摘要: 克隆高原鼠兔脑红蛋白(Neuroglobin,NGB)基因编码区并检测其在成年高原鼠兔脑组织和其他组织中的表达,同时探讨高原鼠兔低氧适应的分子生物学机制。从高原鼠兔脑组织中提取总RNA,通过RT-PCR获得高原鼠兔NGB cDNA,将其与pGEM-TEasy载体连接,构建重组质粒,蓝白斑筛选阳性克隆并进行鉴定和测序;制备地高辛标记的RNA探针并采用原位杂交法(In suit hybridization,ISH)分析脑红蛋白基因在高原鼠兔脑组织中的分布;采用RT-PCR和蛋白印记(Westernblot)检测高原鼠兔不同组织中脑红蛋白的表达含量。将含有目的片段的阳性克隆经测序和Blast分析,显示其部分编码序列与GenBank中绵羊、大鼠等同源性很高(大于84%),表明本实验所克隆的序列为脑红蛋白基因;原位杂交结果显示NGB在青藏高原土著动物高原鼠兔脑部分布较为广泛;高原鼠兔不同组织中都有NGB mRNA表达,NGB基因并不是中枢神经系统所特有的,睾丸和肾上腺也有较高的表达。NGB基因在高原鼠兔脑组织和其他组织中分布较为广泛,推测NGB mRNA可能在高原鼠兔机体较为广泛的区域中发挥着作用,同时为高原低氧适应相关基因的研究提供了实验依据。

摘要: 瘦素(leptin)由ob基因编码,对调节能量代谢起着重要作用。本研究建立了高原鼠兔瘦素的原核表达系统,并对其进行了原核表达。研究中作者从高原鼠兔瘦素基因的cDNA文库中,扩增编码高原鼠兔瘦素的核酸序列,并利用DNA基因重组技术将其克隆到原核表达载体pET30a(+)中,构建了高原鼠兔瘦素原核表达载体pET30a(+)/ppleptin。对目的片段进行测序确认后,将其转化到大肠杆菌BL21中,并利用IPTG诱导外源性目的蛋白表达。表达的包涵体蛋白经溶解及变性后上柱纯化。重组质粒经测序检测后,表明原核载体构建正确。同时,SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,重组菌在16KD处有明显新增条带,纯化后的目的蛋白条带纯度较高。该结果为高原鼠兔瘦素的后续基础研究提供了基础资料。

摘要: 本文采用观察法和样方法对不同栖息地类型高原鼠兔的贮草选择进行了分析,旨在探讨高原鼠兔在不同栖息地类型中干草堆的放置方式、数量、植物种类组成以及与栖息地类型和冬季食物组成的关系,在此基础上,阐明高原鼠兔建立干草堆的生物学意义。结果表明,高原鼠兔堆集干草堆的方式与其它鼠兔不同,它们将干草堆放置于独一味、甘肃棘豆等植物上,以减少干草堆植物的腐烂;不同栖息地类型干草堆数量有所不同,杂类草草甸中干草堆较多,平均为29.00±17.09个/hm2,其次为垂穗披碱草草甸,干草堆数量平均为16.33±9.50个/hm2,矮嵩草草甸中干草堆最少,平均为12.67±6.66个/hm2。在矮嵩草草甸中,5个较大的干草堆由37种植物组成,其中10种植物选择水平在3级以上,而甘肃棘豆和铺散亚菊占有较大的比例,分别为23.6%和19.1%。不同干草堆间相似性分析结果表明,除第2个干草堆外,其余干草堆间相似性指数较高,最高为第3个和第4个干草堆之间,为0.9070。相关分析结果显示,干草堆主要植物组成与高原鼠兔冬季食物主要组成之间呈显著的正相关(r=0.7323,df=6,P<0.05)。扣笼试验结果表明,高原鼠兔冬季未取食扣笼内的干草堆。在综合分析高原鼠兔的贮草行为的基础上,我们认为,高原鼠兔建立干草堆的目的是为了应付冬季食物条件的不可预测性。

摘要: 高原鼠兔生活在青藏高原海拔3000～5000m的区域,具有极强的低温、低氧耐受能力。低氧诱导因子-1(HIF-1)是一种由HIF-1α和HIF-1β组成的异源二聚体转录因子,在生物体的低氧适应性调节中起着关键作用。低氧主要通过调节HIF-1α蛋白水平来影响HIF-1α的转录活性。本研究用DNA重组技术将高原鼠兔HIF-1α(pHIF-1α)(538/822)编码基因序列亚克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,并在大肠杆菌BL21菌株中进行高效诱导表达,获得可溶性表达产物。将纯化后的GST-pHIF-1α(538/822)融合蛋白作为免疫原免疫家兔制备多克隆抗体。免疫印迹结果表明,制备的抗体能够识别高原鼠兔HIF-1α蛋白。进一步利用亲和纯化的方法对此多克隆抗体进行了纯化。免疫印迹和免疫染色的结果表明,纯化的抗体可以用于检测外源以及内源的高原鼠兔HIF-1α蛋白的表达和定位,为后续的研究提供了重要的实验材料。

摘要: 本文采用胃内容物镜检分析法,对高原鼠兔在矮嵩草草甸、垂穗披碱草草甸和杂类草草甸三种类型栖息地中的主要食物组成进行了比较分析,旨在探讨三类栖息地不同食物资源状况对高原鼠兔食物组成的影响,以及高原鼠兔在食物匮乏的冬季的觅食对策。研究结果表明:高原鼠兔在冬季主要选食弱小火绒草和铺散亚菊,甘肃棘豆、垂穗披碱草和长茎藁本也是冬季食物主要组成部分。在冬季食物资源较为匮乏的情况下,高原鼠兔选食的主要植物种类相对较多,且不同植物比例变化明显,说明高原鼠兔对食物具有一定的选择性。在矮嵩草草甸中,其食物组成依次为铺散亚菊(16.2%)>弱小火绒草(11.5%)>甘肃棘豆(11.3%)>大籽蒿(9.7%)>早熟禾(7.6%)>长茎藁本(7.5%)>垂穗披碱草(5.5%)等7种,占其食物的69.3%;在垂穗披碱草草甸,其主要食物组成依次为垂穗披碱草(15.8%)>甘肃棘豆(14.7%)>弱小火绒草(14.5%)>铺散亚菊(14.2%)>早熟禾(7.8%)>长茎藁本(6.9%)>锥果葶苈(6.2%)等7种,占其食物的80.1%;在杂类草草甸中,其主要食物组成依次为铺散亚菊(20.8%)>长茎藁本(20.6%)>大籽蒿(9.9%)>弱小火绒草(9.8%)>锥果葶苈(6.5%)>圆齿狗娃花(5.5%)等6种,占选食食物的73.1%。不同栖息地之间食物组成比较分析结果表明,在冬季食物资源匮乏的情况下,栖息地类型不同对高原鼠兔食物组成的影响较小,杂类草构成了它们的主要食物,这可能是由食物质量决定的,而不同栖息地中喜食植物可利用量是决定鼠兔食物组成的主要因子,进一步验证了食物可利用量和质量决定植食性小哺乳动物食物选择模式的假设。