摘要: 草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus, GCRV)是导致该病的主要病原,研究将Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒GCRV-873株的外衣壳蛋白VP7基因进行原核表达,获得高度纯化VP7重组蛋白,通过免疫BALB/c小鼠,首次制备筛选得到高效价单克隆抗体。结果显示, GCRV-I vp7基因可在原核表达系统中高效表达,主要以包涵体形式存在,大小约为40 kD。免疫小鼠后筛选到了5株IgG类型阳性杂交瘤细胞株,其中3株亚型为IgG1, 2株亚型为IgG2a。Western Blot实验和直接免疫荧光实验显示,该抗体可特异识别GCRV-873,并且ELISA检测原核重组蛋白的效价高达204800,亲和常数为4.04×10~9。研究制备的VP7蛋白单克隆抗体,为GCRV-I病毒诊断技术开发及病毒感染机制的深入研究提供实验基础。

摘要: 极端的环境造就了南极独特的生物群体,其中鱼类是南大洋生态系统中最具多样性的脊椎动物,也是许多寄生虫的中间或终末宿主。南极鱼类寄生虫种类丰富,是南大洋海洋生物多样性的重要组成部分。探究南极鱼类及其寄生虫的营养关系可为阐释南极海洋生态系统功能及其变动提供重要的生态数据。虽然关于南极鱼类寄生虫的研究已有一百多年的历史,但这些研究主要集中在寄生虫的种类鉴定、区系调查和组织病理等方面。由于南极鱼类寄生虫研究跨度时间长、地域范围广,相关研究较为零散。文章综述了南极鱼类寄生线虫、绦虫以及桡足类的种类组成、宿主范围和地理分布等方面的研究,并对今后开展南极鱼类寄生虫研究工作提出了展望。

摘要: 为探究氨氮胁迫对不同食性鱼类的影响,研究选取不同食性的4种鱼类(鲢Hypophthalmichthys molitrix、草鱼Ctenopharyngodon idella、团头鲂Megalobrama amblycephala和黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco)仔鱼为研究对象,探讨不同浓度氨氮(0、1、2和3 mg/L)短期胁迫(96h)对其生长、抗氧化和非特异性免疫响应的影响及其分子机制。结果显示:(1)氨氮胁迫导致4种仔鱼的体长生长速度呈现剂量依赖性减缓;(2)不同浓度氨氮导致4种仔鱼体内T-AOC、CAT和GPx含量显著降低(P<0.05), 2和3 mg/L氨氮暴露显著降低了草鱼、团头鲂和黄颡鱼仔鱼体内SOD活力(P<0.05),仅检测到黄颡鱼gpx及鲢sod转录水平出现显著性下调(P<0.05);(3)在不同浓度氨氮胁迫下, 4种仔鱼相关免疫基因转录水平均呈现一定的上调,仅鲢il1β转录水平显著下降(P<0.05),相对地草鱼仔鱼LYZ含量显著性下降,黄颡鱼仔鱼LYZ含量在2 mg/L氨氮组显著性上升(P<0.05)。双因素方差分析显示,氨氮对所有抗氧化酶、免疫指标及免疫相关基因有显著影响,不同种仔鱼之间T-AOC、CAT、GPx和C3及基因cuznsod、gpx、il1β和c3之间差异显著(P<0.05),但鱼种和氨氮互作效应仅对C3和基因gpx、tnfα、il1β、c3影响显著(P<0.05)。研究表明,高浓度氨氮急性胁迫引起仔鱼生长迟缓和氧化应激,降低了其抗氧化性能,削弱了其非特异免疫防御机能。相比较而言,肉食性的黄颡鱼仔鱼对氨氮的耐受性较其他几种仔鱼弱,草食性的团头鲂和草鱼仔鱼居中,而鲢仔鱼对氨氮的耐受性较强。

摘要: 为研究不同浓度的玉屏风多糖合生元对热应激草鱼免疫性能的影响,选360尾健康草鱼Ctenopharyngodon idella (20±2) g,随机分为4组。其中Ⅰ组为对照组,试验组(Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组)在饲喂基础日粮的基础上分别添加0.08%、0.12%和0.20%玉屏风多糖,并在饲喂前按复合益生菌体积(mL)/饲料重(g)为1%的剂量添加复合益生菌拌料,整个试验期为21d。在饲养试验结束后,对草鱼进行热应激48h处理,在0h、6h、24h和48h的4个时间点采集样品并测定血清、肝脏生化指标和肝脏相关基因表达量。结果表明:Ⅲ组草鱼血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)在各时间点均显著低于对照组(P<0.05);同时,草鱼肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和谷胱甘肽还原酶(GR)在各时间点均不同程度高于对照组,其中SOD在0h和24h(P<0.05), GR在0h和48h均显著高于对照组(P<0.05),而MDA均低于对照组,其中在24h和48h显著低于对照组(P<0.05);草鱼肝脏中Nrf2、Cu/Zn-SOD、GSH-Px、GR、HSP70和MHCⅡ相对表达量在各时间点均不同程度高于对照组,其中GR和MHC II相对表达量在各时间点均显著高于对照组(P<0.05),而Keap1和IL-8在各时间点均在不同程度低于对照组,其中Keap1在各时间点均显著低于对照组(P<0.05), IL-8均差异不显著(P>0.05)。总之,随着热应激时间的延长,草鱼的血清和肝脏生化指标、肝脏相关基因表达量均产生了不同程度的变化,说明热应激后草鱼产生了强烈的应激反应。在饲料中添加0.12%的玉屏风多糖合生元最有利于提高草鱼的抗氧化应激能力,有效缓解肝脏氧化损伤,具有较好的免疫调节作用。

摘要: 研究基于四级阻抗技术的在线生物监测系统,参照国家地表水环境质量标准(GB3838-2002)中对Ⅰ类和Ⅳ类地表水氨氮质量标准的限值分类,探究0.15和1.5 mg/L氨氮胁迫下15d内斑马鱼(Danio rerio)行为响应,为环境胁迫下斑马鱼的行为响应提供数据支撑。实验采用斑马鱼游动强度和速率综合行为强度来反映其行为变化,对实验数据进行SPSS差异性分析、自相关分析(Autocorrelation)和自组织神经网络(Self-organization mapping net, SOM)分析。研究结果:(1)在对照组中,行为强度数据平均值为0.69±0.13,光周期行为强度数据(0.73±0.13)高于暗周期(0.66±0.14; P<0.01),且光暗周期差异值为10.61%;在氨氮胁迫组(NH3-N, 0.15和1.5 mg/L)实验中,斑马鱼行为强度平均值分别为0.68±0.09和0.64±0.09,差异值分别为7.6%和18.64%,与对照组相同,光周期行为强度明显高于暗周期(P<0.01),证明斑马鱼的昼夜节律性。(2)在氨氮胁迫下斑马鱼行为响应最显著的特点是行为活动遭到抑制。低浓度胁迫轻微抑制,高浓度胁迫严重抑制。在有效氨氮浓度下,浓度越高,抑制作用越明显(P<0.001)。(3)斑马鱼行为响应具有显著的昼夜节律现象。Autocorrelation中正负相关峰值交替性出现,总体表现出较为良好的对称性和以24h循环的周期性,通过SOM分析,大部分行为强度数据与光暗周期时间分布相匹配,说明斑马鱼的昼夜节律现象。研究表明斑马鱼行为响应具有明显的昼夜节律现象,光周期行为强度高于暗周期,周期为24h左右;在氨氮胁迫下斑马鱼行为强度遭到抑制,在有效氨氮浓度下浓度越高,抑制作用越明显,出现时间节点延迟和聚类分析异常的现象。研究使用第三代在线生物行为监测系统,其灵敏性和精确度显著提高,能够实时准确反映氨氮胁迫下斑马鱼的行为响应变化,也表明在线生物监测技术在水生生物行为学研究中发挥着不可或缺的作用。