摘要: 经研究,云南的青鳉鱼类有2种:(1)分布于西双版纳的小青鏘 Oryzias minutillus Smith为中国境内首次记录;(2)另一种是新亚种,定名中华青鳉 Oryzias latipes sinentis subsp.nov.广泛分布于云南及中国其他地区。本新亚种与产自日本的指名亚种日本青鳉 Oryzias latipes latipes Temminck et Schlegel的主要区别在于:本新亚种的第一肋骨连接第二而不是第三脊椎骨上;平均脊椎骨数为29.2±0.6而不是30.3±0.5;胸鳍条多数为9而不是多数为10枚;染色体数目2n=46而不是2n=48。这些差异,明显地表示了由于地理隔离而引起的亚种分化。

摘要: 2015年11月在中国广西省靖西市龙江河(22°59′25″N,106°21′50″E,海拔664 m)采得青鳉属鱼类30尾,经鉴定为中国鱼类新纪录种——鳍斑青鳉(Oryzias pectoralis Roberts,1998)。其主要鉴别特征为:体形细长而侧扁;胸鳍基部具黑色斑块;背鳍和臀鳍鳍条无角化延伸;尾鳍末端呈圆弧状;尾鳍上下边缘的鳍条呈橙黄色。通过设计简并引物进行PCR扩增得到CO1基因序列,以其657 bp序列与同属其他种比较并构建邻接进化树,以斑马鱼(Danio rerio)和食蚊鱼(Gambusia affinis)为外群,所得系统树支持形态鉴定结果。该鱼标本现保存于湖南师范大学生命科学学院脊椎动物标本室。

摘要: 应用“Long PCR”技术 ,用 6对 p5 3引物从青胚胎干细胞基因组DNA中扩增出 6个相互重叠的片段 ,其中最大的片段长达 4 5kb ,这 6个PCR片段覆盖了整个 p5 3基因。序列分析表明青p5 3基因长约 8 7kb ,由 11个外显子和 10个内含子组成。结构比较表明 ,青 p5 3基因在大小上与人和小鼠 p5 3基因存在较大差异。青p5 3基因的内含子 1仅为 0 85kb ,而人和小鼠p5 3基因的内含子 1则分别长达 10kb和 6kb ;青 p5 3基因的外显子 3(86bp)明显大于人和小鼠 p5 3基因的外显子 3(2 2bp) ;外显子 4 (170bp)比人 (2 80bp)和小鼠 (2 6 0bp)的外显子 4小 ;内含子 10 (3 5kb)则比人和小鼠内含子 10 (0 7kb和 0 9kb)大得多。用SVTK neo基因作正选择标记基因 ,用SVTK tk基因作负选择标记基因 ,用青 p5 3基因组片段作同源序列 ,构建了鱼类 p5 3基因同源重组载体。将此载体转染青胚胎干细胞 ,并经G4 18和Ganc药物选择后证明上述正、负选择标记基因在干细胞中能够有效表达 ,并提供对G4 18的抗性和对Ganc的敏感性。

摘要: Wingless-type MMTV integration site family,member 4(WNT4) is a critical signaling molecule,regulating cell-cell interactions,proliferation,differentiation,migration,and gene activation [1,2].It is a highly conserved gene with mammals and has multiple roles in organogenesis and homeeostasis,and it has special importance in the sexual differentiation of the ovary [3 - 6].

摘要: 青鳉(Oryzias latipes)是研究遗传发育和细胞多能性的重要模式鱼类,为探究prdm14同源基因的潜在作用,实验将青鳉prmd14经原核表达后制备了兔抗Prdm14多克隆抗体。首先,将prdm14基因的部分编码区连接到p ET32a质粒中,构建重组表达载体p ET32a-prdm14?600。随后将重组载体转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3),经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,获得分子量为60 k D的Prdm14重组蛋白。接着大量诱导蛋白表达并切胶纯化,免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),6周后获得阳性抗体,最后通过ELISA和Western blot检测抗体效价及其特异性。结果显示,在37℃、0.6 mmol/L IPTG、诱导3h的条件下,可获得Prdm14重组蛋白的高效表达;制备的兔抗青鳉Prdm14多克隆抗体能够特异性识别青鳉组织中表达的Prdm14蛋白以及在Hep G2细胞中过表达的青鳉Prdm14:EGFP融合蛋白。综上所述,研究首次制备了一种能有效识别青鳉Prdm14的多克隆抗体,该抗体的获得为后续研究prdm14基因在鱼类多能性干细胞中的作用提供了有力工具。