摘要: 【目的】本研究旨在克隆东方蜜蜂Apis cerana基质金属蛋白酶14（matrix metalloproteinase-14, MMP14）基因AcMMP14,分析其分子特征和表达模式，为持续深入开展AcMMP14的功能研究提供参考和依据。【方法】提取东方蜜蜂6日龄工蜂幼虫肠道总RNA,PCR扩增AcMMP14的编码序列（coding sequence, CDS）。使用相关生物信息学软件预测AcMMP14的理化性质和分子特征，鉴定东方蜜蜂和其他蜂种MMP14的结构域和保守基序，并进行系统进化分析。采用RT-qPCR检测AcMMP14在工蜂卵、幼虫、预蛹、蛹和不同日龄成虫，工蜂成虫触角、脑、表皮、脂肪体、毒腺、中肠和咽下腺及东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae接种刚出房的1日龄工蜂后1-4 d时中肠中的相对表达量。【结果】AcMMP14的分子式为C₃₀₆₈H₄₅₈₁N₈₀₃O₉₁₅S₂₀,分子量约为68.00 kD,脂溶系数为64.12,等电点为5.85,平均亲水系数为-0.47,含1个信号肽和36个磷酸化位点，可同时定位于线粒体、细胞核和细胞质。东方蜜蜂与其他10种蜂的MMP14中均含有3个相同的结构域和5个相同的保守基序。东方蜜蜂与大蜜蜂A.dorsata的MMP14的氨基酸序列一致性达94.23%,且在进化树上聚为一支。AcMMP14在东方蜜蜂工蜂卵、3日龄幼虫、 1和2日龄预蛹及4日龄蛹中差异表达，在4日龄蛹中的表达量最高且显著高于3日龄幼虫和2日龄预蛹中的表达量。AcMMP14在不同日龄工蜂成虫体内差异表达，在15日龄成虫体内的表达量最高且显著高于1, 2, 6, 12和17日龄成虫体内的表达量。AcMMP14在东方蜜蜂工蜂成虫的7种不同组织中差异表达，在触角中的表达量最高且显著高于脑、表皮、脂肪体、毒腺、中肠和咽下腺中的表达量。与未接种的对照组相比，东方蜜蜂微孢子虫接种后1和2 d时工蜂成虫中肠中AcMMP14的表达量显著下调，3和4 d时工蜂成虫中肠中AcMMP14的表达量下调但差异不显著。【结论】AcMMP14为潜在的亲水性蛋白和分泌蛋白；AcMMP14在东方蜜蜂工蜂不同发育阶段和成虫组织中发挥潜在的重要功能；工蜂成虫中肠中AcMMP14在东方蜜蜂微孢子虫的第一个增殖周期前期被激活表达。

摘要: 【目的】本研究旨在鉴定中华蜜蜂Apis cerana cerana幼虫肠道中体液免疫通路相关基因及其剪接异构体，为持续开展中华蜜蜂体液免疫通路相关基因和剪接异构体的分子克隆与功能研究提供资源和基础。【方法】通过Blast将前期基于中华蜜蜂工蜂幼虫肠道转录组的纳米孔(nanopore)测序数据鉴定到的所有全长转录本分别比对到KEGG和Nr数据库，筛选出体液免疫信号通路相关基因及其剪接异构体。利用GffCompare软件将鉴定到的体液免疫信号通路相关基因比对到东方蜜峰A.cerana参考基因组(版本号：ACSNU-2.0),以优化已注释基因的结构。使用Astalavista软件鉴定体液免疫信号通路相关基因的可变剪接(alternative splicing, AS)事件类型，再统计不同类型的AS事件数目；采用RT-PCR验证AS事件的真实性。利用TAPIS pipeline软件预测体液免疫信号通路相关基因所含可变多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation, APA)位点，并通过MEME软件鉴定APA位点上游50 bp的基序(motif);通过3′RACE验证APA位点的真实性。【结果】共鉴定到JNK-p38-MAPK信号通路相关的23个基因及135条剪接异构体，Toll信号通路相关的21个基因和130条剪接异构体，JAK/STAT信号通路相关12个基因和53条剪接异构体，IMD信号通路相关10个基因和46条剪接异构体。注释到东方蜜蜂参考基因组上体液免疫通路相关的18个基因的5′UTR被延长，19个基因的3′UTR被延长，8个基因的5′UTR和3′UTR同时被延长。共鉴定到体液免疫信号通路相关的16个基因的60次AS事件，其中最丰富的类型是可变5′端剪接(alternative 5′splice site, A5SS)(26次)。通过RT-PCR证实了随机选择的3个基因的AS事件的真实性。共鉴定到体液免疫信号通路相关的47个基因含有1个及以上的APA位点，其中含有1个APA位点的基因最多。在APA位点上游鉴定到3条一致性序列：ATATAWAWWTATATRWATNYD, HVVN VNNDBDNBHNDDDNWNNNNNWNNH和BSHDVWDRDBDDDKKNVWDRDKHHVKHDVNNVWDND BHWHB。3′RACE结果证实了随机选择的2个基因所含APA位点的真实性。【结论】首次鉴定到中华蜜蜂幼虫肠道体液免疫信号通路相关的66个基因和364条剪接异构体，优化了东方蜜蜂参考基因组上注释到体液免疫通路的29个基因结构，挖掘出体液免疫相关的60次AS事件和139个APA位点，并证实了体液免疫相关基因的AS事件和APA位点的真实性。

摘要: 【目的】本研究旨在明确意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica piR-ame-1186994的调控功能，为进一步探究piR-ame-1186994的调控作用机制提供科学依据。【方法】通过Stem-loop RT-PCR和Sanger测序分别验证piR-ame-1186994在意大利蜜蜂6日龄工蜂成虫中肠、 12日龄雄蜂成虫精巢和7日龄蜂王成虫卵巢中的表达和序列真实性。使用相关软件预测piR-ame-1186994的靶mRNA并进行GO和KEGG数据库注释，进而构建发育信号通路、能量代谢通路及细胞和体液免疫通路相关调控网络。饲喂刚出房工蜂成虫piR-ame-1186994的模拟物(mimic)和mimic-NC(阴性对照组),利用RT-qPCR检测工蜂成虫中肠中的piR-ame-1186994及其关键2个关键靶基因(YAP1和PLD2)的相对表达量。【结果】在意大利蜜蜂6日龄工蜂成虫中肠、 12日龄雄蜂成虫精巢和7日龄蜂王成虫卵巢中均扩增出piR-ame-1186994的特异性片段。piR-ame-1186994共靶向1 097条mRNA,可注释到新陈代谢过程、结合和细胞等30条GO条目以及Wnt信号通路、内吞作用和催产素信号通路等182条KEGG通路。其中，分别有36和16条靶mRNA涉及5条发育相关信号通路(mTOR, Wnt, Hippo, AMPK和Notch信号通路)和4条能量代谢相关通路(氨基糖和核苷酸糖代谢、果糖和甘露糖代谢、糖酵解/糖异生及磷酸戊糖通路)。此外，分别有29和8条靶mRNA涉及4条细胞免疫通路(溶酶体、内吞作用、吞噬体和泛素介导的蛋白水解)和3条体液免疫通路(PI3K-Akt, MAPK和FoxO信号通路)。相较于阴性对照组mimic-NC, mimic-piR组中piR-ame-1186994的表达量在1, 3和5日龄工蜂中肠中显著上调，在2和4日龄工蜂中肠中极显著上调；靶基因YAP1的表达量在1, 3, 4和5日龄工蜂中肠中极显著下调，在2日龄工蜂中肠中显著下调；靶基因PLD2的表达量在2, 3和5日龄工蜂中肠中显著下调，在4日龄的工蜂中肠中极显著下调。【结论】piR-ame-1186994在意大利蜜蜂工蜂中肠、雄蜂精巢和蜂王卵巢中存在与表达；piR-ame-1186994通过靶向和负调控YAP1和PLD2的表达潜在调节工蜂中肠发育和免疫。

摘要: 蜂王浆是深受消费者喜爱的蜂产品之一，王浆主蛋白(major royal jelly proteins, MRJPs)具有调控蜜蜂级型分化和改善人体健康的重要功能。工蜂咽下腺是蜂王浆蛋白质的“生产车间”,其合成和分泌活性直接影响到蜂王浆品质。近年来，不同研究在咽下腺形态结构、转录组水平和蛋白组水平揭示了蜂种、发育阶段和环境条件调控MRJPs合成与分泌的分子基础，为提升蜂王浆品质提供理论基础。本文总结了MRJPs组成和功能，围绕蜜蜂咽下腺和影响MRJPs合成和分泌的因素进行了综述，并对探究蜜蜂咽下腺合成和分泌MRJPs的研究方向进行了展望：(1)深入了解咽下腺合成MRJPs的内在机理；(2)绘制咽下腺合成MRJPs的作用路径；(3)从细胞层面剖析咽下腺合成MRJPs的关键细胞类型及功能。以期为开展MRJPs合成机制相关的研究提供新视角。

摘要: 【目的】中华蜜蜂Apis cerana cerana是我国本土蜂种，也是生态系统中重要的传粉昆虫。陕西省作为养蜂大省，由南向北横跨三大气候带，自然环境区域差异大，蜜源植物种类丰富，各地均有养殖蜂的传统。开展中华蜜蜂地理种群形态和遗传多样性研究将为今后的利用与保护打下基础。【方法】对陕西省内20个样点共42群中华蜜蜂样本进行19个外部形态指标测定，并进行逐步判别分析以及聚类分析；对tRNA^leu-COII, COI, ITS-1, ITS-2和18S rDNA基因片段进行PCR扩增并测序，并基于核苷酸序列采用最大似然法构建了系统发育树。【结果】陕西省内20个样点的中华蜜蜂蜂群在形态指标与tRNA^leu-COII, COI, ITS-1, ITS-2和18S rDNA基因序列均存在分化。基于形态数据的逐步判别分析显示，位于大巴山区的白河、上竹与镇坪的中华蜜蜂聚为一群，黄龙的HL2, HL4, HL9和HL13蜂群聚为一群；而基于形态数据的聚类分析显示，陕北地区所采集的YWC1, SD1, TJW1, KYM1和KYM3蜂群聚为一支，大巴山地区的HX2, HX3, HX4, BH2, BH3和SZ1蜂群聚为一支；基于上述基因序列的系统发育分析显示，榆林YWC1, SD1, TJW1, TJW2, TJW3, KYM1和KYM2蜂群聚为一支，黄龙的HL1, HL2, HL3, HL5, HL7, HL8, HL9, HL10, HL11, HL12和HL14蜂群聚为一支，关中地区与汉中的BY1, BY2, YX1, YX2, BJ1和BJ2蜂群聚为一支，安康的HX1, HX2, HX3, HX4, QJP1, BH1和BH3蜂群聚为一支。【结论】陕西省内中华蜜蜂具有较高的种群多样性，所采集的中华蜜蜂可分为陕北型、黄龙型以及大巴山型，同一地区的中华蜜蜂在形态指标与基因序列上具有更高的相似度，同时存在不同地区蜂群聚类到一起的情况，表明陕西省内中华蜜蜂面临种群混杂与多样性下降的风险，应当通过建立更多中华蜜蜂保种区等措施，加强对于省内中蜂地理种群的保护。