摘要: 【目的】建立达摩凤蝶Papilio demoleus Linnaeus新孵幼虫细胞系,并对其生物学特性进行研究。【方法】使用改良配方的Grace培养基并辅以20%胎牛血清,通过原代和传代培养建立达摩凤蝶新孵幼虫细胞系。通过显微观察、细胞活力分析、核型分析和分子鉴定,获得4个新建细胞系的生物学特性数据。使用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒(Ac MNPV-SEAP)。使用有限稀释法测定达摩凤蝶细胞系对Ac MNPVSEAP的半数组织培养感染剂量(TCID50),比较达摩凤蝶细胞系对Ac MNPV-SEAP的敏感性。【结果】建立了4个贴壁生长的达摩凤蝶新孵幼虫细胞系(RIRI-Pa De-1,RIRI-Pa De-2,RIRI-Pa De-3及RIRI-Pa De-4),且均传至60代以上。形态学方面,细胞系RIRI-Pa De-1和RIRI-Pa De-4较为相近,均由圆形、梭形以及多边形细胞组成,细胞系RIRIPa De-2主要为圆形细胞,而RIRI-Pa De-3主要为类似表皮细胞和纤维状细胞。细胞增殖动力学方面,4个细胞系的群体倍增时间分别为69.77,67.42,81.48及65.43 h。核型分析显示4个细胞系染色体数量均呈正态分布,其中RIRI-Pa De-2,RIRI-Pa De-3以及RIRI-Pa De-4的染色体数目分布区间比较接近,在4597条之间,RIRI-Pa De-1的染色体条数相比偏少,在3690条之间。通过比对4个达摩凤蝶细胞系和虫卵的细胞色素c氧化酶亚基I(COI)基因序列,证明4个新建细胞系来源于达摩凤蝶组织。比较4个细胞系对Ac MNPV-SEAP敏感性发现RIRI-Pa De-3对此病毒较为敏感,可作为重组杆状病毒表达的宿主。【结论】虽然4个新建达摩凤蝶细胞系的来源相同,具有相同的遗传背景,但其生物学特征仍有明显差异,具有进一步研究的价值。

摘要: 详细描述了达摩凤蝶PapiliodemoleusL .各虫态的形态特征、生活史及生活习性。在广州地区 ,该蝶 1年发生 5代以上 ,以蛹在寄主植物上越冬 ,成虫 3月初始见 ,幼虫共 5龄 ,以芸香科的金橘属、酒饼和柑橘类等植物叶片为食料。