摘要: 【目的】啶氧菌酯是蜜蜂常接触到的杀菌剂，其对蜜蜂工蜂健康的影响常被忽视。研究明确啶氧菌酯胁迫对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica不同日龄工蜂的影响，为蜜蜂健康养殖和授粉安全提供理论依据。【方法】利用啶氧菌酯田间推荐浓度(113, 150, 225和281 mg/L)分别连续暴露处理意大利蜜蜂1, 8和21日龄工蜂7 d,测定各浓度处理组不同日龄工蜂存活率，测定保护酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)及解毒酶羧酸酯酶(carboxylesterase, CarE),谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase, GST)和细胞色素P450单加氧酶(cytochrome P450 monooxygenase, CYP450)活性；利用RT-qPCR检测营养相关基因胰岛素样肽(insulin-like peptides, ILP)基因(ILP1和ILP2)和卵黄原蛋白(Vitellogenin)基因以及免疫相关基因蜂蛾抗菌肽(Abaecin)基因、蜜蜂抗菌肽(Apidaecin)基因、防卫素(Defensin1)基因和膜翅抗菌肽(Hymenoptaecin)基因的表达量。【结果】113, 150, 225和281 mg/L啶氧菌酯连续处理与对照组比可显著降低意大利蜜蜂1和21日龄工蜂的存活率。113, 150和225 mg/L啶氧菌酯处理使1和8日龄工蜂CAT和CYP450活性比对照组增加，使SOD, CarE和GST活性随处理浓度的增加而下降，比对照组诱导21日龄工蜂CAT, SOD和GST活性抑制CarE活性。啶氧菌酯各处理组1和21日龄工蜂ILP1和ILP2表达量比对照组均下调，而1和8日龄工蜂的Vitellogenin表达量均高于对照组。与对照组相比，啶氧菌酯可显著提高1日龄工蜂Apidaecin和Hymenoptaecin的表达量，但抑制8日龄工蜂Apidaecin和Hymenoptaecin的表达量，同时225和281 mg/L啶氧菌酯可显著抑制21日龄工蜂Abaecin,Apidaecin,Defensin1和Hymenoptaecin的表达量。【结论】田间推荐使用浓度的啶氧菌酯对意大利蜜蜂不同日龄工蜂具有显著的毒性，对工蜂的存活、酶活性、营养代谢和免疫能力产生胁迫，增加工蜂的生存压力，进而危害蜂群的健康。

摘要: [目的]啶氧菌酯是蜜蜂常接触到的杀菌剂,其对蜜蜂工蜂健康的影响常被忽视。研究明确啶氧菌酯胁迫对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica不同日龄工蜂的影响,为蜜蜂健康养殖和授粉安全提供理论依据。[方法]利用啶氧菌酯田间推荐浓度(113,150,225和281 mg/L)分别连续暴露处理意大利蜜蜂1,8和21日龄工蜂7 d,测定各浓度处理组不同日龄工蜂存活率,测定保护酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)及解毒酶羧酸酯酶(carboxylesterase,CarEs),谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)和细胞色素P450单加氧酶(cytochrome P450 monooxygenase,P450)活性;利用RT-qPCR检测营养相关基因胰岛素样肽(insulin-like peptides,ILP)基因(ILP1和ILP2)和卵黄原蛋白(Vitellogenin)基因以及免疫相关基因蜂蛾抗菌肽(Abaecin)基因、蜜蜂抗菌肽(Apidaecin)基因、防卫素(Defensin1)基因和膜翅抗菌肽(Hymenoptaecin)基因的表达量。[结果]113,150,225和281 mg/L啶氧菌酯连续处理与对照比可显著降低意大利蜜蜂1和21日龄工蜂的存活率。113,150和225 mg/L啶氧菌酯处理使1和8日龄工蜂CAT和P450 s的活性增加,使SOD,CarEs和GST活性随处理浓度的增加而下降,诱导21日龄工蜂CAT,SOD和GST活性抑制CarEs活性。啶氧菌酯各处理组1和21日龄工蜂ILP1和ILP2表达量均下调,而1和8日龄工蜂的Vitellogenin表达量均高于对照。啶氧菌酯可显著诱导1日龄工蜂Apidaecin和Hymenoptaecin的表达量,但抑制8日龄工蜂Apidaecin和Hymenoptaecin的表达量,同时225和281 mg/L啶氧菌酯可显著抑制21日龄工蜂Abaecin,Apidaecin,Defensin1和Hymenoptaecin的表达量。[结论]田间推荐使用浓度的啶氧菌酯对意大利蜜蜂工蜂具有显著的毒性,对工蜂的存活、酶活性、营养代谢和免疫能力产生胁迫,增加工蜂的生存压力,进而危害蜂群的健康。

摘要: 【目的】解析意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂幼虫肠道发育过程中的长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)差异表达谱，并揭示差异表达lncRNA(differentially expressed lncRNA, DElncRNA)在幼虫肠道发育中的调控作用。【方法】基于前期获得的意大利蜜蜂工蜂4, 5和6日龄幼虫肠道转录组数据(分别为Am4, Am5和Am6),利用相关软件筛选Am4 vs Am5比较组和Am5 vs Am6比较组中的DElncRNA,分析DElncRNA和两个比较组中共同上调和下调lncRNA的顺式调控作用及竞争性内源RNA(competing endogenous RNA, ceRNA)的调控作用。通过RT-qPCR验证转录组数据的可靠性。【结果】在Am4 vs Am5比较组中筛选出214条上调和251条下调lncRNA,在Am5 vs Am6比较组中筛选出141条上调和332条下调lncRNA;两个比较组共有的上调和下调lncRNA分别为7和16条。Am4 vs Am5比较组中的DElncRNA潜在调控250个邻近基因，涉及细胞进程等28个GO条目及Wnt信号通路等58条KEGG通路；Am5 vs Am6比较组中的DElncRNA潜在调控295个邻近基因，涉及细胞部分等35个GO条目及FoxO信号通路等73条KEGG通路；上述两个比较组中共有的7个上调lncRNA潜在调控10个邻近基因，涉及1个GO条目及代谢通路、谷胱甘肽代谢和核质转运等7条KEGG通路。共有的16个下调lncRNA潜在调控27个邻近基因，涉及8个GO条目及精氨酸生物合成、谷胱甘肽代谢和代谢通路等13条KEGG通路。此外，Am4 vs Am5比较组中的49条DElncRNA可靶向16个差异表达miRNA (differentially expressed miRNA, DEmiRNA)进而靶向122条差异表达mRNA (differentially expressed mRNA, DEmRNA),可注释到代谢进程等24个GO条目和Wnt信号通路等21条KEGG通路。Am5 vs Am6比较组中的38条DElncRNA可靶向8条DEmiRNA进而靶向67条DEmRNA,可注释到催化活性等21个GO条目和FoxO信号通路等10条KEGG通路；上述两个比较组共有的1条下调lncRNA MSTRG.10589.2可靶向ame-miR-6052和miR-511-y,进而靶向29条DEmRNA。RT-qPCR结果显示随机选取的7条DElncRNA的相对表达量与测序数据一致，证实了所用转录组数据的可靠性。【结论】意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道发育过程伴随着lncRNA的动态差异表达，DElncRNA可通过顺式作用和ceRNA网络潜在参与对幼虫肠道发育的调控，在幼虫肠道发育中潜在发挥重要的调控作用。

摘要: 【目的】中华蜜蜂Apis cerana cerana是东方蜜蜂Apis cerana在中国地区分布最广泛的亚种，在地理适应和生态多样性方面有显著优势。中华蜜蜂的低温适应性优于西方蜜蜂A.mellifera,可用于高海拔高山地区和冬季蜜源的采集，该性能在生产方面有重要作用，探究中华蜜蜂低温耐受性可有助于优良品系的筛选，为农业经济创造更大价值。【方法】收集分别在常温(25.0±0.2)℃(对照)和低温(4.0±0.2)℃下处理6 h时的中华蜜蜂3, 10和21日龄工蜂6组样本，进行转录组二代测序(Illumina RNA-Seq)和全长转录组三代测序(PacBio Iso-Seq),利用二代测序数据对三代测序数据进行校正，基于高质量的测序数据对比NR, NT, Pfam, KOG/COG, Swiss-Prot, KEGG和GO数据库，对新转录本和新基因进行功能注释。【结果】中华蜜蜂工蜂6组样本全长转录组测序分别获得71.17, 42.76, 58.82, 53.45, 40.33和42.79 Gb读段，平均N50达到205 895 bp,质控后得到164 194条一致性序列；通过比对到东方蜜蜂参考基因组可获得21 519条新转录本，与中华蜜蜂物质代谢、神经系统和信号转导等密切相关，且不同日龄中华蜜蜂受低温胁迫后，物质代谢、细胞发育、寿命及神经发育等受到影响，同时还鉴定到28 647条长链非编码RNA(long non-coding RNA, LncRNA),其中lincRNA和sense＿intronic两种类型LncRNA的占比最多，分别为35%和45%。【结论】本研究利用矫正后的中华蜜蜂工蜂PacBio Iso-Seq转录组数据鉴定到大量未注释的新基因和新转录本，并对其进行了功能注释，分析了LncRNA的数量和类型，研究结果完善了东方蜜蜂参考基因组，为中华蜜蜂抗寒机制的探究提供了良好的数据背景。

摘要: 【目的】明确西方蜜蜂Apis mellifera微小RNA（microRNA, miRNA）在越冬期间的表达量变化，揭示miRNA及其靶mRNA与抗寒性的潜在关系，在miRNA组学层面进一步揭示西方蜜蜂抗寒性的分子机理。【方法】利用sRNA-seq技术鉴定西方蜜蜂4个亚种意大利蜜蜂A.m.ligustica、欧洲黑蜂A.m.mellifera、高加索蜂A.m.caucasica和卡尼鄂拉蜂A.m.carnica在越冬期初期和越冬中期的miRNA;根据P≤0.05且|log₂fold change|≥1标准筛选4个亚种在越冬不同时期的差异表达miRNA（differentially expressed miRNAs, DEmiRNAs）。利用相关生物信息学软件对筛选出的miRNA的靶mRNA进行预测，并对靶mRNA进行GO及KEGG数据库注释。根据靶向结合关系构建DEmiRNA和靶mRNA的调控网络，并利用Cytoscape进行可视化。随机选取ame-miR-263a-5p, ame-miR-184-3p, ame-miR-263b-5p, ame-miR-190-5p, ame-miR-6052-5p, ame-miR-9a-5p, ame-miR-100-5p和ame-miR-306-5p等8个DEmiRNA进行RT-qPCR验证。【结果】鉴定获得越冬期西方蜜蜂4个亚种210个miRNA,包括178个保守的miRNA和32个新的miRNA,长度介于18～30 nt,分布数量最多的长度为22和23 nt,首位碱基为U的miRNA数量最多。西方蜜蜂4个亚种在越冬初期和越冬中期表达量最高的DEmiRNAs为ame-miR-1-3p, ame-miR-276-3p和ame-miR-184-3p。意大利蜜蜂越冬初期vs越冬中期共筛选出22个DEmiRNA,可靶向调控394条mRNA,这些mRNA分别注释到161个GO功能条目和16条KEGG通路上；欧洲黑蜂越冬初期vs越冬中期共筛选出28个DEmiRNA,可靶向调控415条mRNA,这些mRNA分别注释到147个GO功能条目和15条KEGG通路上；高加索蜂越冬初期vs越冬中期共筛选67个DEmiRNA,可靶向调控1 021条mRNA,这些mRNA分别注释到171个GO功能条目和21条KEGG通路上；卡尼鄂拉蜂越冬初期vs越冬中期共筛选18个DEmiRNA,可靶向调控330条mRNA,这些mRNA分别注释到147个GO功能条目和13条KEGG通路上。西方蜜蜂4个亚种DEmiRNA与靶mRNA之间形成较为复杂的调控网络。RT-qPCR结果显示8个DEmiRNA的表达趋势与测序数据一致，证实了本研究中测序数据的可靠性。【结论】本研究明确西方蜜蜂4个亚种越冬不同时期的miRNA表达量变化，筛选出多个潜在调控西方蜜蜂越冬期抗寒性的分子候选靶标miRNA,其中ame-miR-14-3p和ame-miR-3786-5p在欧洲黑蜂、高加索蜂和卡尼鄂拉蜂中负调控多个mRNA的表达，在意大利蜜蜂中并没有参与；miRNA通过调控靶基因的表达参与甘油磷酸脂代谢、MAPK信号通路和mTOR等关键信号通路参与西方蜜蜂的抗寒性。