摘要: 为了解隐孢子虫在藏羊中的感染情况,采用饱和蔗糖漂浮法检查34份藏羊新鲜粪便。通过巢式PCR扩增阳性分离株的18S rRNA、HSP70和CpA135位点基因,并采用限制性内切酶Ssp I和Vsp I对18S rRNA产物进行酶切分析。同时构建系统发育树,分析藏羊感染隐孢子虫类别。结果显示仅1只藏羊感染隐孢子虫,18S rRNA与Cryptosporidium xiaoi山羊分离株(GU553016)相似率为99.9%;HSP70与C.xiaoi绵羊分离株(FJ896041)相似率为98.7%;CpA135与C.ubiquitum人源分离株(HM358023)相似率为99.3%。18S rRNA产物经Ssp I酶切后获得3条条带493 bp、262 bp和103 bp,经Vsp I酶切后获得3条条带508 bp、181 bp和104 bp,与C.bovis酶切条带相似。基于18S rRNA和HSP70的系统发育分析显示,该分离株与C.xiaoi亲缘性最近。这是首次在藏羊体内发现肖氏隐孢子虫。

摘要: 用扫描电镜和透射电镜技术观察了猪隐孢子虫(Cryptosporidium suis)sucp分离株在5日龄仔猪体内内生发育虫体形态结构和寄生特点。结果发现,感染前期和高峰期,在盲肠、结肠和直肠有虫体寄生,而感染后期仅在直肠上发现虫体,并且多集中在肠腺区域。实验观察到滋养体、裂殖体、大配子体、合子和孢子化卵囊等不同阶段的虫体。虫体周围一定区域的微绒毛融合、萎缩或倒伏,肠粘膜上的微绒毛明显脱落。中期滋养体营养器和致密带之间有一层较宽的特殊结构,并且该结构到后期滋养体和裂殖体阶段消失,这层特殊结构尚未见文献报道。在带虫空泡内膜与虫体外膜形成的致密带上方存在典型的呈竖向或斜向排列的纤维塞状结构(microfilament plug)营养器。

摘要: 隐孢子虫(Cryptosporidium)目前已经成为一种重要的肠道病原体,备受关注。该病原具有广泛的宿主类型,可寄生于人和禽类、哺乳类、爬行类和两栖类等240多种动物。目前,人兽共患隐孢子虫共有8个种和1个基因型,即,人隐孢子虫(C.hominis)、微小隐孢子虫(C.parvum)、犬隐孢子虫(C.canis)、猫隐孢子虫(C.felis)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)、小鼠隐孢子虫(C.muris)、猪隐孢子虫(C.suis)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)和微小隐孢子虫(C.parvum)鹿基因型。隐孢子虫的传播主要是粪-口途经或间接通过污染的环境、食物和水传播。发展中国家和发达国家腹泻病人的隐孢子虫感染率分别为4%～20%和0.6%～20%,我国腹泻病人的隐孢子虫感染率为1.4%～13.3%,儿童的感染率显著高于成年人。本文分别叙述了人兽共患隐孢子虫的各个种类和基因型的生物学特征和分子学特征,为进一步研究虫株的分布、进化特性以及隐孢子虫在人兽之间的传播途径提供了坚实的理论基础。

摘要: 将微小隐孢子虫Cpgp4015基因定向克隆到真核表达载体pVAX1中多克隆位点XbaⅠ和PstⅠ之间,经酶切鉴定,构建真核表达重组质粒pVAX1-Cpgp4015,用脂质体介导法将其转染Hela细胞,并用G418加压筛选,后经SDSPAGE和Westernblot方法检测外源基因Cpgp4015的表达情况,得到预期大小的蛋白带,表明该重组质粒能够在哺乳动物细胞中较好地表达。

摘要: 通过流行病学调查分离到奶牛隐孢子虫虫株,经实验室鉴定为牛安氏隐孢子虫(Cryptosporidiumandersoni),经蔗糖漂浮法收集和蔗糖密度梯度离心、滤器滤过、多次低速离心提纯后,通过冻融和超声波处理的全卵囊抗原免疫Balb/c小鼠4次,取阳性小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。经间接ELISA方法筛选,有限稀释法3～4次克隆,获得5株分泌抗牛安氏隐孢子虫(C.andersoni)单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1A3,3B10,3F4,4B3,4F11)。5株单抗的染色体数目平均在96～98条之间,上清效价分别在1∶100和1∶12800之间,腹水效价分别在1∶12800和1∶204800之间。采用免疫荧光法对各株的单抗腹水进行初步鉴定,发现其中4株为抗卵囊壁单抗,1株为抗子孢子单抗。对其中3株单抗的腹水提纯后进行SDS-PAGE电泳分析,其重链分子量约为52·7kDa,轻链分子量约为24kDa。