摘要:  【目的】本研究旨在揭示ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道发育过程的调控作用。【方法】通过Stem-loop RT-PCR和Sanger测序分别验证ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中的表达和序列真实性。饲喂ame-miR-14的模拟物(mimic-ame-miR-14)和抑制物(inhibitor-ame-miR-14)及其相应的阴性对照mimic-NC和inhibitor-NC对ame-miR-14分别进行过表达和敲降，利用RT-qPCR检测意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中ame-miR-14的表达量。利用生物信息学软件预测ame-miR-14的靶基因并进行相关分析。利用RT-qPCR检测ame-miR-14的过表达和敲降后其靶基因和在4-6日龄幼虫肠道中的相对表达量。【结果】ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中真实存在和表达。相较于饲喂mimic-NC，饲喂mimic-ame-miR-14后ame-miR-14表达量在意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中均为显著上调；相较于饲喂inhibitor-NC，饲喂inhibitor-ame-miR-14后ame-miR-14表达量在意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中皆为显著下调。ame-miR-14共靶向309个基因，可注释到45条KEGG通路和36个GO条目；进一步分析发现ame-miR-14可靶向14个生长发育相关基因，并与和之间存在潜在的靶向关系。过表达ame-miR-14后，相较于mimic-NC组，mimic-ame-miR-14组的4日龄幼虫肠道内表达量下调，5和6日龄幼虫肠道内表达量均为显著下调；敲降ame-miR-14后，相较于inhibitor-NC组，inhibitor-ame-miR-14组4日龄幼虫肠道内表达量下调，5日龄幼虫肠道内表达量显著上调，6日龄幼虫肠道内表达量上调。与mimic-NC组相比，过表达ame-miR-14后mimic-ame-miR-14组的表达量在4-6日龄幼虫肠道内皆显著下调；与inhibitor-NC组相比，敲降ame-miR-14后inhibitor-ame-miR-14组的表达量在4-6日龄幼虫肠道内均为上调。【结论】ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在和表达；通过饲喂模拟物和抑制物能够分别实现意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内ame-miR-14的有效过表达和敲降；ame-miR-14通过负调控和的表达潜在参与调节幼虫肠道发育。

摘要: 【目的】利用纳米孔(nanopore)测序技术鉴定中华蜜蜂工蜂幼虫肠道中细胞色素P450(cytochrome P450, CYP450)基因及其全长转录本，为后续功能研究提供参考信息和基础。【方法】通过Nanopore PromethION平台对中华蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道进行转录组测序。利用Guppy软件对原始读段(raw reads)进行质控以得到有效读段(clean reads)。通过识别两端引物鉴定全长转录本序列。使用BLAST工具将上述全长转录本的序列比对到Nr和GO数据库以鉴定CYP450基因及其全长转录本。采用Astalavista软件鉴定基因的可变剪接(alternative splicing, AS)事件。通过RTPCR验证不同类型AS事件的可靠性。【结果】在中华蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中分别测得7 338 627, 7 003 419和7 434 233条原始读段，经质控得到的有效读段数分别为7 289 494, 6 959 880和7 387 756条。鉴定到的非冗余全长转录本总数为48 200条。共鉴定到47个CYP450基因和265条CYP450基因全长转录本。共鉴定到CYP450基因的90次AS事件，包括36次外显子跳跃事件、20次可变5′端剪接位点事件、17次内含子保留事件、9次可变3′端剪接位点事件及8次外显子互斥事件。RTPCR结果证实随机选取的3种AS事件类型真实可靠。【结论】鉴定了中华蜜蜂的CYP450基因及其全长转录本，补充了东方蜜蜂参考基因组的相关注释，并揭示中华蜜蜂CYP450基因可通过多种AS类型产生丰富的剪接体。

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