摘要: 【目的】克隆一种梨小食心虫Grapholita molesta触角中谷胱甘肽S-转移酶(glutathione Stransferase,GST)基因并分析其结构特征,明确其表达特点及该基因编码蛋白的酶学特征,以期为该基因的功能研究提供理论依据。【方法】根据梨小食心虫雌虫触角转录组数据,利用RT-PCR克隆梨小食心虫GST基因;通过实时荧光定量PCR测定该基因在成虫触角、头(去触角)、胸、腹、足和翅中的转录水平;利用原核表达系统和Ni离子亲和层析技术表达和纯化梨小食心虫GST重组蛋白,并对重组蛋白的稳定性和酶促动力学参数进行分析。【结果】获得了梨小食心虫谷胱甘肽S-转移酶基因GmolGST6(GenBank登录号:MF503496)的完整编码序列,开放阅读框为645 bp,编码214个氨基酸,分子量为24.21 kD,理论等电点为5.10;进化树分析和三维结构模拟表明GmolGST6属于Delta亚家族。qPCR测定结果表明,GmolGST6基因在雌雄成虫触角中高丰度表达,且在雄虫触角中的表达量显著高于雌虫。重组蛋白GmolGST6具有催化通用底物CDNB的活性,并且在pH7.5,40℃时具有最高的酶活力。重组蛋白GmolGST6的米氏常数K_m为0.21±0.06 mmol/L,最大反应速度V_(max)为14.02±1.40μmol/min·mg。【结论】根据GmolGST6的表达特点及其重组酶对模式底物CDNB的催化活性,推测在触角中高丰度表达的GmolGST6具有参与降解外源物质、保护嗅觉系统免受外源性物质毒害的功能。

摘要: 1981至1982年,在辽宁省绥申县白梨产区用合成梨小食心虫性信息素诱捕法进行了大面积防治梨小食心虫Grapholitha molesta(Busck)的田间试验。防治面积分别为4,000公顷和5,400公顷。平均每公顷设15个性信息素诱捕器。化学防治区每年8—9月份喷两次农药,诱捕区不喷这两次农药。诱捕区梨小食心虫雌蛾的交配率比化防区下降74.2—82.9％;梨小卵的寄生率提高79.2％;梨小虫果率下降50.3—72.8％。

摘要: 【目的】本研究旨在为深入研究梨小食心虫Grapholita molesta尼曼-匹克C2型蛋白(Niemann-Pick type C2 protein, NPC2)GmolNPC2的嗅觉感受功能提供理论参考。【方法】基于梨小食心虫触角转录组数据，利用RT-PCR扩增GmolNPC2的cDNA全长序列，进行系统进化分析和3D结构模型预测；利用RT-qPCR检测GmolNPC2在梨小食心虫不同发育阶段(卵、1-5龄幼虫、蛹和雌雄成虫)、3日龄雌雄成虫不同组织(触角、去除触角的头、胸、腹、足和翅)中的相对表达量；利用荧光竞争结合实验测定重组GmolNPC2蛋白对包括6种性信息素和38种寄主植物挥发化合物在内的44种气味配体的抑制常数K_i值，分析结合能力；通过分子对接模拟实验计算GmolNPC2与不同气味配体的结合能，预测蛋白和配体相互作用的关键氨基酸残基。【结果】获得梨小食心虫GmolNPC2(GenBanK登录号：OQ054801)的cDNA全长序列，开放阅读框(ORF)长438 bp,编码145个氨基酸；多序列比对发现GmolNPC2具有昆虫NPC2典型的结构特征；系统进化分析表明已知鳞翅目(Lepidoptera)昆虫的NPC2s聚类至2个分枝，GmolNPC2与大豆食心虫Leguminivora glycinivorella、红铃虫Pectinophora gossypiella和烟草天蛾Manduca sexta等的NPC2氨基酸序列一致性较高并聚类至同一分枝。RT-qPCR检测结果表明，GmolNPC2在梨小食心虫雄成虫和卵中的表达量显著高于其他发育阶段的；GmolNPC2在3日龄雌雄成虫翅中的表达量最高，在触角中的次之，在胸、腹和足中的最低。重组蛋白GmolNPC2的结合谱较窄，仅能够结合44种气味配体中的17种，对其中的乙酸-顺-8-十二碳烯酯、苯甲醇和乙酸-顺-3-己烯酯表现出强烈的结合能力，K_i值分别为(4.117±0.046),(4.845±0.079)和(3.979±0.167)μmol/L。分子对接模拟结果显示，GmolNPC2与不同气味配体之间的结合能存在差异，与上述荧光结合实验的结果较一致。疏水性氨基酸残基和氢键在GmolNPC2结合不同气味配体中发挥着重要作用。【结论】GmolNPC2具有昆虫NPC2家族的保守结构，在卵和成虫以及成虫翅和触角中的表达量较高，推测其参与梨小食心虫的多种生理过程。重组蛋白GmolNPC2能够选择性地结合性信息素和寄主植物挥发化合物，表明GmolNPC2参与对挥发性信息物质的识别和运输。

摘要: 【目的】梨小食心虫Grapholita molesta是一种重要的果树常发性害虫。本研究旨在探明光照强度在梨小食心虫产卵选择中的作用，进一步揭示梨小食心虫的微光视觉能力。【方法】在春、夏和秋季分别调查梨小食心虫在桃树树冠向阳面和背阴面等部位的产卵量，测定日落时向阳面和背阴面的光照强度差异；室内利用光暗双向选择行为试验测定梨小食心虫成虫对光照强度的产卵选择行为反应。【结果】春、夏和秋季梨小食心虫成虫均偏好在光照强度显著较高的桃树树冠向阳面叶片上产卵，总产卵量分别为背阴面的4.24, 9.30和5.82倍。在光暗双向选择中，10 000, 100, 1和0.01 lx及自然光照条件下，梨小食心虫成虫对光照的产卵选择性均显著高于对黑暗，产卵选择率分别为87.48%, 83.68%, 82.92%, 80.08%和84.84%。通过比较梨小食心虫对强光和弱光的产卵选择性发现，光照对比度(强光/弱光)为10和2时，10 000, 100, 1和0.01 lx及自然光照条件下，雌成虫均对强光照表现出显著的产卵选择性，且随光照强度降低产卵选择性无明显减弱，产卵选择率均高达75%以上。【结论】光照强度可以影响梨小食心虫成虫的产卵选择性，雌成虫对强光照表现出明显的产卵偏好性，即使在微光条件下依然可以准确辨别出光照强度差异，展现出良好的微光视觉能力，为开发基于视觉行为调控的新型物理诱捕技术提供依据。

摘要: 【目的】本研究旨在探明梨小食心虫Grapholita molesta在不同发育阶段、成虫不同组织以及不同浓度的3种杀虫剂处理后成虫中稳定表达的内参基因，为后续对梨小食心虫目的基因表达的研究奠定基础。【方法】基于梨小食心虫转录组数据筛选10个候选内参基因(β-actin, 18S rRNA,β-tubulin,EF-1α,RPL13,RPL32,RSPL40,UBC7,α-tubulin和RPS20);通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定候选内参基因在梨小食心虫不同发育阶段(卵、1-5龄幼虫、蛹和成虫)、成虫不同组织(头、前肠、中肠、后肠、脂肪体、马氏管、精巢和卵巢)以及不同浓度的3种杀虫剂(阿维菌素：19.819, 72.897和179.663μg/mL;吡虫啉：17.638, 163.323和762.986μg/mL以及高效氯氟氰菊酯：33.791, 96.123和198.282μg/mL)通过玻璃管药膜法处理后成虫中的表达量；利用geNorm, NormFinder,ΔCt, BestKeeper和RefFinder对10个候选内参基因的表达稳定性进行评价。选择梨小食心虫细胞色素P450基因CYP354A32进行验证。【结果】结合qRT-PCR结果和软件评价结果表明，梨小食心虫不同发育阶段内参基因表达稳定性从高到低依次为β-tubulin, 18S rRNA,EF-1α,RPL13,β-actin,RPS20,UBC7,RPL32,α-tubulin和RSPL40;成虫不同组织内参基因表达稳定性从高到低依次为UBC7,β-tubulin,β-actin, 18S rRNA,RSPL40,EF-1α,RPS20,RPL13,RPL32和α-tubulin;不同浓度阿维菌素、吡虫啉和高效氯氟氰菊酯处理后成虫中内参基因表达稳定性从高到低依次为RPS20,RPL13,β-tubulin,β-actin,RPL32,RSPL40,EF-1α,UBC7,α-tubulin和18S rRNA。用所获得的内参基因组合对CYP354A2表达特性进行的分析结果表明，用β-tubulin, 18S rRNA和EF-1α组合作为内参基因时CYP354A2在高龄幼虫及成虫中表达量较高，用UBC7,β-tubulin和β-actin组合作为内参基因时在成虫精巢和卵巢中有较高表达，且用RPS20,RPL13和β-tubulin组合作为内参基因时不同浓度杀虫剂处理后仅有19.819μg/mL阿维菌素处理时CYP354A2表达量高于对照，其余浓度杀虫剂处理时CYP354A2表达量均低于对照。【结论】梨小食心虫不同发育阶段目的基因表达的研究推荐使用β-tubulin, 18S rRNA和EF-1α组合作为内参基因；梨小食心虫成虫不同组织目的基因表达的研究推荐使用UBC7,β-tubulin和β-actin组合作为内参基因；不同浓度阿维菌素、吡虫啉和高效氯氟氰菊酯处理梨小食心虫成虫后目的基因表达的研究推荐使用RPS20,RPL13和β-tubulin组合作为内参基因。