摘要: 【目的】探索几丁质合成酶（Chitin synthase，简称CHS）对西花蓟马Frankliniella occidentalis生长发育的影响，旨在寻找一种潜在的西花蓟马防治靶点。【方法】克隆西花蓟马的CHS基因，命名为Fochs，采用RNA干扰（RNAi）技术研究其功能。【结果】Fochs基因开放阅读框全长为4 656 bp，编码1 551个氨基酸，预测分子量为176.02 kD，保守结构域为Glyco-tranf-GTA-type superfamily，西花蓟马Fochs与瓜蓟马Thrips palmi CHS亲缘关系最近。Fochs基因在西花蓟马生长发育的各个阶段均有表达，2龄若虫表达量最高，前蛹次之。沉默Fochs基因120 h后，2龄若虫和前蛹的死亡率均显著增加（P<0.01），化蛹率和羽化率均显著减少（P<0.01）；若虫和蛹均出现了表皮皱缩、体型缩小、畸形等变化，对初羽化成虫几乎没有影响。【结论】几丁质合成酶基因在西花蓟马生长发育过程发挥重要作用，可作为RNAi介导的西花蓟马绿色精准防控的潜在靶标。

摘要: 【目的】明确渐狭蜡蚧菌Lecanicillium attenuatum对西花蓟马Frankliniella occidentalis卵黄原蛋白（Vg）的影响，为西花蓟马的生物防治提供理论依据。【方法】采用浸虫法研究了渐狭蜡蚧菌单次和多次侵染西花蓟马2龄若虫后对F₁-F₃代雌成虫卵黄原蛋白表达量和含量的影响。【结果】在两性生殖方式下，渐狭蜡蚧菌单次侵染西花蓟马2龄若虫时，只有F₂代Vg表达量显著高于对照（P<0.05）；渐狭蜡蚧菌多次侵染后，只有F₁代Vg表达量明显高于对照（P<0.05）。在孤雌生殖方式下，不论单次侵染还是多次侵染，F₂和F₃代Vg表达量均明显高于对照（P<0.05）。在两性生殖方式下，不论渐狭蜡蚧菌单次侵染还是多次侵染，F₁和F₂代的Vg含量均显著高于对照（P<0.05）；在孤雌生殖方式下，单次侵染处理后F₁和F₂代Vg含量均显著高于对照（P<0.05），多次侵染处理下3个世代均显著升高（P<0.05）。【结论】渐狭蜡蚧菌侵染显著影响西花蓟马卵黄原蛋白的表达量及其含量，且影响程度与侵染次数、蓟马的世代及生殖方式有关。

摘要: 【目的】鉴定家蚕Bombyx mori马氏管特异表达基因及其启动子，为家蚕的代谢排泄、解毒及免疫相关基因功能的研究及利用提供新的工具与支撑。【方法】基于家蚕全组织蛋白质组学数据进行马氏管特异表达基因筛选并利用RT-PCR验证基因在家蚕5龄幼虫头、表皮、中肠、脂肪体、马氏管、丝腺、精巢、卵巢、血细胞及气管中的表达；利用qRT-PCR检测家蚕不同发育阶段(卵、 3龄眠、 4龄幼虫、 5龄幼虫、上簇期、蛹和成虫)马氏管中及5龄幼虫头、表皮、中肠、脂肪体、马氏管、丝腺、精巢、卵巢、血细胞和气管中上述特异表达基因的表达量；利用PCR克隆家蚕马氏管特异表达基因BmPiT4175的上游启动子序列，并构建以EGFP为报告基因的转基因载体，获得转基因家蚕，在个体水平验证BmPiT4175上游启动子的活性及组织特异性。【结果】筛选获得了在家蚕马氏管特异表达的基因BmPiT4175;所克隆的BmPiT4175启动子长2 955 bp,其驱动的EGFP仅在转基因家蚕马氏管中特异表达，且EGFP与内源基因BmPiT4175的表达量相当。【结论】BmPiT4175的表达模式及其启动子活性都是家蚕马氏管特异的。

摘要: 实验动物在生命科学领域起着重要的基础性支撑作用,其巨大贡献往往与以承受痛苦和死亡为代价。斑马鱼作为重要的模式生物,近年来成为应用最广泛的实验动物之一。如何在保护实验结果科学可靠的前提下保障斑马鱼福利,是本领域科研人员面对的重要问题。文章系统讨论了斑马鱼研究中实验动物福利的关键点,涵盖痛苦感知、水环境、饲育、实验操作、运输及安乐死等方面,为提升实验室斑马鱼生存质量,推动实验鱼标准化进程提供理论支撑与实践参考。

摘要: 通过稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)卵膜蛋白质组测序鉴定黏性卵膜中富集的透明带蛋白(Zona pellucida glycoproteins, Zps),建立可用于卵型研究的稀有鮈鲫zp基因突变体和转基因斑马鱼(Danio rerio)。实验收集稀有鮈鲫胚胎(1hour post fertilization, hpf),分离收集足量卵膜,提取卵膜中的蛋白质进行测序分析。将测序数据进行拼接并与鲤科鱼类蛋白质进行比对,选取匹配度和丰度最高的基因zp2l2和zp4l进行实验。分别在zp2l2和zp4l的第一个外显子、第六个外显子设计CRISPR/Cas9敲除靶点,构建zp基因突变体。扩增斑马鱼zp3.2基因上游启动子序列(2874 base pairs, bps)和zp2l2、zp4l编码序列(1137、3009 bp),通过无缝克隆(Infusion cloning)将zp3.2启动子连接进入具有Tol2转座元件的质粒中,构得质粒pT2AL-zp3.2-eGPF;再将zp2l2、zp4l编码序列克隆到pT2AL-zp3.2-eGPF质粒中,得到可用于胚胎注射的转基因质粒pT2AL-zp3.2-zp2l2-eGPF和pT2AL-zp3.2-zp4l-eGPF。体外转录合成转座酶mRNA与构建的转基因质粒混合进行斑马鱼胚胎显微注射。通过稀有鮈鲫胚胎显微注射及三代鉴定,成功在稀有鮈鲫中敲除zp2l2和zp4l获得稳定遗传的纯合突变体;稀有鮈鲫zp转基因斑马鱼经传代鉴定,筛选得到了可稳定遗传的转基因品系Tg(zp3.2:zp2l2-eGPF)和Tg(zp3.2:zp4l-eGPF),这2个转基因品系的绿色荧光蛋白在斑马鱼胚胎发育的15d(days post fertilization, dpf)开始在卵巢和肝脏中表达。实验构建zp2l2和zp4l稀有鮈鲫突变体和转基因斑马鱼的方法,为鲤科鱼类卵型形成机制的研究提供了可行的实验思路和技术路线。