摘要: 目的 确定Prss37基因的转录起始位点，并利用转基因技术在整体水平验证该启动子的组织特异性。方法 运用cDNA 5’末端快速扩增法(5’RACE)对C57BL/6J小鼠睾丸m RNA进行分析，确定Prss37的转录起始位点;构建Prss37内源启动子区域转录起始位点上游不同长度DNA片段(1 kb、2 kb、4 kb)驱动的荧光素酶基因表达的质粒；通过受精卵雄原核显微注射技术获得上述三种启动子驱动荧光素酶基因表达的转基因小鼠；利用活体成像技术观察荧光素酶基因的表达，明确启动子的组织特异性。结果 Prss37基因的转录起始位点位于NCBI GeneBankTM(NM＿026317.2)报道序列上游的40 bp处;成功获得三种转基因小鼠，其中1 kb启动子驱动的转基因小鼠检测到荧光素酶基因的表达，且在脑、睾丸和附睾组织中的表达较强。结论 明确Prss37的转录起始位点，成功获得了睾丸和附睾表达荧光素酶基因的转基因小鼠，为进一步的Prss37基因转录调控研究奠定了基础。

摘要: 目的 建立5-脂氧化酶(5-LO)高表达转基因小鼠模型，为动脉粥样硬化(AS)发病分子机制的研究提供有应用价值的动物模型。方法 对5-LO转基因及正常对照小鼠分别选用RT-PCR、免疫组织化学、血脂、血压监测等方法进行分析实验。结果 5-LO及大鼠5-脂氧合酶激活蛋白(FLAP)免疫组织化学实验结果显示，在肾和肺中5-LO及FLAP的表达，转基因小鼠高于正常对照组小鼠; RT-PCR实验结果显示,转基因小鼠与正常对照小鼠比较在骨髓细胞、腹腔细胞、脾脏、肾脏中白三烯介质及其受体均有不同程度的高表达。其中,两种小鼠的腹腔细胞和骨髓细胞中白三烯A4(LTA4)、白三烯B4(LTB4)和半胱酰胺-白三烯受体2(Cys-LTR2)的表达存在差异(P<0.05),脾和肾脏中LTB4、白三烯C4(LTC4)及Cys-LTR2的表达存在差异(P<0.05),肾脏中半胱酰胺-白三烯受体1(Cys-LTR1)的表达存在差异(P<0.05)。C反应蛋白(CRP)、白介素-1β(IL-1β)、血小板衍生因子(PDGF)、坏死因子-κB(NF-κB)等细胞因子检测结果显示,在肾组织中转基因小鼠的各项指标显著高于正常对照小鼠(P<0.05);血压测定结果显示,转基因小鼠高于正常对照小鼠(P<0.05);血脂检测结果显示,两种小鼠未见明显差异(P>0.05)。结论 成功建立5-LO高表达转基因小鼠模型。

摘要: 目的 应用Dicer1(编码蛋白属于RNA酶Ⅲ家族)转基因小鼠建立黑色素瘤模型。方法 将小鼠黑色素瘤细胞株分别移植于Dicer1转基因鼠和C57BL/6J小鼠前肢腋下，观察两种小鼠的荷瘤情况，包括移植瘤生长情况、移植瘤生长曲线。结果 与C57BL/6J小鼠组肿瘤比较，Dicer1转基因小鼠组的肿瘤成瘤时间短、肿瘤生长速度快、肿瘤体积大(P<0.05)。结论 应用Dicer1转基因小鼠建立了黑色素瘤模型，结果显示Dicer1基因对黑色素瘤荷瘤有明显影响。

摘要: 目的 制备bcr启动子驱动-增强绿色荧光蛋白(bcr-EGFP)转基因小鼠模型，在活体水平验证bcr启动子的启动特异性。方法 以慢性髓性细胞白血病(CML)细胞株K562细胞基因组为模板，PCR扩增1.1 kb bcr启动子,在扩增产物的上、下游引物加入了Ase I、EcoR I酶切位点,AseI、EcoRI双酶切pEGFP-N1真核表达质粒载体，去除载体自身的CMV启动子，并将1.1 kb bcr启动子定向克隆到EGFP绿色荧光蛋白报告基因上游，构建pbcr-EGFP真核表达载体，并将此重组质粒瞬时转染K562细胞和NIH3T3细胞，进行表达验证。显微注射法制备bcr-EGFP转基因小鼠，采用PCR方法进行初步整合检测。结果 显微注射583枚受精卵，移植到30只受体鼠输卵管中，受体鼠妊娠26只，共生产首建鼠90只,经过PCR检测，4#(♀)、36#(♂)和81#(♂)等3只F0代为转基因整合阳性鼠。结论 成功制备了bcr-EGFP转基因小鼠，为进一步研究bcr启动子在CML转基因小鼠模型制备的安全性和可靠性提供线索和帮助。

摘要: 目的 比较改良精子冷冻液与传统冷冻液对cre转基因小鼠的精子冻存和体外受精率的影响，建立采用精子冷冻技术稳定保存两种cre转基因小鼠的方法。方法 以R18S3作为精子冷冻液和以R18S3作为基础液添加477μmol/L的硫代甘油(MTG)配成R18S3+MTG冷冻液，冻存Neurog3-cre和Itgax-cre雄鼠精子,采用相同方法复苏精子。同时,以两种cre小鼠的背景鼠C57BL/6J作为对照组，另选用ICR和FVB小鼠用两种冷冻液冻存并复苏精子，进行体外受精，统计受精率来评价精子冷冻效果。结果 以R18S3冷冻并复苏的两种cre小鼠及野生型C57BL/6J的精子体外受精率分别为10.5%,11.6%和12.0%，无显著差异。以R18S3+MTG冷冻并复苏的精子体外受精率分别为66.4%,62.5%和67.6%，相对传统冷冻液有显著提高。ICR和FVB小鼠用改良精子冷冻液前后的体外受精率分别是34.1%,46.7%和65.7%和70.2%，后者都有所提高。结论 改良后的R18S3+MTG冷冻液能明显提高以C57BL/6J为背景的cre转基因小鼠冷冻后精子的体外受精率，对ICR和FVB品系的小鼠的体外受精率也有提高。