摘要: 【目的】核心结合因子(core binding factor, CBF)β亚基(CBFβ)是一种重要的转录因子，在昆虫胚胎发育和免疫调节等过程中发挥关键作用，但是其在西方蜜蜂Apis mellifera中尚未报道。本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术探究CBFβ在西方蜜蜂中的生理功能。【方法】克隆西方蜜蜂Bgb(big brother)基因AmBgb的编码序列(coding sequence, CDS),并进行生物信息学分析；运用qRT-PCR检测AmBgb在西方蜜蜂不同发育发育阶段(1-3日龄工蜂卵，1, 3和5日龄工蜂幼虫，工蜂预蛹，1, 3, 5, 7和9日龄工蜂蛹，刚出房工蜂，10日龄哺育蜂以及21日龄采集蜂)的表达量；采用CRISPR/Cas9敲除西方蜜蜂卵中AmBgb,监测卵的发育和存活情况，并通过PCR和测序的方法检测靶位点，验证AmBgb在西方蜜蜂中的生理功能。【结果】西方蜜蜂AmBgb的CDS全长为759 bp,编码252个氨基酸，第39-201位氨基酸存在1个CBFβ结构域；AmBgb分子量为28 982.37 D,无信号肽和跨膜结构，预测其为胞内蛋白；系统进化树显示西方蜜蜂AmBgb与东方蜜蜂A.cerana的Bgb高度同源(氨基酸序列一致性为99.21%),且亲缘关系最密切。AmBgb在2和3日龄工蜂卵中的表达量明显高于其他发育阶段的。基于CRISPR/Cas9处理的西方蜜蜂43粒卵中，有5粒卵孵化为幼虫且AmBgb靶位点无突变；随机对7粒死亡卵进行检测，发现6粒卵中AmBgb的靶位点出现基因编辑，包括不同长度插入、缺失或替换。【结论】西方蜜蜂AmBgb在2和3日龄卵中高量表达，敲除AmBgb导致卵不能正常孵化为幼虫。这些结果表明AmBgb在西方蜜蜂胚胎发育过程中发挥重要作用，这将为其他膜翅目(Hymenoptera)昆虫中该基因的生理功能研究提供理论指导。

摘要: 【目的】本研究旨在丰富西方蜜蜂Apis mellifera过氧化物还原酶5（peroxiredoxin-5） AmPRX5的理化性质和分子特征信息，检测AmPRX5的表达模式，并探究AmPRX5在蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis侵染后对西方蜜蜂的抗氧化应激作用，为进一步开展AmPRX5功能和作用机制研究提供科学依据。【方法】通过PCR扩增西方蜜蜂AmPRX5的CDS;使用相关软件预测AmPRX5的理化性质和分子特征，构建蛋白互作网络，并进行保守基序、结构域和系统进化分析。采用RT-qPCR检测AmPRX5在西方蜜蜂工蜂不同发育阶段（卵、 3和5日龄幼虫、 1和2日龄预蛹、 1日龄蛹以及1, 2, 6, 8和12日龄成虫）和工蜂成虫不同组织（脑、咽下腺、中肠、触角、毒腺、表皮和脂肪体）及3日龄幼虫接种蜜蜂球囊菌后4, 5和6日龄幼虫肠道中的表达量；利用分光光度法检测蜜蜂球囊菌接种3日龄幼虫后4, 5和6日龄幼虫肠道中的过氧化氢（H₂O₂）含量。【结果】成功克隆到西方蜜蜂AmPRX5的CDS,长558 bp。AmPRX5的分子式为C₉₀₄H₁₄₄₅N₂₄₁O₂₆₄S₈,分子量约为20.17 kD,等电点为8.99,平均亲水系数为-0.013。AmPRX5含有19个磷酸化位点，但不含典型的信号肽和跨膜结构域。AmPRX5的二级结构包含88个无规卷曲、 59个α-螺旋和38条延伸链。AmPRX5与硫氧还蛋白还原酶等10个蛋白构成1个互作网络。西方蜜蜂和其他9种蜂的PRX5均包含1个相同的PRX5结构域和6个保守基序。西方蜜蜂与东方蜜蜂A.cerana的PRX5同源性最高。AmPRX5在1日龄蛹中的表达量最高且显著高于卵、 3日龄幼虫、 5日龄幼虫、 1日龄预蛹和2日龄预蛹中的表达量；AmPRX5在12日龄成虫体内的表达量最高且显著高于1, 2, 6和8日龄成虫体内的表达量；AmPRX5在成虫触角中的表达量最高且显著高于中肠、脂肪体、表皮、毒腺和脑中的表达量。与未接种对照组比较，西方蜜蜂3日龄幼虫接种蜜蜂球囊菌后AmPRX5的表达量在4日龄幼虫肠道中上调但无显著差异，在5日龄幼虫肠道中极显著上调，在6日龄幼虫肠道中显著上调；H₂O₂的含量在接种蜜蜂球囊菌后4和5日龄幼虫肠道中均极显著上升，在6日龄幼虫肠道中显著升高。【结论】AmPRX5是一种潜在的亲水性、非跨膜和胞内蛋白；AmPRX5在西方蜜蜂不同发育阶段和不同组织中动态差异表达；AmPRX5可能通过影响H₂O₂含量参与幼虫对蜜蜂球囊菌侵染的应答。

摘要: 【目的】本研究旨在探究我国油茶Camellia oleifera花期中华蜜蜂Apis cerana cerana粉源植物多样性及其对油茶传粉的贡献。【方法】对2015-2023年我国油茶9个种植区(三带九区) 99个油茶基地采集的中华蜜蜂标本洗刷其体表携带花粉，提取混合花粉DNA,进行ITS2区PCR扩增，基于Illumina PE250二代高通量测序技术进行测序；经Trimmomatic, FLASH和Usearch v10.0对原始序列进行质控、拼接和去嵌合体处理，以97%相似度划分可操作分类单元(operational taxonomic units, OTUs),基于NT数据库进行物种注释。采用Past v4.17计算Simpson指数、Shannon指数、Chao1指数及Margalef指数等Alpha多样性指数值，利用SPSS v26.0进行单因素方差分析与LSD检验，分析不同种植区油茶花期中华蜜蜂的粉源植物组成、丰度和多样性。【结果】共注释到油茶花期中华蜜蜂粉源植物33目58科85属150种。不同油茶种植区花期中华蜜蜂粉源植物组成和丰度不同，总占比超过1.00%的粉源植物共有13种。其中油茶花粉的相对丰度较低，为0.03%～23.33%。中带油茶种植区的粉源植物Simpson指数、 Shannon指数、 Chao1指数和Margalef指数值最高(分别为0.75±0.14, 2.01±0.52, 85.04±21.53和7.30±1.84),北带的分别为0.56±0.17, 1.22±0.36, 35.99±3.11和2.76±0.30,南带的分别为0.43±0.14, 1.10±0.25, 77.74±9.71和6.60±0.78,多样性较低。在油茶种植区的层面上，Ⅱc(中带贵州高原区)的粉源植物Simpson指数、 Shannon指数、 Chao1指数和Margalef指数值最高(分别为0.87±0.00, 2.44±0.06, 101.97±11.33和8.33±0.58)、 Ia(北带东部桐柏山大别山低山丘陵区)的最低(分别为0.40±0.00, 0.90±0.01, 34.07±1.85和2.82±0.37)。去除油茶花粉后，不同油茶种植区的伴生粉源植物的相对丰度存在显著地域差异，优势种包括鬼针草Bidens pilosa、甘菊Chrysanthemum lavandulifolium、蔓菁Brassica rapa及假弯曲碎米荠Cardamine fallax(最高相对丰度分别为85.05%, 75.71%, 43.99%和35.38%)。【结论】中华蜜蜂是我国油茶的传粉昆虫之一，其体表携带花粉中油茶花粉的含量在不同地区差异性显著。油茶花期中华蜜蜂粉源植物资源丰富，且存在明显的区域性差异。

摘要: 【目的】本研究旨在通过检测东方蜜蜂Apis cerana的croquemort基因AcCrq的时空表达谱并解析AcCRQ蛋白理化性质和分子特性，为AcCRQ的功能研究提供参考和基础。【方法】RT-PCR扩增AcCrq的编码序列（Coding sequence,CDS）。利用相关软件预测AcCRQ蛋白的理化性质和分子特性，鉴定东方蜜蜂和其他物种AcCrq的保守基序和结构域，并比对氨基酸序列和构建系统进化树。【结果】RT-qPCR检测AcCrq在东方蜜蜂工蜂的触角、中肠、脑、咽下腺、脂肪体、毒腺和表皮组织，以及卵、幼虫、预蛹、蛹和不同日龄工蜂成虫中的相对表达量。成功验证到AcCrq,CDS含有1 719个核苷酸，可编码572个氨基酸。AcCRQ蛋白的分子量约为65.44 kDa，分子式为C₂₉₆₉H₄₅₅₄₀N₇₆₄O₈₆₄S₂₁，等电点为5.96，平均亲水系数为-0.30，含23个丝氨酸磷酸化位点，9个酪氨酸磷酸化位点和17个苏氨酸磷酸化位点，但不存在典型的信号肽。AcCRQ在黑大蜜蜂Apis laboriosa、小蜜蜂Apis florea、西方蜜蜂Apis mellifera、兰花蜂Eufriesea mexicana、东南蓝莓蜂Habropoda laboriosa、红壁蜂Osmia bicornis bicornis和蓝果园壁蜂Osmia lignaria中具有较高的氨基酸序列一致性；东方蜜蜂与小蜜蜂和西方蜜蜂的CRQ进化距离最近。AcCrq在工蜂成虫触角、中肠、脑、咽下腺、脂肪体、毒腺和表皮中均有表达，但表达量存在差异，触角中AcCrq的表达量显著高于其他组织的表达；AcCrq在东方蜜蜂工蜂卵、幼虫、预蛹和蛹中均有表达，但表达量存在差异，相较于在卵中的表达量，3日龄幼虫和8日龄预蛹中AcCrq的表达量显著降低，而7日龄预蛹和12日龄蛹中AcCrq的表达量下调但不显著；AcCrq在1日龄、2日龄、6日龄、12日龄、15日龄和17日龄工蜂体内均有表达，但表达量也存在差异，1日龄成虫体内AcCrq的表达量均显著高于其他日龄成虫体内的表达量，2和17日龄成虫体内的表达量均低于其他日龄成虫体内的表达量。AcCRQ是潜在的亲水性蛋白但不具分泌功能；东方蜜蜂和其他8个物种的CRQ具有较高的保守性；东方蜜蜂与小蜜蜂和西方蜜蜂的CRQ进化距离最近。【结论】AcCrq在东方蜜蜂工蜂的不同组织和发育阶段动态差异表达。

摘要: 【目的】联苯菊酯广泛应用于蜜源作物害虫防治中，可能会对蜜蜂健康造成危害。本文主要探究了亚致死浓度联苯菊酯对西方蜜蜂Apis mellifera生存、取食、免疫解毒相关基因表达及肠道菌群的影响。【方法】利用5 mg/L和0.5 mg/L的联苯菊酯对西方蜜蜂处理7 d，统计各组蜜蜂的生存率和取食量；利用qPCR技术检测蜜蜂中肠中免疫和解毒基因表达变化；采用16S rDNA测序技术检测蜜蜂肠道菌群丰度、结构变化。【结果】结果显示：（1） 5 mg/L联苯菊酯能够显著降低蜜蜂的生存率和花粉取食量（P<0.05），而对含联苯菊酯的糖水取食量没有显著影响；（2）5 mg/L联苯菊酯显著抑制蜜蜂中肠中CYP6AS3和CYP6AS10基因的表达（P<0.05），而诱导Abaecin、Apidaecin、Defensin、Hymenoptaecin基因上调表达（P<0.05）;0.5 mg/L联苯菊酯显著抑制蜜蜂中肠中Lysozyme、CYP6AS10基因的表达（P<0.05），而诱导Apidaecin、Defensin基因上调表达（P<0.05）;(3)联苯菊酯处理改变了蜜蜂肠道菌群的多样性，并影响特定肠道菌的丰度。【结论】结果表明联苯菊酯暴露不仅损害西方蜜蜂的生存和取食，并对其中肠的免疫解毒系统以及肠道稳态造成影响。