摘要: 为深入研究黄颡鱼Tachysurus fulvidraco Cu稳态调控机制,从黄颡鱼cDNA中克隆获得了810和192 bp的ccs (Pfccs)和cox17 (Pfcox17)基因编码序列,并成功构建了p ET32a(+)-Pfccs和p ET32a(+)-Pfcox17重组表达载体;转化重组质粒到E. coli Rosetta (DE3)感受态细胞中,以IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)作为诱导剂诱导表达,通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白表达,发现PfCCS蛋白主要在沉淀中表达, PfCOX17蛋白主要在上清中表达;分别采用包涵体和亲和层析纯化的方法得到了纯度较高的重组PfCCS和PfCOX17蛋白;以纯化得到的PfCCS和PfCOX17蛋白免疫Balb/C小鼠3次,制备多克隆抗体。通过Western Blot鉴定了PfCCS和PfCOX17抗血清可以分别特异性识别重组PfCCS和PfCOX17蛋白,也可以分别特异性识别黄颡鱼内源性CCS和COX17蛋白。通过Western Blot对黄颡鱼CCS和COX17蛋白在鳃、心脏和肝脏中的分布情况进行检测,发现黄颡鱼CCS和COX17蛋白在肝脏中具有较高的表达水平, CCS蛋白在鳃中的表达水平最低,而COX17蛋白在鳃和心脏中的表达水平都很低。综上所述,研究成功制备了黄颡鱼CCS和COX17蛋白的多克隆抗体,为深入研究CCS和COX17蛋白在Cu转运中的作用及黄颡鱼Cu稳态调控机制奠定基础。

摘要: 实验以合方鲫2号幼鱼(31.50±0.50) g为实验对象,研究黑水虻幼虫粉(HM)替代饲料鱼粉(0、20%、40%、60%和80%)对合方鲫生长性能、饲料利用、消化能力、血浆生化指标及相关基因表达的影响。实验设计5组等氮(30%)等能(18.50 MJ/kg)等脂(6%)饲料,每组3次重复,每个重复25尾鱼,养殖时间74d。结果表明:增重率和特定生长率随饲料HM含量的升高呈现先升高后降低趋势,且在替代水平为20%时最大;饲料系数呈先降低后升高的趋势, 20%替代组显著小于60%和80%替代组(P<0.05)。肥满度和脏体比均呈现先升高后降低趋势,且均在40%替代组最大; 80%替代组肝体比显著高于0、20%和60%替代组(P<0.05),但与40%替代组无显著差异。全鱼水分和灰分无显著变化; 20%和60%替代组粗蛋白显著低于0组(P<0.05);粗脂肪呈先升高后降低的变化趋势,在20%替代组达到最大值。血浆葡萄糖、总胆固醇含量及谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性无显著差异;血氨含量呈上升趋势, 80%替代组显著高于0组; 20%替代组血浆总氨基酸含量显著高于其他各处理组(P<0.05); 60%和80%替代组血浆丙二醛含量显著低于20%替代组(P<0.05)。20%替代组肠道中lat2、pept1和cdx2基因的表达量均高于其他各处理组, asct2基因表达水平则在替代水平为40%时最大;肝脏中tor和igf1基因表达量均在40%替代组最大, gh和ghr基因表达水平则均在替代水平为60%时最高。黑水虻幼虫粉替代饲料中鱼粉的0—40%不影响合方鲫的生长,且在20%替代水平时可获得最大生长速率。

摘要: 为探究大豆皂甙对杂交黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco♀×Pelteobagrus vachelli♂)生长、免疫及肠道健康的影响,在鱼粉、虾粉及玉米浓缩蛋白为蛋白源的基础饲料中分别添加0、0.20%、0.40%、0.80%、1.60%和4.00%的大豆皂甙,配制成6种等氮等脂的饲料饲喂初始质量为(1.0±0.17) g的杂交黄颡鱼,分别记为D0、D0.2、D0.4、D0.8、D1.6和D4.0等处理组,每组设3个重复,每个重复30尾鱼。60d饲养试验结束后测定生长指标、体组成、血清免疫、抗氧化酶活性和肠道炎症因子表达量等变化。结果显示:(1)与D0组相比,添加大豆皂甙的处理组增重率和特定生长率均显著性降低(P<0.05),饲料系数显著性升高(P<0.05)。试验鱼体蛋白含量和肌肉脂肪含量先降低后升高,体脂含量和肌肉蛋白含量先上升后下降。(2)随着饲料皂甙水平的提高,血清T-AOC持续降低, AKP、NO和CAT活性先升高后降低, ACP活性先降低后升高。(3) D0.8、D1.6和D4.0组试验鱼肝脏ACP活性显著高于其他组(P<0.05); D0和D4.0组试验鱼肝脏CAT活性显著低于其他组(P<0.05);肝脏T-AOC活性表现出先升高后降低的趋势;肝脏MDA含量随皂甙水平升高逐渐降低,添加皂甙的处理组均显著低于D0组(P<0.05);肝脏T-SOD表现出先降低后升高的趋势。(4)随着日粮皂甙水平的不断提高,远端肠道TGF-β和IL-10 mRNA表达不断下调, IL-1β、IL-8、IL-15和TNF-α mRNA表达先上调后下调。综上所述,在饲料中添加一定水平的大豆皂甙对杂交黄颡鱼的生长性能、免疫及抗氧化能力和肠道健康产生了明显的负面影响,当大豆皂甙水平超过0.40%后,杂交黄颡鱼生长和免疫均受到抑制,出现了典型的肠炎现象。因此在黄颡鱼商业养殖中选择饲料需要控制皂甙含量不超过0.40%。

摘要: 研究旨在探讨同质(所有个体均正常摄食或饥饿)或异质(由不同饥饿个体比例组成的鱼群)鱼群的隐蔽所利用及觅食行为差异,以及上述行为对模拟捕食刺激的响应。实验选取喜好集群的德玛森小岩鲷(Chindongo demasoni)幼鱼为研究对象,以设置了隐蔽所臂和食物臂的六臂迷宫为竞技场,考察不同饥饿个体比例鱼群(8尾成员,分别为8F0S、7F1S、4F4S、1F7S和0F8S, F为正常投喂个体, S为饥饿个体),在自发状态及遭遇模拟捕食刺激下在迷宫不同区域的分布和成群动态。研究发现:(1)8F0S鱼群偏好隐蔽所臂;随着鱼群饥饿个体成员比例上升,鱼群在食物臂分布呈线性增加趋势, 0F8S鱼群在隐蔽所臂和食物臂的分布已不再存在差异;(2)隐蔽所臂的鱼群成群频率随饥饿鱼比例的上升呈下降趋势,但食物臂的鱼群成群频率并未随饥饿鱼比例上升而上升,且鱼群单次持续时间和总体时间占比均不受鱼群内部饥饿个体占比的影响;(3)模拟捕食刺激导致实验鱼在隐蔽所臂分布显著上升,应激状态下几乎所有集群均发生在隐蔽所臂,且该变化不受鱼群组成的影响。研究表明:(1)在陌生环境下德玛森小岩鲷的行为策略是优先避敌,其次才是营养需求;(2)在实验条件下德玛森小岩鲷的集群行为可能主要由多数群体成员共同决定。

摘要: 为探究发酵豆粕和豆粕替代部分鱼粉对银鲑(Oncorhynchus kisutch)幼鱼生长性能、血清生化指标、肝脏抗氧化能力和免疫相关基因mRNA表达量的影响,试验设置4种等氮等脂等能的饲料(粗蛋白约为42%、粗脂肪约为15%):对照组为:添加41%鱼粉的饲料(FM组;鱼粉蛋白占比27%);试验组分别为在FM组中用豆粕替代部分鱼粉(SM组;鱼粉蛋白占比17%,豆粕蛋白占比10%)、在FM组中用豆粕和发酵豆粕混合替代部分鱼粉(FSM5组;鱼粉蛋白占比17%,豆粕蛋白占比5%,发酵豆粕蛋白占比5%)、在FM组中用发酵豆粕替代部分鱼粉(FSM10组;鱼粉蛋白占比17%,发酵豆粕蛋白占比10%),饲养体重为(102.25±0.24) g的银鲑幼鱼10周。生长结果表明, FSM10组的增重率、特定生长率、日增重率、肥满度与对照组没有显著差异(P>0.05); FSM5组特定生长率、增重率和日增重显著低于对照组(P<0.05),但显著高于SM组(P<0.05);各组间肝体比、脏体比和存活率没有显著差异(P>0.05)。肌肉成分结果显示,各组水分、灰分和粗蛋白没有显著差异(P>0.05), SM组的粗脂肪显著低于对照组(P<0.05)。血清生化试验结果表明, FSM10组血清葡萄糖、总胆固醇、白蛋白和总蛋白含量与对照组没有显著差异(P>0.05); FSM5组血清葡萄糖、白蛋白和总蛋白含量显著低于对照组(P<0.05),但显著高于SM组(P<0.05);各组间碱性磷酸酶、谷草转氨酶和谷丙转氨酶酶活没有显著差异(P>0.05)。肝脏抗氧化能力试验结果表明, FSM10组超氧化物歧化酶和过氧化氢酶酶活显著高于对照组(P<0.05),还原型谷胱甘肽含量与对照组没有显著差异(P>0.05),丙二醛含量显著低于对照组(P<0.05); FSM5组过氧化氢酶酶活和还原型谷胱甘肽含量显著高于SM组(P<0.05),丙二醛含量显著低于SM和对照组(P<0.05),超氧化物歧化酶酶活与对照组和SM组没有显著差异(P>0.05),但显著低于FSM10组(P<0.05)。肝脏免疫和炎性相关基因试验结果表明, FSM10组sod-3、lyz、tlr-3和c3α基因mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05); tlr-7基因mRNA表达量与对照组无显著差异(P>0.05);各组间il-6和hsp-70基因mRNA表达量无显著差异(P>0.05); FSM5组lyz和tlr-3基因显著高于SM组。综上所述,在试验条件下,使用发酵豆粕替代10%鱼粉蛋白对银鲑生长性能和血清成分没有不良影响,对肝脏抗氧化能力和免疫基因表达具有积极的促进作用,因此可以在银鲑饲料中使用发酵豆粕替代10%的鱼粉蛋白。