摘要: 【目的】建立中华按蚊Anopheles sinensis与雷氏按蚊Anopheles lesteri实时荧光定量PCR(qPCR)检测技术，为2种传疟按蚊的准确鉴定提供分子鉴定方法。【方法】建立2种按蚊的样本库，利用形态学方法和基因测序对蚊虫样本进行鉴定；合成并克隆阳性质粒质控品。从NCBI数据库上下载中华按蚊和雷氏按蚊的rDNA-ITS2序列，利用Prime3软件在线设计2种按蚊的引物和探针，并验证该PCR方法的最低检测限、敏感性、特异性和可重复性。【结果】收集并鉴定4种383头蚊虫，其中中华按蚊159头、雷氏按蚊104头、致倦库蚊Culex pipiens quinquefasciatus 60头和白纹伊蚊Aedes albopictus 60头。中华按蚊和雷氏按蚊的qPCR的最低检测限均为31.50拷贝/反应，标准曲线线性关系相关系数（R2）均为0.99。敏感性和特异性均为100%，重复性试验结果显示，中华按蚊和雷氏按蚊的组内和组间变异系数均小于2%。【结论】本方法所建立的TaqMan探针qPCR方法灵敏度高，特异性高，可用于中华按蚊和雷氏按蚊的分子鉴别。

摘要: 【目的】探讨我国雷氏按蚊Anopheles lesteri的群体差异和分化程度。【方法】采用PCR方法,从分子水平鉴别了采自我国和韩国的雷氏按蚊共9个群体139个样本,扩增其线粒体DNA细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因,并进行序列测定和分析。【结果】本研究共获得49个单倍型,各单倍型呈高水平的平行演化,来自云南群体的单倍型显示是扩张的源头。分子变异等级分析(AMOVA)的计算结果显示,群体内变异占总变异的比例(64.95%)大于群体间(35.05%),FST值为0.3504,各群体间出现遗传分化。Mantel检验结果显示基因流水平与地理距离呈负相关关系(R2=0.1322),群体遗传结构符合距离隔离模型。【结论】雷氏按蚊韩国和辽宁群体与其他分布地群体间差异大,已出现明显分化,我国其他分布地群体间的遗传差异小。

摘要: 本研究对雷氏按蚊的微卫星DNA序列进行了分离,并筛选了其中具有多态性的微卫星位点。应用雷氏按蚊基因组DNA的酶切片段与生物素标记的寡核苷酸探针杂交,亲合素富集和超滤离心浓缩目的片段,扩增放大后克隆并测序,获得雷氏按蚊微卫星DNA序列。在其中挑选合适的微卫星位点,建立扩增体系。应用雷氏按蚊现场样本对不同的微卫星DNA进行扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选具有多态性的位点。本研究结果获得了雷氏按蚊微卫星DNA序列58条,Gen Bank注册登记号为EF620299^EF620356。其中,完整序列41条,占70.7%;非完整序列7条,占12.1%,复合序列9条,占15.7%;仅1条为非典型序列。电泳结果显示其中14个微卫星位点中有11个具有多态性。

摘要: 为确定可靠的雷氏按蚊Anopheleslesteri Baisaset Hu,1936分类鉴别特征,对采自不同地区的雷氏按蚊进行了形态、染色体和分子特征的观察和分析。检视了辽宁、广东现场标本,江苏实验室品系的成蚊、虫卵特征,描述了染色体核型,并测定了采自广东、辽宁、河南和云南4省的现场标本,以及江苏、海南和广西实验室品系的核糖体DNA间隔2区(ITS2)和D3序列。结果显示成蚊、虫卵形态变异较大,不具备稳定、明确的鉴别特征;染色体核型具有多态现象,性染色体X、Y分别有3个和2个类型,可分为染色体型A与B;唯有ITS2分子序列具有客观、稳定的种间差异,系雷氏按蚊可靠、可行的鉴别特征。

摘要: 本文对韩国中华按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊核糖体DNA (rDNA)内转录间隔 2区 (ITS2 )序列进行了比较研究。用PCR扩增的rDNA ITS2片段直接测序 ,每种蚊测定 3个个体 ,结果显示 :韩国中华按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊的rDNA ITS2序列长度分别为 4 6 8bp、 4 51bp和 4 53bp ,GC含量分别为 4 4 .87%、 4 6 .2 %和 4 5.7% ,3种按蚊序列差异范围为 12 .16 %— 30 .74 %。研究表明 ,rDNA ITS2序列差异可用于韩国中华按蚊、雷氏按蚊和八代按蚊的分子鉴别。