摘要: 为建立鳙(Aristichthys nobilis)幼鱼的声学行为控制技术,本研究系统评估了鳙幼鱼的听觉能力。利用鱼类听觉诱发电位(Auditory Evoked Potential, AEP)技术测定了3组不同体长[小:(7.9±0.4) cm;中:(10.9±0.8) cm;大:(14.2±0.7) cm]的鳙幼鱼在不同频率声音刺激下的脑电反应,确定了其听觉阈值和听觉发育规律。结果表明:鳙幼鱼的听觉阈值曲线呈非对称的“V”形,对200—400 Hz的低频声音较为敏感,其中最敏感的频率为400 Hz,平均听觉阈值为(93.0±3.0) dB;在不同体长组之间,鳙幼鱼听觉能力在100、400和1000 Hz三个频率下存在显著差异,而其余频率则未观察到显著差异;在最敏感的400 Hz频率下,大体长组的平均听觉阈值比小体长组显著降低了5 dB(P<0.05),表明了鳙幼鱼听觉能力随个体生长或发育呈增强趋势。本文的发现不仅为建立基于尺寸选择性的声学行为控制技术提供了关键生理学参数,也为鳙的渔业管理和生态保护提供了科学依据。

摘要: 本研究旨在探讨蝇蛆粉(Housefly maggot meal, HMM)替代鱼粉饲料中添加牛磺酸(Taurine, Tau)对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)摄食、生长性能及肌肉品质的影响,评估蝇蛆粉替代鱼粉及牛磺酸在水产饲料产业的应用潜力。采用等蛋白替代原则,以不添加蝇蛆粉的处理组为对照(Con),另外设置18%蝇蛆粉替代鱼粉(HMM),以及18%蝇蛆粉替代鱼粉再补充1%牛磺酸的两个处理组(HMM+Tau),进行为期8周的养殖试验。实验结果显示, HMM组的摄食率显著低于其他两组(P<0.05), Con和HMM+Tau组的摄食率没有显著性差异(P>0.05);HMM+Tau组npy和ghrelin相对表达量显著上调(P<0.05), HMM和HMM+Tau组pomca相对表达量显著低于Con组(P<0.05)。各处理组生长和饲料系数没有显著差异。蝇蛆粉替代鱼粉对翘嘴鳜肌肉营养成分组成没有显著影响,但可以显著增加肌肉氨基酸含量(P<0.05); Con组C20:4(ARA)含量显著低于其他两组(P<0.05),HMM组C20:5(EPA)含量显著低于Con和HMM+Tau组(P<0.05)。HMM和HMM+Tau组苦味和鲜味-回味显著高于Con组(P<0.05),但鲜味、咸味上显著低于Con组(P<0.05),但在鲜味-回味上HMM和HMM+Tau组不显著(P>0.05)。HMM和HMM+Tau组中肌肉胶原蛋白含量显著高于Con组(P<0.05)。综上所述,蝇蛆粉作为优质蛋白源可有效替代鱼粉对翘嘴鳜生长和饲料利用没有影响,同时补充牛磺酸可以促进翘嘴鳜摄食,改善肌肉品质。

摘要: 通过稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)卵膜蛋白质组测序鉴定黏性卵膜中富集的透明带蛋白(Zona pellucida glycoproteins, Zps),建立可用于卵型研究的稀有鮈鲫zp基因突变体和转基因斑马鱼(Danio rerio)。实验收集稀有鮈鲫胚胎(1hour post fertilization, hpf),分离收集足量卵膜,提取卵膜中的蛋白质进行测序分析。将测序数据进行拼接并与鲤科鱼类蛋白质进行比对,选取匹配度和丰度最高的基因zp2l2和zp4l进行实验。分别在zp2l2和zp4l的第一个外显子、第六个外显子设计CRISPR/Cas9敲除靶点,构建zp基因突变体。扩增斑马鱼zp3.2基因上游启动子序列(2874 base pairs, bps)和zp2l2、zp4l编码序列(1137、3009 bp),通过无缝克隆(Infusion cloning)将zp3.2启动子连接进入具有Tol2转座元件的质粒中,构得质粒pT2AL-zp3.2-eGPF;再将zp2l2、zp4l编码序列克隆到pT2AL-zp3.2-eGPF质粒中,得到可用于胚胎注射的转基因质粒pT2AL-zp3.2-zp2l2-eGPF和pT2AL-zp3.2-zp4l-eGPF。体外转录合成转座酶mRNA与构建的转基因质粒混合进行斑马鱼胚胎显微注射。通过稀有鮈鲫胚胎显微注射及三代鉴定,成功在稀有鮈鲫中敲除zp2l2和zp4l获得稳定遗传的纯合突变体;稀有鮈鲫zp转基因斑马鱼经传代鉴定,筛选得到了可稳定遗传的转基因品系Tg(zp3.2:zp2l2-eGPF)和Tg(zp3.2:zp4l-eGPF),这2个转基因品系的绿色荧光蛋白在斑马鱼胚胎发育的15d(days post fertilization, dpf)开始在卵巢和肝脏中表达。实验构建zp2l2和zp4l稀有鮈鲫突变体和转基因斑马鱼的方法,为鲤科鱼类卵型形成机制的研究提供了可行的实验思路和技术路线。

摘要: 为了探究碳酸酐酶ca12（Carbonic Anhydrase 12）在草鱼应对碳酸盐碱度胁迫中的功能,本研究设置不同NaHCO₃浓度梯度（0、20、40、60、80、100、150 mmol/L）对野生型和基因编辑草鱼进行碱度胁迫,系统分析草鱼各组织（脑、心、肾、鳃）中ca12的表达水平变化,以及在60 mmol/L的NaHCO₃溶液下鳃和肠道组织的组织病理学变化。结果显示,相比野生型草鱼,经过CRISPR/Cas9技术编辑的ca12草鱼嵌合体在不同碱度水平不同时间下存活率更高,并且随碱度提高,肾和鳃组织中ca12的表达量均显著下调。在60 mmol/L NaHCO₃溶液刺激下,嵌合体草鱼的鳃和肠道组织形态发生适应性改变,细胞凋亡率显著低于野生型。研究表明,高碱度胁迫会对鱼体产生不利影响,而经过编辑的草鱼嵌合体在高碱度水体下的存活率明显优于野生型草鱼,说明ca12基因在鱼体处于高碱环境中发挥重要的调控作用,可视作草鱼适应高碱环境的关键靶点,其功能缺失可显著增强草鱼的碱度耐受性。本研究利用基因编辑技术创制的耐碱草鱼新种质,将对实施“改种适地”策略开发盐碱地,拓宽宜渔空间具有战略意义。

摘要: 为探究黄姑鱼(Nibea albiflora)幼鱼肠道菌群变化、关键细菌类群及其与养殖水体细菌群落的相关性,实验以黄姑鱼幼鱼为研究对象,分别于36、46、66、86和106日龄采集黄姑鱼肠道内容物样品和同时期的养殖水体菌群样品,利用16S rRNA高通量测序手段,基于生物信息学方法,系统解析黄姑鱼幼鱼肠道菌群的组成、结构、时序变化、核心物种及其与生长和养殖水体菌群的相关性。研究结果表明,不同日龄黄姑鱼肠道菌群中Chao1指数均显著低于同时期养殖水体,而Shannon指数均显著高于同时期养殖水体;不同日龄黄姑鱼肠道菌群中Chao1指数呈现先显著升高后逐渐稳定的趋势,而Shannon指数则呈现相反的趋势;随着黄姑鱼幼鱼的生长,养殖水体细菌群落中Chao1指数呈现先下降后上升的显著趋势(P<0.05);而Shannon指数呈现先上升后显著下降的趋势(P<0.05)。PERMANOVA和ANOSIM分析揭示,随着黄姑鱼幼鱼的生长,其肠道菌群结构显著改变(P<0.05),同时,幼鱼肠道菌群与同时期的养殖水体细菌群落结构差异显著(P<0.05)。黄姑鱼幼鱼肠道菌群中优势菌门为拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria),其中,拟杆菌门的相对丰度在46日龄后显著升高(P<0.05);相反,厚壁菌门和变形菌门的相对丰度在46日龄后显著降低(P<0.05)。在养殖水体中,优势菌门为拟杆菌门、髌骨菌门(Patescibacteria)和变形菌门;其中,拟杆菌门和髌骨菌门的相对丰度呈现显著升高的趋势,而变形菌门的相对丰度显著下降。在科水平上,黄姑鱼幼鱼肠道菌群中优势菌科为毛螺菌科(Lachnospiraceae)、Muribaculaceae、普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)和链球菌科(Streptococcaceae),其中毛螺菌科、普雷沃氏菌科和链球菌科的相对丰度在46日龄后显著降低(P<0.05),而Muribaculaceae的相对丰度显著升高(P<0.05)。在养殖水体中,优势菌科为Clade＿I、黄杆菌科(Flavobacteriaceae)和红杆菌科(Rhodobacteraceae),其中, Clade＿I相对丰度呈现显著下降趋势(P<0.05),而黄杆菌科和红杆菌科的相对丰度呈现先上升后下降的趋势(P<0.05)。普鲁克分析和溯源分析揭示,黄姑鱼幼鱼肠道菌群与其养殖水体细菌群落相关性不显著(P<0.05)。生境特异性分析、随机森林分析和Mantel检验等方法相结合,揭示了与黄姑鱼生长相关的关键细菌类群。此外,通过黄姑鱼幼鱼肠道菌群的体外分离培养获得2株与其生长相关的潜在原籍益生菌菌株。综上,本研究揭示了黄姑鱼幼鱼肠道菌群的时序变化、关键细菌类群及其与养殖水体细菌群落的相关性,为黄姑鱼幼鱼原籍益生菌的研发提供参考依据。