摘要: 【目的】本研究旨在阐明暗黑鳃金龟Holotrichia parallela UDP-N-乙酰氨基葡萄糖焦磷酸化酶(UAP)基因HpUAP的序列特征和功能。【方法】通过PCR方法从暗黑鳃金龟2龄幼虫中扩增HpUAP全长cDNA序列，并进行生物信息学分析；构建pET30a-HpUAP重组表达载体，转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达；利用qRT-PCR检测HpUAP在暗黑鳃金龟幼虫不同发育阶段(1-3龄幼虫)和3龄第2天幼虫不同组织(体壁、中肠、直肠、回肠、马氏管和脂肪体)中的表达量。利用RNAi沉默暗黑鳃金龟2龄幼虫体内HpUAP基因后，观察其生长发育和存活情况，并测定RNAi 72 h后其HpUAP表达量和体壁几丁质含量。【结果】PCR扩增获得暗黑鳃金龟HpUAP全长cDNA序列(GenBank登录号：MW676788),开放阅读框长1 461 bp,编码486个氨基酸残基，蛋白分子量约为53.9 kD。系统进化分析发现HpUAP与似牛嗡蜣螂Onthophagus taurinus UAP的氨基酸序列以较高的置信度聚为一个分支。经IPTG诱导可表达53.9 kD的HpUAP蛋白，与预期大小一致。发育表达谱结果表明HpUAP在1龄第1天和3龄第1天暗黑鳃金龟幼虫中表达量较高，组织表达谱结果表明HpUAP在暗黑鳃金龟3龄第2天幼虫中肠和体壁中表达量较高。HpUAP RNAi导致暗黑鳃金龟2龄幼虫生长与行动缓慢，体表颜色加深并皱缩；RNAi处理72 h后，与对照组(dsGFP注射组)相比，dsHpUAP注射组HpUAP表达量下降了93.06%,死亡率增加了40%左右，表皮几丁质含量下降了约29%。【结论】结果说明HpUAP参与几丁质代谢，在暗黑鳃金龟幼虫的生长发育过程中起关键作用。

摘要: 【目的】黄氏枝膜叶蜂Cladiucha huangbki是新发现的叶蜂科(Tenthredinidae)枝膜叶蜂属Cladiucha种类，以幼虫取食危害乳源木莲Manglietia yuyuanensis叶片，虫口密度大，严重影响乳源木莲的生长。本研究旨在明确该虫的生物学特性，并筛选出对该虫具有高致病力的金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae菌株，为高效治理该虫提供理论基础和生物防治资源。【方法】以林间调查和室内饲养观察相结合的方式，观察黄氏枝膜叶蜂的各发育阶段形态特征和生物学特性(寄主植物、分布和生活史);采用孢子悬浮液喷雾法筛选高致病力金龟子绿僵菌菌株。【结果】林间和室内观察结果表明，黄氏枝膜叶蜂幼虫取食木兰科木莲属植物，在福建永安市一年发生1代，以老熟幼虫(预蛹)在土室中越夏、越冬；翌年3月上旬化蛹，3月下旬成虫羽化，4月上旬为雌虫产卵高峰期，4月中旬幼虫出现，4月下旬至5月上旬为幼虫危害高峰期，5月中旬老熟幼虫开始入土做土室，入土深度30150 mm。室内金龟子绿僵菌不同菌株对黄氏枝膜叶蜂幼虫致病力测定结果表明，以1×107孢子/mL悬浮液喷雾11 d后，不同菌株对其幼虫的校正死亡率均超过85%,其中MaQZ-01, MaYTTR-04-05, Ma3和MaFZ-13 4个菌株感染的叶蜂幼虫校正死亡率为100%。菌株MaFZ-08感染引起的黄氏枝膜叶蜂僵虫率最高，为60%;其次是MaYTTR-04-05,引起的僵虫率为50%。金龟子绿僵菌各菌株对黄氏枝膜叶蜂幼虫的致死中时间(LT_(50))相差不大，在6 d左右，其中MaYTTR-04-05菌株的LT_(50)最短，为5.090 d。【结论】黄氏枝膜叶蜂在福建永安一年发生1代，5月中、下旬老熟幼虫入土做土室化为预蛹越夏越冬。本研究筛选出对黄氏枝膜叶蜂幼虫致病力强的金龟子绿僵菌MaYTTR-04-05菌株，在其防治上有良好的应用前景。

摘要: 【目的】明确苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)晶体蛋白对暗黑鳃金龟Holotrichia parallela幼虫的杀虫机制。【方法】基于暗黑鳃金龟转录组数据，PCR克隆暗黑鳃金龟碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)基因HpALP全长cDNA序列；利用原核表达系统在体外表达HpALP,并进行Western blot检测；利用qRT-PCR测定HpALP在暗黑鳃金龟3龄第2天幼虫不同组织(前肠、中肠、直肠、回肠、马氏管、脂肪体和体壁)中的表达水平；利用配体印记实验及ELISA技术对HpALP蛋白与苏云金芽胞杆菌晶体蛋白Cry8Ea3体外结合特性进行分析。【结果】得到了暗黑鳃金龟HpALP全长cDNA (GenBank登录号：MZ004964),长1 536 bp,编码512个氨基酸，预测蛋白质分子量为57.32 kD,等电点为4.70;HpALP与食粪金龟Onthophagus taurus ALP的氨基酸序列一致性最高；原核表达获得重组蛋白HpALP,经Western blot检测HpALP重组蛋白在IPTG诱导8 h时的表达量最高。qRT-PCR分析的组织表达谱结果表明，HpALP在幼虫前肠中丰度最高。HpALP重组蛋白可以与Cry8Ea3特异结合，解离常数Kd值为76.21±26.44 nmol/L,最大亲合力Bmax值为0.59±0.068;而HpALP重组蛋白与对照Cry1Ab35不结合，Kd值为142.50±137.30 nmol/L,Bmax值为0.013±0.005。【结论】分离鉴定了暗黑鳃金龟HpALP蛋白，它与Bt Cry8Ea3亲和力强，推断其为Cry8Ea3的受体蛋白。研究结果为明确Cry8Ea3蛋白对暗黑鳃金龟的作用机制提供了理论依据。

摘要: 【目的】白星花金龟Protaetia brevitarsis是我国经济上重要的农业害虫。本研究拟鉴定苹果、葡萄和玉米3种果实在两种状态(健康与受白星花金龟成虫为害)下的挥发物中能引起白星花金龟雌成虫触角电生理反应的挥发物成分。【方法】采用动态顶空吸附法收集苹果、葡萄和玉米3种果实的挥发物，用气相色谱-触角电位联用技术(gas chromatography-electroantennogram detection, GC-EAD)筛选果实挥发物中的活性成分，用气相色谱-质谱联用技术(gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS)对活性成分进行鉴定，然后用内标法对EAD活性成分进行定量，最后根据主成分分析和聚类分析对3种果实受白星花金龟为害前后的挥发物活性成分进行评价。【结果】在苹果、葡萄和玉米中分别鉴定出23, 23和25种挥发物可引起白星花金龟雌成虫明显的触角电位反应。根据主成分分析和基于主成分1和2的聚类分析将6个处理的挥发物分成5组，分别为来自健康苹果、受害苹果、健康葡萄+受害葡萄、健康玉米和受害玉米，3种果实之间主要挥发物成分差异较大。受害前后释放量显著减少的酯有7种(2-甲基丁基乙酸酯、2-甲基丁酸丙酯、乙酸戊酯、己酸甲酯、丁酸丁酯、乙酸己酯和异戊酸己酯),显著增加的醇有3种(2-甲基丙醇、2-甲基丁醇和顺-3-己烯醇)。【结论】3种果实中能够引起白星花金龟成虫触角电位反应的挥发物成分以醇和酯类为主，受白星花金龟为害后大部分醇类化合物的含量有所增加，酯类化合物的含量减少。本研究鉴定出58种能够引起电生理反应的挥发物成分，可通过后续的室内与田间行为试验测试这些物质的引诱作用。

摘要: 【目的】华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita是一种分布范围广,寄主种类多的农业害虫。本研究鉴定了桃树顶空挥发物中对华北大黑鳃金龟雌虫具有触角电生理活性的化合物,并探索桃树挥发物活性成分的剂量对华北大黑鳃金龟雌、雄虫触角电生理反应的影响。【方法】采用顶空吸附法收集桃树枝叶挥发物,用气相色谱-触角电位联用技术(GC-EAD)和气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)鉴定有电生理活性的桃树挥发物成分,最后用触角电位(electroantennograph, EAG)技术测试这些挥发物在0.01, 0.1, 1, 10和100μg剂量下引起的华北大黑鳃金龟雌、雄成虫EAG反应。【结果】桃树挥发物中能引起华北大黑鳃金龟雌成虫触角电生理反应的成分有7种,包括Z-β-罗勒烯、顺-3-己烯乙酸酯、顺-3-己烯醇、壬醛、水杨酸甲酯以及2种未知化合物。所测试的对华北大黑鳃金龟雌成虫触角具有电生理活性的5种桃树挥发物成分在各剂量下都能引起雌、雄成虫明显的EAG反应。雌、雄虫对同种物质的EAG反应随着剂量的增加而有增大的趋势,并且雌虫的EAG反应显著高于雄虫。【结论】桃树挥发物中,罗勒烯、顺-3-己烯乙酸酯、顺-3-己烯醇、壬醛、水杨酸甲酯均能引起华北大黑鳃金龟雌、雄成虫的剂量依赖性的触角电生理反应,而且存在显著的性别差异。可利用这些化合物开展行为反应和田间诱集试验,进一步验证其对华北大黑鳃金龟的引诱活性。