摘要: 【目的】提供一种用于提高橘小实蝇Bactrocera dorsalis中的RNA干扰(RNA interference, RNAi)效率和双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)稳定性的纳米复合物及其制备方法与应用手段。【方法】采用琼脂糖凝胶阻滞实验(agarose gel shifting test)检测橘小实蝇成虫血淋巴对dseGFP的降解能力，星形阳离子聚合物(star polycation, SPc)与dseGFP结合的最佳质量比，以及SPc对dseGFP的保护作用。通过向橘小实蝇成虫腹部注射常用于dsRNA递送体系的表面活性剂烷基糖苷(alkyl polyglucoside, APG),计算死亡率，评估其毒性。在体外合成的dshsp68与纳米载体SPc混合后，用显微注射的方法将纳米复合物注射入橘小实蝇成虫的腹部，运用RT-qPCR检测RNAi效率。【结果】琼脂糖凝胶电泳结果显示橘小实蝇血淋巴能迅速降解dseGFP,当SPc与dseGFP的质量比大于或等于1∶1时能自发形成SPc/dseGFP纳米复合物，减缓橘小实蝇血淋巴对dseGFP的降解。表面活性剂APG对橘小实蝇成虫毒性较强，注射APG后48 h时橘小实蝇的平均死亡率为78.33%,不适宜作为注射法的助剂。单独注射dshsp68后48 h时的RNAi效率为49.53%,在72 h时失去RNAi效果，而注射SPc/dshsp68纳米复合物的RNAi效率更高，48 h时达到了85.99%,且在72 h时的RNAi效率为40.87%,具有更长的RNAi持效时间。【结论】SPc可以结合dsRNA形成复合物，减缓dsRNA被橘小实蝇血淋巴RNase的降解，从而实现持续高效的RNAi敲降效果。本研究建立了一种通过纳米载体SPc实现高效RNAi的方法，可以用于橘小实蝇基因功能研究。

摘要: 【目的】检验现有的无菌和悉菌黑腹果蝇Drosophila melanogaster操作技术在昆虫中应用的广普性，并通过此技术解析共生菌对黑腹果蝇和黑水虻Hermetia illucens生长发育的促进作用。【方法】利用Walch-次氯酸-乙醇改进型无菌操作技术，用黑水虻、亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis和东方粘虫Mythimna separata卵进行可行性验证，并优化黑水虻无菌操作技术；使用LB固体培养基分离黑腹果蝇肠道细菌；利用16S rRNA基因测序鉴定黑腹果蝇肠道细菌；体内定殖和世代传递实验验证黑腹果蝇肠道细菌与黑腹果蝇的共生关系；建立悉生黑腹果蝇和黑水虻模型，记录黑腹果蝇的发育历期和生长速率来验证黑腹果蝇肠道细菌对黑腹果蝇和黑水虻生长的促进作用；利用qRT-PCR检测黑腹果蝇2和3龄幼虫体内蜕皮激素信号通路相关基因(PTTH和E74B)的表达量。【结果】与传统的无菌操作技术比较，改进型无菌操作技术提高了建立无菌昆虫的效率；通过改变次氯酸处理时间优化无菌黑水虻操作技术，可将该方法推广到卵粘性低和卵壳较厚的昆虫中。从黑腹果蝇肠道中分离出的细菌经鉴定为拉恩氏布鲁奇菌Rahnella bruchi,该细菌能在黑腹果蝇肠道内稳定定殖，并能在世代间垂直传递。拉恩氏布鲁奇菌显著缩短黑腹果蝇的发育历期，提高黑腹果蝇羽化率和生长速率。肠道共生菌拉恩氏布鲁奇菌能显著缩短黑水虻的发育历期。在分子水平上，拉恩氏布鲁奇菌能显著提高黑腹果蝇2和3龄幼虫体内PTTH和E74B的表达量。【结论】优化后的无菌操作技术对卵壳较厚、卵粘性低的昆虫效果相对较好。拉恩氏布鲁奇菌是黑腹果蝇的有益共生菌，可以因果性地促进黑腹果蝇生长和发育。拉恩氏布鲁奇菌能够促进黑水虻的生长发育。

摘要: 【目的】针对全球重要果蔬害虫橘小实蝇Bactrocera dorsalis,基于雄性引诱剂的雄性歼灭技术(male annihilation technique, MAT)已被广泛应用，其中甲基丁香酚(methyl eugenol, ME)作为核心引诱剂，对雄虫表现出高效的引诱作用。然而，现有技术主要针对雄虫，雌虫对ME的行为反应及其嗅觉感知能力尚不明确，成为限制以ME为基础的雌性引诱剂全面优化的瓶颈。因此，本研究旨在系统揭示橘小实蝇雌成虫对ME的行为反应及嗅觉感知能力，探索ME在橘小实蝇雌虫中的潜在生物学作用，为优化应用ME的雌虫防控策略提供新的研究思路。【方法】为明确橘小实蝇雌成虫对ME的行为反应和感知能力，选择生理状态活跃的12日龄雌雄成虫作为试虫，首先利用嗅觉陷阱实验与四臂嗅觉仪实验测试了橘小实蝇雌雄成虫对剂量为1 000和100μg的ME以及具有类似诱雄功能的2-烯丙基-4,5-二甲氧基苯酚(2-allyl-4,5-dimethoxy phenol, DMP)的趋向行为，对剂量为1 000μg ME和DMP的取食行为；其次利用触角电位(electroantennogram, EAG)反应实验测定剂量为0.1,1,10和100μg的ME和DMP引起的橘小实蝇雌雄成虫的EAG反应；最后利用单感器技术(single sensillum recording, SSR)记录了橘小实蝇雌雄成虫触角上锥形感器对ME和DMP的SSR反应。【结果】行为学测试结果表明，橘小实蝇雌成虫未对ME和DMP表现出明显的趋向行为或取食倾向，而雄成虫表现强烈的行为反应。然而，EAG实验则显示，橘小实蝇雌成虫与雄成虫类似，对ME和DMP均产生了显著的嗅觉响应；进一步的SSR实验发现，橘小实蝇雌成虫具有与雄成虫类似的嗅觉感器，负责ME和DMP的感知。【结论】本研究结果提示，橘小实蝇雌成虫具备与雄成虫类似的ME嗅觉感知机制，但ME对雌成虫的行为的影响不同于对雄成虫的诱集功能，ME对雌成虫可能具有其他潜在的生物学作用。这些结果为深入理解橘小实蝇对ME的感知与行为反应提供了新的实验依据，同时为改良雌虫行为调控技术提供了理论参考。

摘要: 【目的】明确韭菜迟眼蕈蚊Bradysia odoriphaga对10种杀虫剂的抗性现状及对灭蝇胺的抗性风险和灭蝇胺对韭菜迟眼蕈蚊的亚致死效应。【方法】采用胃毒触杀联合毒力法测定了5类（新烟碱类、拟除虫菊酯类、吡咯类、昆虫生长调节剂类和有机磷类）共10种杀虫剂对河南省濮阳市、安徽省亳州市、河北省唐山市及山东省济宁市4个地区韭菜迟眼蕈蚊2龄幼虫的毒力，用亚致死浓度(LC₁₅和LC₃₀)灭蝇胺处理韭菜迟眼蕈蚊观察对其幼虫历期、化蛹率、羽化率及单雌产卵量等指标的影响，评估了韭菜迟眼蕈蚊对灭蝇胺的抗性风险，并通过Tabashnik域性状分析法计算抗性现实遗传力（realized heritability,h²）和基于选择数据预测不同选择压力下的抗性发展速率。【结果】监测数据表明，韭菜迟眼蕈蚊田间种群对灭蝇胺、氟啶脲、氟铃脲和吡丙醚处于敏感至低水平抗性，对辛硫磷产生低至中等水平抗性，对高效氯氰菊酯处于低水平抗性，对吡虫啉、噻虫嗪和噻虫胺处于敏感或低至中等水平抗性。当抗性现实遗传力（h²）为0.073,在不同的选择压力下（死亡率分别为50%, 60%, 70%, 80%和90%）,韭菜迟眼蕈蚊对灭蝇胺的抗性上升至10倍分别需要25.2, 20.7, 17.2, 14.4和11.4代；采用LC₁₅和LC₃₀浓度灭蝇胺处理韭菜迟眼蕈蚊2龄幼虫后，F₀和F₁代的羽化率和单雌产卵量显著降低。【结论】韭菜迟眼蕈蚊对灭蝇胺具有较低的抗性风险，亚致死浓度灭蝇胺显著抑制韭菜迟眼蕈蚊的化蛹率、羽化率及单雌产卵量。

摘要: 【目的】沃尔巴克氏体Wolbachia是一类母系遗传的革兰氏阴性菌，是昆虫中最常见的胞内共生菌之一，可通过多种方式影响宿主的生殖和行为，但其影响机制还不甚清楚。本研究旨在探讨一种毒力较强的Wolbachia菌株wMelPop侵染对雄性黑腹果蝇Drosophila melanogaster肠道细菌的影响。【方法】解剖感染wMelPop的黑腹果蝇(Pop+)和未感染的黑腹果蝇(Pop-)雄成虫完整肠道，提取总DNA,利用Illumina NovaSeq平台对肠道细菌16S rDNA基因的V3-V4区进行测序，比较分析Pop+和Pop-肠道细菌的物种组成、丰度及α多样性，并通过qPCR验证表达量具有显著差异的3个属的6种肠道微生物高通量测序数据的有效性。【结果】α多样性分析显示，wMelPop侵染提高了雄性黑腹果蝇肠道细菌丰度，降低了肠道菌的多样性。Pop-肠道中，优势菌属是不动杆菌属Acinetobacter、假单胞菌属Pseudomonas、醋杆菌属Acetobacter和嗜盐单胞菌属Halomonas。与Pop-相比，Pop+肠道中假单胞菌属的相对丰度显著下调，而醋杆菌属和乳杆菌属Lactobacillus的相对丰度显著上调。qPCR验证结果显示，与Pop-相比，Pop+肠道中总细菌16S rDNA基因表达量极显著上调，Pop+肠道中番茄醋酸杆菌A.pomorum的16S rDNA基因表达量下调至Pop-的0.7倍，Pop+肠道中热带醋酸杆菌A.tropicalis的16S rDNA基因表达量比Pop-的上调约3 700倍，果状乳杆菌L.frutivorans、植物乳杆菌L.plantarum和短乳杆菌L.brevis的16S rDNA基因表达量均显著上调，其中果状乳杆菌16S rDNA基因表达量上调的倍数最高，约为Pop-的23 000倍，产碱假单胞菌P.alcaligenes的16S rDNA基因表达量下调至Pop-的0.6倍，这些结果与16S rDNA测序结果的趋势基本一致。【结论】wMelPop的侵染显著影响了雄性黑腹果蝇肠道细菌的相对丰度。其中，醋杆菌属和乳杆菌属的肠道菌载量显著升高，这可能是wMelPop感染影响昆虫宿主生殖和行为的机制之一。