摘要: 【目的】本研究旨在通过蛋白组学与代谢组学联用，揭示吡虫啉胁迫对意大利蜜蜂Apis mellfera ligustica工蜂幼虫的毒性机制。【方法】将意大利蜜蜂工蜂3日龄幼虫暴露于377 ng/mL吡虫啉72 h时的6日龄幼虫进行蛋白质组学和代谢组学分析；筛选对照组和吡虫啉处理组间的差异表达蛋白和差异表达代谢物，并进行GO功能注释和KEGG通路富集；分析差异表达蛋白功能互作网络和线粒体质量控制相关分子网络，对上述意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫中线粒体质量控制相关的10个关键基因(Pgd,MUL1,HSP90α,HUWE1,NDUFS4,MRPL52,GPX,GSHS,TrxR和SOD)进行RT-qPCR验证；通过苏木精-伊红染色对上述意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫进行组织病理学分析，利用RT-qPCR检测凋亡基因Caspase-3的表达量；检测上述意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫中丙二醛和还原型谷胱甘肽的含量。【结果】吡虫啉暴露对意大利蜜蜂工蜂幼虫的存活率具有显著的负面影响，并呈现出明显的时间依赖效应。意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫吡虫啉处理组和对照组间鉴定出451个差异表达蛋白(246个下调，205个上调)和138个差异表达代谢物(42个下调，96个上调)。其中14个差异表达蛋白和8个差异表达代谢物与线粒体质量控制密切相关。吡虫啉暴露不仅干扰氨基酸代谢、蛋白质合成、TCA循环及糖代谢等基础代谢过程，还显著影响线粒体动力学调控、自噬清除、生物合成及抗氧化系统，导致线粒体质量控制失衡，造成能量合成受阻并诱发线粒体自噬与细胞凋亡。差异表达代谢物在脂肪酸代谢和氨基酸代谢通路显著富集，提示脂质过氧化反应可能降低了幼虫的能量利用效率。10个关键基因的表达量变化与蛋白质组学数据一致。与对照组比，吡虫啉处理组6日龄幼虫有明显的细胞凋亡现象，Caspase-3表达上调，还原型谷胱甘肽含量显著降低和丙二醛含量显著增加，证实了氧化应激的发生。【结论】吡虫啉暴露导致意大利蜜蜂幼虫蛋白质和糖代谢等异常，并可能通过破坏线粒体质量控制稳态，诱发氧化损伤和能量代谢紊乱，最终导致幼虫发育异常。本研究为吡虫啉的毒性机制研究提供了新的参考。

摘要: 【目的】本研究旨在明确取食确甾醇对斜纹夜蛾Spodoptera litura及其天敌斑痣悬茧蜂Meteorus pulchricornis的影响。【方法】正常饲料采用脱甾醇技术获得脱甾醇饲料，再分别添加1 mg/g豆甾醇、β-谷甾醇和胆固醇制成不同甾醇饲料，饲喂斜纹夜蛾1日龄幼虫，测定取食不同种类甾醇对其存活及生长发育的影响，并测定寄生取食不同甾醇饲料的斜纹夜蛾3龄幼虫后羽化的斑痣悬茧蜂的发育。将3种甾醇分别和葡萄糖水制成甾醇含量为0.5%的均匀混合物，测定其对斑痣悬茧蜂成蜂取食偏好性的影响。【结果】取食脱甾醇饲料的斜纹夜蛾幼虫无法发育至3龄。与对照(取食正常饲料)相比，取食豆甾醇、β-谷甾醇和胆固醇饲料的斜纹夜蛾幼虫总历期均显著延长；10和20日龄斜纹夜蛾幼虫体重均显著减轻；取食胆固醇饲料的斜纹夜蛾蛹重也显著减轻。与对照相比，取食豆甾醇和胆固醇饲料12 d时的斜纹夜蛾幼虫体内胆固醇含量显著升高，但取食胆固醇饲料12 d时的斜纹夜蛾幼虫血淋巴内胆固醇含量显著降低。与对照相比，寄生取食不同甾醇饲料的斜纹夜蛾3龄幼虫后羽化的斑痣悬茧蜂成蜂寿命显著缩短；成蜂期补充不同甾醇食物后寿命均显著延长。取食偏好性分析中，斑痣悬茧蜂对豆甾醇食物的选择率最高，为40.5%;对胆固醇的食物偏好性较低，选择率为7.1%;斑痣悬茧蜂对不同甾醇食物的吸食时长没有显著差异。【结论】食物中甾醇的有无和种类对斜纹夜蛾生长发育有显著影响；相比于胆固醇，豆甾醇和β-谷甾醇对斜纹夜蛾生长发育的不利影响更大；不同甾醇通过斜纹夜蛾对斑痣悬茧蜂发育的影响主要表现在成蜂期；斑痣悬茧蜂成蜂期的甾醇摄入可以延长其寿命，且对甾醇种类有偏好性。

摘要: 【目的】熊蜂Hex70a作为一种重要的储存蛋白，为熊蜂的基础代谢和生长发育提供营养，尤其是在维持熊蜂蜂王滞育期间的营养代谢发挥着重要作用。本研究旨在制备Hex70a抗体，检测不同营养条件对熊蜂体内Hex70a表达的影响。【方法】利用生物信息学软件对地熊蜂Bombus terrestris Hex70a的疏水性、抗原性及亲水性等理化性质进行分析；设计制备Hex70a的抗体多肽，然后将合成的肽段与血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)偶联后免疫新西兰白兔，收集兔抗体血清，并利用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)鉴定抗体效价；分别用50%糖水、50%糖水与花粉混合物饲喂地熊蜂蜂王3 d时，利用Western blot检测Hex70a的表达量。【结果】Hex70a在第426-437位氨基酸序列亲水性及抗原性高于其他氨基酸序列片段；合成的多肽为CRYKMHQTPYNKD,免疫新西兰白兔后获得了Hex70a抗体，效价达到1∶256 000。Western blot结果显示，50%糖水与花粉混合物处理组检测到Hex70a的明显条带，具有较强的特异性，而50%糖水处理组没有检测到Hex70a任何条带。【结论】本研究成功制备了地熊蜂Hex70a抗体，能特异性识别地熊蜂Hex70a,为准确检测地熊蜂体内Hex70a表达量提供了可靠的检验工具，为检测熊蜂营养健康水平提供了一种有效的方法，并为进一步研究储存蛋白在熊蜂发育中的功能奠定基础。

摘要: 【目的】筛选用于定量地熊蜂Bombus terrestris抗菌免疫基因表达量变化的稳定内参基因。【方法】以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和大肠杆菌Escherichia coli侵染的地熊蜂成年工蜂和雄蜂肠道和脂肪体为对象，采用RT-qPCR技术，检测候选内参基因EF-1,EF-1α,GAPDH1,GAPDH2,S5,S18,S28,TUB,Argk和RP49的表达量；采用GeNorm, NormFinder和BestKeeper对上述候选内参基因的表达稳定性进行分析；使用RefFinder综合分析筛选合适的内参基因。【结果】地熊蜂成年工蜂前肠中表达最稳定的内参基因是GAPDH1和GAPDH2,适合成年工蜂中肠的内参基因为RP49和GAPDH2,适合成年工蜂后肠的内参基因的是EF-1和GAPDH2,适合成年工蜂脂肪体的内参基因是EF-1和S5。S18和GAPDH2为地熊蜂成年雄蜂前肠的理想内参基因，S5和EF-1为成年雄蜂中肠和脂肪体的理想内参基因，GAPDH2和S5为成年雄蜂后肠的理想内参基因。【结论】细菌的侵染可显著改变地熊蜂不同组织中部分内参基因的表达量，导致部分内参基因在不同免疫组织中表达不稳定。本研究结果对地熊蜂免疫应答及工蜂和雄蜂肠道与脂肪体的基因表达变化研究具有重要意义，为熊蜂抗菌免疫相关基因表达量研究奠定了基础。

摘要: 【目的】梨小食心虫Grapholita molesta是一种世界性分布的重要蔷薇科(Rosaceae)果树害虫。雌蛾羽化后需摄食以促进生殖发育，实验室常以蜂蜜供其取食，但蜂蜜易发酵，其产生的挥发性化合物对梨小食心虫雌蛾嗅觉行为的影响尚不明确。【方法】本研究选取实验室常用的非寄主植物源蜂蜜(冠生园)及2种寄主植物源蜂蜜(疆山情和杨老四),采用顶空固相微萃取-气相色谱质谱联用技术(headspace solid-phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry, HS-SPME-GC-MS)分析蜂蜜发酵前后挥发物成分的变化，筛选关键差异挥发性化合物；结合昆虫触角电位(electroantennogram, EAG)测定与产卵选择行为试验，明确梨小食心虫已交配3日龄雌蛾对5个浓度(0.01, 0.1, 1, 10和100μg/μL)的4种挥发性化合物(异戊醇、乙酸乙酯、乙酸异戊酯和正辛烷)的嗅觉行为反应。【结果】从3种蜂蜜样品中共检测出40种挥发物成分，3种蜂蜜发酵前后挥发物的成分及其含量均存在差异。乙酸乙酯、乙醇和乙酸异戊酯在所有样品中均存在，冠生园和杨老四蜂蜜在发酵与未发酵状态下均检测到正辛烷。3种发酵蜂蜜样品中异戊醇含量均较高，而发酵疆山情蜂蜜缺失了未发酵状态下含量较高的正辛烷。EAG试验结果表明，10μg/μL异戊醇、 100μg/μL乙酸乙酯、 100μg/μL乙酸异戊酯和1μg/μL正辛烷可激发梨小食心虫雌蛾强烈的嗅觉反应。产卵选择试验结果表明，蜂蜜发酵挥发性化合物对梨小食心虫雌蛾行为的作用具有浓度效应。异戊醇在0.01和1μg/μL时对梨小食心虫雌蛾表现出引诱作用，而在10和100μg/μL时对梨小食心虫雌蛾表现出驱避作用。乙酸乙酯和乙酸异戊酯在高浓度(10～100μg/μL)时对梨小食心虫雌蛾表现出引诱作用。正辛烷仅在0.1μg/μL时对梨小食心虫雌蛾表现出驱避作用，在0.01, 1和100μg/μL时对梨小食心虫雌蛾表现出引诱作用。【结论】本研究揭示了蜂蜜发酵显著改变了挥发物成分和含量，并发现异戊醇、乙酸乙酯、乙酸异戊酯和正辛烷对梨小食心虫雌蛾的嗅觉及产卵行为具有浓度依赖性调控作用，为嗅觉行为调控技术的开发提供理论支持。