate kinase, PK)和肌肉中己糖激酶(Hexokinase, HK)基因的表达;同时,研究还发现饲料中胆酸钠的添加可以显著降低肝中胆汁酸受体法尼醇受体(Farnesoid X receptor,FXR)基因的表达量,而不改变肠道FXR的表达量。研究表明:在饲料中添加300 mg/kg胆酸钠可以促进大口黑鲈肝脏糖异生,抑制肝脏和肌肉糖酵解,并促进鱼体肝糖原的合成。这些糖代谢的变化与肠道菌群没有直接关系,但可能与肝中FXR的表达量降低有关。

摘要: 为研究鲈鲤早期鱼苗耳石标记的可行性,先采用高温水(20.8±0.3)℃和低温水(10.8±1.2)℃交替饲养对20日龄鲈鲤进行热标记,然后将经热标记的35和45日龄鲈鲤浸泡在50—200 mg/L的茜素络合物(AC)或茜素红S(ARS)溶液中进行荧光标记。热标记的耳石生长轮清晰可见,明显区别于其他轮纹,微耳石热标记轮轮纹宽度(IW)和高温期持续时间(T)的线性回归方程为IW=0.16462+0.24762T。经荧光物质浸泡后鲈鲤耳石在绿光下均能检测到橘红色标记; AC标记质量受溶液浓度影响显著(P<0.05),受全长的影响不显著(P>0.05),微耳石、矢耳石和星耳石间的标记质量差异显著(P<0.05); ARS标记质量受全长和溶液浓度影响不显著(P>0.05),微耳石、矢耳石和星耳石间的标记质量差异显著(P<0.05)。研究结果表明,耳石热标记、荧光标记及两者结合使用均可用于大规模标记鲈鲤早期鱼苗。