摘要: 阿拉善马鹿为国家Ⅱ级重点保护野生动物,仅分布于宁夏和内蒙古交界的贺兰山中段,是我国唯一幸存的该亚种的有效种群。目前关于野生阿拉善马鹿的分子研究尚属空白,本研究于2016年8—9月和2017年2—3月在贺兰山采集新鲜阿拉善马鹿粪便样本396份,使用线粒体Cyt b区DNA引物对提取的DNA进行物种鉴定和9对微卫星引物对其个体识别,共鉴定出278个阿拉善马鹿个体,基于线粒体Cyt b DNA对其全序列进行分析。使用线粒体Cyt b区引物对提取的粪便DNA扩增,获得了1 075 bp的序列,检测到10个变异位点,并定义了10个单倍型。其中10个变异位点占分析长度的0. 93%,均为碱基代换,无碱基插入和缺失。其单倍型多样性为0. 243,核苷酸多样性为0. 000 32。中性检验Tajima's D值为显著负值,Fu和Li's D值为不显著的负值,表示阿拉善马鹿可能经历瓶颈事件并随后出现种群扩张。在系统发育树中,阿拉善马鹿单独聚成一支且与东北马鹿亲缘关系较近,与其他中国马鹿亚种亲缘关系较远。本研究表明野生阿拉善马鹿种群总体遗传多样性较低,建议加强对该亚种的保护力度。

摘要: 为深入探究细胞水平衰老与再生机制的差异，采用过氧化氢（H₂O₂）诱导马鹿（Cervus elaphus）快速生长期鹿茸软骨组织（CA）原代细胞，旨在探索构建衰老细胞模型的实验方法。通过使用不同浓度H₂O₂处理原代细胞，培养72 h后，利用CCK-8法筛选出半数效应浓度，同时结合衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色评估衰老情况，以确定建模相关参数。进一步通过RT-qPCR和Western Blotting检测细胞中控制衰老TP53-CDKN1A（P21）轴的关键标记基因转录和蛋白表达水平。结果表明：经400μmol/L H₂O₂处理后，试验组细胞存活率下降约50%（P<0.001）,SA-β-Gal染色阳性率升高约70%（P<0.001），细胞呈现明显扁平不规则形的衰老特征。RT-qPCR检测显示，试验组TP53和P21转录水平上调（P<0.001）;Western Blotting结果进一步证实，TP53和P21的蛋白水平均显著升高（P<0.001），表明H₂O₂成功诱导鹿茸软骨原代细胞发生衰老。本研究成功建立了利用H₂O₂诱导马鹿鹿茸软骨原代细胞衰老的实验方法，为后续研究提供了细胞水平的衰老模型。

摘要: 为了探究转录因子上游刺激因子1(USF1)调控马鹿（Cervus elaphus）microRNA PC-5p-4811(miR-4811)基因转录的机理，综合运用核心启动子和转录因子结合位点生物信息学预测分析、基因克隆、点突变和双荧光素酶报告基因法等技术研究USF1结合miR-4811启动子分子机制和功能。结果显示：（1）截切突变证实马鹿miR-4811基因的核心启动子位于上游-3 174～-2 966 bp;(2)转录因子USF1在-3 378～+73 bp区域共有2个DNA结合位点（-3 046～-3 031 bp、-3 045～-3 018 bp），均位于miR-4811核心启动子内；（3）USF1作为激活因子可直接结合上述位点激活miR-4811核心启动子上调双荧光素酶报告基因转录表达。研究结果揭示了USF1参与调节microRNA基因转录表达的机理，并为后续USF1/miR-4811调节轴参与调控鹿茸再生发育机制提供了重要基础数据。

摘要: 为了探究转录因子上游刺激因子1（USF1）调控马鹿（Cervus elaphus）microRNA PC-5P-4811（miR-4811）基因转录的机理，综合运用核心启动子和转录因子结合位点生物信息学预测分析、基因克隆、点突变、双荧光素酶报告基因法等技术研究USF1结合miR-4811启动子分子机制和功能。结果显示：（1）截切突变证实马鹿mi-R4811基因的核心启动子位于上游-3 174 ～ -2 966 bp；（2）转录因子USF1在-3 378 ～ +73 bp区域共有2个DNA结合位点（-3 046 ～ -3 031 bp、-3 045 ～ -3 018 bp），均位于miR-4811核心启动子内；（3）USF1作为激活因子可直接结合上述位点激活miR-4811核心启动子上调双荧光素酶报告基因转录表达。研究结果揭示了USF1参与调节microRNA基因转录表达的机理，并为后续USF1/miR-4811调节轴参与调控鹿茸再生发育机制提供了重要基础数据。

摘要: MORF4L2是一种转录因子，通过形成NuA4组蛋白乙酰转移酶复合物来参与异染色质组装和组蛋白修饰，对细胞生长、增殖和凋亡起重要作用。为了探究马鹿（Cervus elaphus）鹿茸中MORF4L2所发挥的功能，使用qPCR技术检测鹿茸不同组织中MORF4L2基因的表达水平，采用PCR克隆马鹿MORF4L2基因的CDS序列，通过多物种比对MORF4L2基因mRNA序列进行相似性分析并构建系统进化树，利用生物信息学方法预测分析MORF4L2编码蛋白的结构与理化性质。结果显示：MORF4L2在马鹿鹿茸的前软骨层中表达量最高；马鹿MORF4L2的mRNA序列较为保守，与加拿大马鹿（C. canadensis）中MORF4L2的相似性最高；马鹿MORF4L2基因CDS区全长为864 bp，编码287个氨基酸，理论等电点为9.73，为碱性蛋白；预测发现马鹿MORF4L2蛋白不存在信号肽，有30个潜在磷酸化位点；蛋白质结构主要由无规则卷曲和α-螺旋构成，主要定位在细胞核中。研究结果可为MORF4L2在马鹿鹿茸生长发育过程中所起的作用提供重要基础数据。