摘要: 采用透射电镜观察了贝氏隐孢子虫在珍珠鸡气管和法氏囊的发育。贝氏隐孢子虫各期虫体均在上皮细胞微绒毛所形成的带虫空泡内发育，虫体基部有一营养器。滋养体呈圆形，有一个细胞核。胞质中有发达的粗面内质网。裂殖体经２或３次核分裂，以出芽方式形成４或８个裂殖子。成熟的裂殖子呈香蕉形，大小为２．８５×０．７０μｍ，被双层膜。小配子体由滋养体发育而来，内含多个缺少核仁的细胞核，细胞核移向胞质浅层，并进入胞质突起成为小配子的细胞核。大配子内可观察到二种成囊体和大量多糖颗粒，并在其胞质的空泡内发现小配子类似物。孢子生殖也在带虫空泡内进行，最终形成一个大残体和４个子孢子。子孢子有一个细胞核，富含微线和多糖颗粒。

摘要: 目的 探究微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白的亚细胞定位。方法 本研究以微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白1(Cryptosporidium parvum Amino acid transporter 1, CpAAT1)为研究对象，设计合成了特异性多肽片段，免疫家兔制备多克隆抗体。利用Western blot验证该抗体的特异性，通过间接免疫荧光的方法对该蛋白的亚细胞定位进行了分析。结果 CpAAT1多克隆抗体能特异性识别虫体天然蛋白，后者在微小隐孢子虫生活史的各个时期均有表达。子孢子时期，CpAAT1定位于虫体表膜；无性生殖期时该蛋白定位在成熟的裂殖子表膜；在有性生殖阶段，雌雄配子体均可被该抗体标记。结论 本研究为进一步探索微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白的转运机制提供了一些新线索。

摘要: 目的 本研究以微小隐孢子虫含有纤维连接蛋白Ⅲ型结构域蛋白（Cryptosporidium parvum fibronectin typeⅢdomain-containing protein, CpFN3）为研究对象，研究其亚细胞定位和黏附特性。方法 该蛋白由cgd4＿640基因编码、全长为含有2 430个氨基酸的I型跨膜蛋白。设计特异性抗原多肽并免疫家兔，获得多克隆抗体，利用亲和纯化法获特异性抗体；经Western blot方法验证该抗体特异性，再通过间接免疫荧光法（IFA）进行蛋白定位。通过原核表达获得重组蛋白（His-CpFN3）,通过ELISA确定重组蛋白与HCT-8细胞和肝素的结合情况。结果 成功获得纯化的抗CpFN3抗体，Western blot分析显示该抗体可识别条带大小约为280 kDa; IFA结果表明该蛋白定位于子孢子的表膜，呈点状分布。该蛋白在子孢子入侵阶段及胞内无性繁殖和有性繁殖阶段均有表达。利用重组蛋白，确定了CpFN3能够与HCT-8细胞及肝素结合（结合常数K_d分别为0.23和1.21μmol/L）,并呈剂量依赖性和可饱和性。结论 本研究确定CpFN3参与了虫体与宿主细胞的黏附过程。

摘要: 目的 建立一种快速、敏感、特异、可同时检测隐孢子虫、球虫和牛细小病毒的多重PCR检测方法。方法 针对隐孢子虫SSU rRNA基因、球虫SSU rRNA基因、牛细小病毒VP2基因分别设计特异性引物并构建重组质粒标准品。经温度梯度PCR法和单一控制变量法优化反应条件，建立多重PCR检测方法并对其敏感性、特异性、重复性和临床应用进行评价。结果 多重PCR方法的最佳退火温度为60.5℃,球虫上下游引物各为0.2μmol/L、隐孢子虫和牛细小病毒上下游引物各为0.4μmol/L;建立的方法敏感性高，对隐孢子虫、球虫和牛细小病毒的重组质粒标准品的最低检测下限分别为243、260和3 110 copies;特异性强，与牛群常见沙门氏菌、病毒性腹泻病毒、轮状病毒等10种病原无交叉反应。重复性好，批内与批间实验结果均一致。利用建立的多重PCR方法对从四川甘孜州部分地区送检的81份临床腹泻样品进行检测，结果隐孢子虫、球虫和牛细小病毒的阳性率分别为18.52%(15/81)、34.57%(28/81)、18.52%(15/81),三者混合感染阳性率为3.7%(3/81)。结论 建立的隐孢子虫、球虫和牛细小病毒多重PCR方法，可为临床3种常见牦牛腹泻病原的鉴别诊断及流行病学调查提供技术支持。

摘要: 目的 本研究旨在阐明微小隐孢子虫亲环蛋白CpCyP1（Cryptosporidium parvum cyclophilin protein-1）的亚细胞定位和酶动力学等特征，为进一步深入研究其生物学功能和探索抗虫药物靶点提供基础。方法 采用荧光定量qRT-PCR,对CpCyP1基因在隐孢子虫不同发育时期转录水平进行分析；通过原核表达系统获得带有His标签的CpCyP1重组蛋白（His-CpCyP1）,并用该蛋白免疫新西兰家兔以制备特异性抗血清，利用亲和层析技术纯化所得抗血清；通过Western blot检测子孢子中的CpCyP1蛋白表达，通过间接免疫荧光（IFA）技术确定CpCyP1在虫体内不同发育阶段的亚细胞定位；最后，通过吸光度比色法测定His-CpCyP1的肽基脯氨酰顺反异构酶（peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, PPIase）活性，并评估环孢菌素A（cyclosporine A, CsA）对His-CpCyP1酶活性的影响。结果 CpCyP1基因在隐孢子虫的各个发育阶段均有转录，尤其在裂殖体和配子阶段表达量较高；CpCyP1蛋白在子孢子和细胞内阶段均定位于虫体胞浆内。酶动力学研究显示，CpCyP1对含脯氨酸的短肽底物的米氏常数K_m为456.4μmol/L,最大反应速率V_max为1.981 U[μmol/（min·μg）]。CsA与CpCyP1结合的解离常数K_d为5.122μmol/L,半数抑制浓度IC₅₀为1.004μmol/L。结论 CpCyP1在隐孢子虫的各个发育阶段均有表达，并且重组的CpCyP1具有微摩尔级别的PPIase酶活性，该活性可以被CsA所抑制，这提示CpCyP1可能是CsA的潜在底物，因此，CpCyP1作为抗虫药物靶点的潜力值得进一步研究。