摘要: 实蝇是全球重大的果蔬虫害，对世界年均造成的经济损失高达20亿美元。橘小实蝇Bactrocera dorsalis是该类害虫的代表之一，每年对我国柑橘产业造成严重损失。以雄性引诱剂和蛋白饵剂为核心的诱杀技术已用于害虫监测和绿色防控，但是田间防控效果有待进一步提高。随着高通量测序技术成本的降低以及现代分子生物学技术的发展，科学家们提出先解析害虫化学感受的分子机制，鉴定关键的化学感受分子靶标，并以鉴定的新靶标设计和筛选更为稳定和高效引诱剂和食诱剂。为促进以关键化学感受分子为靶标的橘小实蝇行为调控技术的发展，本文综述了调控橘小实蝇行为的重要化学物质及其化学感受识别机制的研究现状。调控橘小实蝇行为的重要挥发物主要包括性信息素、植物挥发物和食物源蛋白气味。前两者中鉴定获得的特异性化合物质与橘小实蝇成虫的行为关系较为明确，例如性信息素中得到吡嗪类物质能够引诱雌虫，植物挥发物中的甲基丁香酚引诱雄虫，γ-辛内酯能够诱发雌虫产卵等；而后者食物源蛋白气味则由于成分复杂，在田间虽有一定效果，但缺乏特定化合物在雌雄虫具体行为中的功能验证。嗅觉感受机制中，外周神经感器与中枢触角叶仅有形态描述，不同类型嗅觉神经元的功能还不明确；目前通过生物信息学分析已鉴定出大量的橘小实蝇化学感觉相关蛋白，包括49种气味结合蛋白(odorant binding proteins, OBPs)、60种气味受体(odorant receptors, ORs)、23种离子型受体(ionotropic receptors, IRs)和17种味觉受体(gustatory receptors, GRs),得到功能解析的嗅觉基因数量较少。综上可知，现虽已鉴定了部分对橘小实蝇具有行为活性的化合物质，且已有大量嗅觉蛋白作为候选分子靶标，但缺乏“化学物质-嗅觉分子靶标与神经-行为”的对应关系，这极大地限制了嗅觉分子靶标在引诱剂研发中的作用。因此，在此基础上，我们提出了基于嗅觉关键分子靶标的橘小实蝇行为调控技术开发策略，以期为设计和筛选橘小实蝇高效行为调控制剂提供新思路。

摘要: 【目的】细胞凋亡是真核生物中保守的细胞程序化死亡，由蛋白酶caspase介导。Strica是果蝇Drosophila中一个特殊的caspase,至今未有其商品化抗体且生化功能未知。本研究旨在通过克隆、原核表达纯化果蝇Strica蛋白并制备其多克隆抗体来初步研究其功能。【方法】根据果蝇Strica的基因序列构建原核表达载体并转化至大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞，表达Strica蛋白；将表达纯化后的Strica蛋白免疫家兔制备多克隆抗体；通过间接ELISA和Western blot分别测定抗体效价和灵敏度；利用前期构建的过表达载体pAc5-V5-Strica进行转染果蝇S2细胞，设计合成siRNA进行RNAi验证该抗体的特异性；利用该抗体通过免疫荧光实验检测Strica在果蝇S2细胞中的亚细胞定位；利用该抗体通过Western blot实验探究放线菌酮(10μg/mL)处理后果蝇S2细胞中Strica蛋白的激活状态。【结果】获得了果蝇Strica重组蛋白；ELISA检测Strica抗体的效价大于1∶25 600;Western blot鉴定该抗体在1∶10 000的稀释度下能与重组蛋白反应；该抗体可以检测到S2细胞中过表达以及内源性Strica蛋白；Strica蛋白在S2细胞质中呈现散点分布；放线菌酮介导Strica蛋白的切割激活。【结论】成功制备了兔抗果蝇Strica多克隆抗体。Strica响应凋亡刺激物放线菌酮激活，推测Strica参与果蝇的细胞凋亡过程。本研究为进一步深入研究Strica的功能奠定了实验基础。

摘要: 【目的】明确多寄主型寄生蜂蝇蛹俑小蜂Spalangia endius对不同类型新寄主的偏好选择与适应性。【方法】选择分别以瓜实蝇Zeugodacus cucurbitae、南瓜实蝇Z.tau和家蝇Musca domestica的蛹为寄主饲养的蝇蛹俑小蜂成蜂，比较研究其对上述3种寄主中其他2种非饲养寄主的选择行为、寄生选择及适应性。【结果】与家蝇蛹相比，以瓜实蝇蛹为饲养寄主的蝇蛹俑小蜂成蜂偏好选择和寄生南瓜实蝇蛹，且在南瓜实蝇蛹上产生更多的子代；以南瓜实蝇蛹为饲养寄主的蝇蛹俑小蜂成蜂偏好选择和寄生瓜实蝇蛹，且在瓜实蝇蛹上产生更多的子代；而以家蝇蛹为饲养寄主的蝇蛹俑小蜂成蜂对瓜实蝇蛹和南瓜实蝇蛹的选择数量以及在选择和非选择试验条件下的寄生率与子代数量上并无显著差异。此外，以瓜实蝇和南瓜实蝇蛹为饲养寄主的蝇蛹俑小蜂成蜂分别更容易适应南瓜实蝇和瓜实蝇蛹。【结论】基于3种蝇的生态位关系，推测蝇蛹俑小蜂偏好选择和更容易适应与其饲养寄主有重叠生态位的新寄主。

摘要: 【目的】对转基因作物进行生态风险评估是大面积种植前的一个必要步骤，水稻Oryza sativa访花昆虫有上百种，包括家蝇Musca domestica。本研究旨在明确访花昆虫家蝇介导转基因水稻外源基因逃逸的风险。【方法】2010年，我们使用转基因水稻B1,B6和G8-7作为父本(花粉供体)，用同源非转基因水稻Jiazao 935和Wuyunjing 7作为母本(花粉受体)，并用家蝇作为授粉昆虫，在浙江大学华家池和长兴试验基地开展了田间种植试验，对收割的后代水稻种子进行室内种植培养，对种苗用潮霉素B和草甘膦处理进行转基因杂交种检测，对存活植株进行潮霉素和草甘膦抗性基因PCR检测，测试家蝇介导的转基因水稻外源基因逃逸频率。【结果】对浙江两个测试基地3个转基因水稻品种共计超过216 500粒后代水稻种子进行的检测及结果表明，在毗邻区域杂交种少，家蝇授粉区和无家蝇授粉区转基因水稻外源基因向非转基因水稻逃逸频率均较低(00.64%)。【结论】家蝇介导的转基因水稻外源基因逃逸频率较低，家蝇没有增加转基因水稻外源基因逃逸的风险。

摘要: 【目的】保幼激素酸甲基转移酶(juvenile hormone acid methyl transferase, JHAMT)是保幼激素(juvenile hormone, JH)合成通路中的关键限速酶。本研究旨在筛选并验证靶向调控黑腹果蝇Drosophila melanogaster JHAMT转录表达的miRNA,揭示miRNA在JH生物合成中的作用机理。【方法】首先通过miRanda, TargetScan和microT-CDS在线网站对靶向黑腹果蝇JHAMT的miRNA进行预测，取3个网站均能预测到的miRNA作为候选靶向JHAMT的miRNA;利用双荧光素酶系统对候选miRNA与JHAMT的靶向关系进行验证；qRT-PCR检测候选miRNA与JHAMT在黑腹果蝇生长发育中的表达模式；利用qRT-PCR和果蝇GAL4-UAS系统分别检测黑腹果蝇咽侧体中超表达miRNA对JHAMT的表达以及对黑腹果蝇变态发育的影响。【结果】miRanda, TargetScan和microT-CDS分别预测到5, 18和16个靶向JHAMT的miRNA,共同预测到4个miRNA,分别是miR-252-5p, miR-277-3p, miR-1002-5p和miR-987-5p。双荧光素酶检测结果表明，miR-252-5p mimics可显著降低野生型JHAMT 3′UTR荧光素酶报告基因载体所表达的荧光素酶活性，而JHAMT 3′UTR区中miR-252-5p结合位点突变后，该抑制作用被解除。qRT-PCR检测结果表明，miR-252-5p与JHAMT在黑腹果蝇卵、幼虫及预蛹期的转录表达模式相反。咽侧体中超表达miR-252后，可显著降低JHAMT和JH初级反应基因Kr-h1的表达水平；且表现出类似JH缺失的表型，如化蛹时间推迟、体重变轻以及蛹期死亡增加。【结论】miR-252-5p可通过靶向作用于JHAMT参与JH生物合成调控，从而影响果蝇变态发育。