摘要: 目的分析长爪沙鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂C (Cystatin C,CST3)cDNA序列同源性,并建立CST3蛋白原核表达体系,为长爪沙鼠CST3抗体制备和后续基因功能研究奠定基础。方法对长爪沙鼠Cst3 cDNA序列进行克隆、同源性分析及密码子优化;将优化后序列酶切连接到pET28a载体,完成重组CST3蛋白表达载体构建;将该载体转化到感受态细胞中,通过异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导实现CST3蛋白的原核表达,并用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证。结果长爪沙鼠Cst3基因与人和小鼠Cst3基因的序列同源性较低。密码子优化后的长爪沙鼠Cst3表达序列插入到pET28a质粒中,获得了CST3蛋白表达载体。经1 mmol/L IPTG 37℃诱导12 h,可获得大量CST3蛋白。结论成功地构建了长爪沙鼠CST3蛋白的体外表达体系。

摘要: 目的比较正常血糖长爪沙鼠和自发遗传性糖尿病长爪沙鼠肝脏、肾脏、骨骼肌和脑组织中钠通道β亚基(sodium channel beta subunit 3 gene,Scn3b)的表达差异。方法选取正常血糖长爪沙鼠和自发遗传性糖尿病长爪沙鼠各6只,分别采集动物的肝脏、肾脏、骨骼肌和脑组织,利用Real-time PCR和Western blotting检测Scn3b在各组织中的mRNA和蛋白表达水平。结果与正常血糖动物相比,在糖尿病长爪沙鼠肝脏和脑组织中,Scn3b mRNA和蛋白水平表达均下降,其中在肝脏具显著性差异。结论 Scn3b在糖尿病长爪沙鼠肝脏和脑组织中表达减少,提示在肝脏和脑组织中Scn3b的异常表达可能参与长爪沙鼠糖尿病的发生。

摘要: 目的探讨糖尿病长爪沙鼠6种组织中Nf-κb基因mRNA和蛋白的表达水平,以期探索长爪沙鼠糖尿病模型中Nf-κb的作用和靶器官。方法选取糖尿病长爪沙鼠和正常血糖沙鼠各6只,分别采集动物的骨骼肌、肝脏、脂肪、肾脏、心脏和脑组织,用Q-PCR和Western blotting检测Nf-κb在各组织中mRNA和蛋白表达水平。结果与对照动物相比,在糖尿病长爪沙鼠的肌肉、肾脏和脑组织中,Nf-κb基因的mRNA水平表达有升高趋势,脂肪中则显著降低,肝脏和心脏中仅有降低趋势。检测蛋白水平发现除肝脏外,其他组织的结果均与mRNA水平一致。结论糖尿病长爪沙鼠脂肪组织是Nf-κb作用的靶器官。

摘要: 目的测定长爪沙鼠糖尿病模型近交系培育群体的遗传生化位点标记和生物学特性的基础数据。方法采用Beckman全自动生化分析仪(CX5)和日本光电全自动血细胞分析仪(MEK-7222K)对17项血液生化和22项血液生理指标进行测定;醋酸纤维板电泳法检测26个生化位点标记;选择F20代种鼠,按照近交系动物生产方式进行繁育,统计分析胎间隔、初生数、离乳数,生长曲线等。结果血液生理和生化指标之间比较ALP、HDL-C、CRE指标差异极显著(P<0.01);MCV、MCH、EOS、GLU、TG、LDH指标差异显著(P<0.05);遗传生化位点标记呈现单一性;初生体质量为2.68～3.38 g,离乳成活率为68.31%,胎间隔时间比较长。3～6周龄体质量增长较快。结论研究结果为其品系鉴定和生物医学应用提供重要参考资料。

摘要: 目的 探究不同月龄长爪沙鼠的血脂变化及分化趋势。方法 选取普通鼠饲料饲喂至2、4、6、8、10、12、14和16月龄的长爪沙鼠各20只，雌雄各半。动物安乐死后获取血清，用于总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)4项指标的检测，比较自然生长发育下不同阶段长爪沙鼠的血脂水平，自然分化为血脂正常组及血脂异常组；同时采集肝最大叶标本两份，一份作常规HE染色的组织形态学观察，一份作天狼星红染色的胶原纤维堆积观察。结果 2月龄和4月龄组血脂未发生异常，6月龄沙鼠血清三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)指标开始出现升高，从8月龄开始血脂异常动物与血脂正常动物相比血清TC、TG明显升高(P<0.01),8月龄和16月龄血脂异常动物与未发生血脂异常动物相比血清LDL-C明显升高(P<0.01)。血脂异常的动物中，8月龄组占比仅20%,10、12及14月龄组占比均未超过50%,16月龄组动物占比已高达70%,且雄性动物较多。病理学检查，2月龄组动物肝代谢旺盛，出现双核肝细胞分裂，无其他异常发现，8月龄动物开始出现脂肪空泡，至16月龄组肝细胞大量死亡，肝索不清晰，肝血窦狭窄，甚至消失，肝细胞发生严重的脂肪变性，14月龄胶原纤维轻度增多，16月龄胶原纤维进一步明显堆积。结论 使用普通鼠饲料饲喂至16月龄的雄性长爪沙鼠能够出现典型且稳定的血脂异常性状，为研究复制与人类相似病变的自发型高脂血症动物模型提供基础支持。