摘要: 【目的】研究microRNA(miRNA)通路中两个关键组分Dicer-1和Argonaute-1(Ago-1)在豌豆蚜抵御细菌和真菌侵染中的作用，加深对豌豆蚜免疫防御系统的了解。【方法】用qRT-PCR检测细菌金黄色葡萄球菌和大肠杆菌以及真菌球孢白僵菌分别侵染后豌豆蚜成蚜体内-1和1的表达量；通过注射法利用RNAi技术对豌豆蚜成蚜1和-1进行沉默后，感染金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和球孢白僵菌，检测豌豆蚜体内细菌和真菌的增殖和统计豌豆蚜成蚜存活率。【结果】与0.85% NaCl溶液处理的对照组相比，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和球孢白僵菌侵染豌豆蚜成蚜后，其体内1和-1的表达量发生了一定程度的上调。RNAi干扰-1后，感染金黄色葡萄球菌36 h时豌豆蚜成蚜中细菌菌落数显著高于对照组(注射ds)的，但感染后7 d时的存活率与对照组无显著差异；感染大肠杆菌12和24 h时豌豆蚜成蚜体内的细菌菌落数均显著高于对照组的，但感染后7 d时的存活率显著低于对照组的；感染球孢白僵菌后6 d，豌豆蚜成蚜体内真菌孢子数显著高于对照组的，但感染后7 d时的存活率显著低于对照组的。RNAi敲降1后感染金黄色葡萄球菌，豌豆蚜成蚜体内细菌菌落数在36 h时显著高于对照组的，但感染后7 d时的存活率显著低于对照组的；感染大肠杆菌后，在24 h时豌豆蚜成蚜体内细菌菌落数显著高于对照组的，感染后7 d时的存活率略低于对照组的，但无显著差异；感染球孢白僵菌后6 d，豌豆蚜成蚜体内真菌孢子数显著高于对照组的，但感染后7 d时的存活率显著低于对照组的。【结论】豌豆蚜miRNA通路中的两个关键组分Dicer-1和Ago-1参与了豌豆蚜抵御细菌和真菌侵染的免疫防御反应，尤其在抵御真菌的防御反应中有重要作用。

摘要: 【目的】黑豆蚜Aphis fabae Scopoli和豌豆蚜Acyrthosiphon pisum(Harris)是豆科作物上的两类重要害虫，常在同种豆科植物上混合发生，但目前尚不明确2种蚜虫的种间竞争及密度效应。【方法】通过设置异种密度为单头、5头和10头，研究不同异种共存密度对单头豌豆蚜与黑豆蚜生长发育及生殖的影响；异种预侵染后，研究对另一种蚜虫生殖的影响。【结果】在单头和5头异种竞争条件下，2种蚜虫各龄若蚜的发育历期及1龄若蚜-成蚜的总发育历期均与对照差异不显著。在单头异种竞争条件下，2种蚜虫所得成蚜体重均与对照无显著差异；在5头异种竞争条件下，豌豆蚜成蚜体重显著低于对照，而黑豆蚜显著高于对照。在5头异种共存竞争条件下，黑豆蚜的生殖力无显著变化，而异种高密度共存竞争（5头和10头）对豌豆蚜的生殖力具有明显不利影响。当2种蚜虫共存于活体植株上，豌豆蚜的首日产蚜量显著低于理论值，而黑豆蚜略高于理论值。在异种预侵染条件下，豌豆蚜的日均产蚜量显著低于对照，而黑豆蚜的日均产蚜量略高于对照。【结论】黑豆蚜较豌豆蚜具有明显的竞争优势。这一研究结果对明确2种蚜虫在豆科作物上的群落演替规律及制定科学合理的防治措施具有重要指导意义。

摘要: 【目的】为明确豌豆蚜Acyrthosiphon pisum虫龄的鉴别特征,以期达到准确快速识别豌豆蚜龄期的目的。【方法】采用显微成像技术观察并测定不同翅型、不同虫龄个体的体长、体宽、头宽、腹管长度、尾片长度、触角长度和后足胫节长度7项指标。【结果】不同龄期豌豆蚜形态特征存在差异,无翅型与有翅型个体的腹管长度在各龄期间均无重叠,可作为豌豆蚜龄期鉴定的重要指标。后足胫节和触角长度,可以作为龄期划分的辅助指标。此外,触角节数可以用来区分1龄和2龄若蚜,翅基发育程度可以用来区分有翅型豌豆蚜3龄与4龄,尾片的发育程度可作为区分若蚜与成蚜的典型形态特征。【结论】以个体的腹管长度作为豌豆蚜龄期鉴定的主要指标,配合后足胫节长、触角长度、触角节数、尾片与翅基的发育程度,可达到快速鉴定豌豆蚜各个龄期的目的。

摘要: 【目的】蜕皮激素对孤雌蚜翅两型性分化具有重要调控作用。在前期研究中我们发现5个微小RNA(microRNA, miRNA)在豌豆蚜Acyrthosiphon pisum翅两型性分化中也发挥关键作用,但蜕皮激素是否与miRNA互作参与蚜虫翅型分化未知。本研究旨在探索蜕皮激素对5个miRNA及其预测靶基因表达的影响,揭示蜕皮激素与miRNA协同调控蚜虫翅型分化的机理。【方法】选择5个与豌豆蚜翅两型性分化相关的miRNA (Let-7, miR-92a, miR-92b, miR-92a-1-p5和miR-277),使用0.1 mol/L蜕皮激素类似物20-羟基蜕皮酮(20E)分别处理孤雌生殖豌豆蚜2龄若蚜10 min和30 min, 48 h后取样;qPCR检测这些miRNA及其预测靶基因在20E处理后的表达量;利用双荧光素酶活性检测法对miR-92a-1-p5的预测靶基因flightin进行验证;利用纳米载体/变性剂在孤雌生殖豌豆蚜4龄若蚜中敲低miR-92a-1-p5表达,验证miR-92a-1-p5与其预测靶基因flightin的互作关系。【结果】0.1 mol/L 20E处理30 min可极显著诱导孤雌生殖豌豆蚜2龄若蚜5个miRNA的表达;处理10 min则miR-92a-1-p5和miR-92b表达量较对照极显著下降,而Let-7和miR-277较对照极显著上升。Let-7与预测靶基因abrupt在0.1 mol/L 20E处理后孤雌生殖豌豆蚜豌2龄若蚜中表达趋势相反,miR-92a和miR-277的预测靶基因wingless和Uba1在0.1 mol/L 20E处理10 min时表达量极显著下降,与两个对应的miRNA表达趋势相反;miR-92a-1-p5的预测靶基因flightin在0.1 mol/L 20E处理30 min后表达量极显著下降,与miRNA表达趋势相反。双荧光素酶活性检测结果显示,共转染miR-92a-1-p5模拟物和flightin CDS过表达载体pmirGlO [flightin]后与转染对照NC mimics相比,荧光素酶活性下降40%,达极显著水平;敲低孤雌生殖豌豆蚜4龄若蚜中miR-92a-1-p5后其表达量下调83%,其预测靶基因flightin表达量上升48%,均达极显著水平,表明flightin是miR-92a-1-p5的真实靶基因。【结论】蜕皮激素能够诱导豌豆蚜体内miRNA的表达;miR-92a-1-p5可能通过调控flightin参与孤雌蚜翅型分化;纳米载体/变性剂可以在蚜虫个体中实现miRNA的有效干涉。该研究为进一步探索蜕皮激素和miRNA互作参与孤雌蚜翅两型性分化机制奠定了基础。

摘要: 【目的】豌豆蚜Acyrthosiphon pisum是世界性的重要农业害虫,给豆类作物造成巨大的经济损失。本研究在前期筛选已获得豌豆蚜致病菌长孢蜡蚧菌Lecanicillium longisporum TF-2菌株的基础上,检测了该致病菌分生孢子对豌豆蚜的毒力效用及侵染方式,以期为利用昆虫病原真菌防治豌豆蚜提供理论基础。【方法】采用离体叶片饲养法检测在不同浓度长孢蜡蚧菌TF-2菌株孢子悬浮液(1.0×1031.0×107孢子/mL)中浸渍后对豌豆蚜成虫的致病力;应用扫描电镜和体视显微镜观察豌豆蚜成虫接种TF-2菌株(1.0×107孢子/mL)后长孢蜡蚧菌TF-2菌株侵染症状和侵染过程。【结果】不同浓度长孢蜡蚧菌TF-2菌株分生孢子浸染豌豆蚜成虫致病力随分生孢子浓度升高而逐渐增强,侵染后6 d对豌豆蚜成虫的半致死浓度(LC_(50))为3.26×104孢子/mL,最高浓度分生孢子(1.0×107孢子/mL)对豌豆蚜成虫的半致死时间(LT_(50))为2.92 d。扫描电镜观察结果表明,接种后24 h,TF-2菌株分生孢子在豌豆蚜成虫体表皮萌发形成芽管和附着胞;接种后48 h,芽管伸长在复眼、触角基部、足基节、腹末生殖节等部位形成网络结构;接种后96 h,菌丝布满整个虫体,新的分生孢子产生。【结论】长孢蜡蚧菌TF-2菌株对豌豆蚜成虫具有较强的致病力,扫描电镜观察揭示了其分生孢子在其虫体上的侵染过程,结果为进一步应用昆虫病原真菌进行生物防治提供理论基础和参考依据。