摘要: [目的]利用纳米孔(nanopore)测序技术鉴定中华蜜蜂Apis cerana cerana工蜂幼虫肠道中细胞色素P450 (cytochrome P450,CYP450)相关基因和全长转录本,为后续功能研究提供参考信息和基础。[方法]通过Nanopore PromethION平台对中华蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道进行转录组测序。利用Guppy软件对原始读段(raw reads)进行质控以得到有效读段(clean reads)。通过识别两端引物鉴定全长转录本序列。使用BLAST工具将上述全长转录本的序列比对到Nr和GO数据库以鉴定CYP450基因及相关全长转录本。采用Astalavista软件鉴定基因的可变剪接(alternative splicing,AS)事件。通过RT-PCR验证不同类型AS事件的可靠性。[结果]在中华蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中分别测得7 338 627,7 003 419和7 434 233条原始读段,经质控得到的有效读段数分别为7 289 494,6 959 880和7 387 756条。鉴定到的非冗余全长转录本总数为48 200条。共鉴定到47个CYP450基因和265条CYP450相关全长转录本。共鉴定到CYP450基因的90次AS事件,包括36次外显子跳跃,20次可变5'端剪接位点,17次内含子保留、9次可变3'端剪接位点及8次外显子互斥。RT-PCR结果证实随机选取的3种AS事件类型真实可靠。[结论]鉴定了中华蜜蜂的CYP450基因及相关全长转录本,补充了东方蜜蜂参考基因组的相关注释,并揭示中华蜜蜂CYP450基因可通过多种AS类型产生丰富的剪接体。

摘要: 【目的】本研究旨在通过饲喂法对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂幼虫肠道中ame-miR-bantam进行过表达与敲减，明确ame-miR-bantam对靶基因USP和P300表达的调控作用。【方法】通过饲喂ame-miR-bantam模拟物(mimic-ame-miR-bantam)和抑制物(inhibitor-ame-miR-bantam)及相应的阴性对照mimic-NC-ame-miR-bantam和inhibitor-NC-ame-miR-bantam,对意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道组织中的ame-miR-bantam分别进行过表达和敲减。利用生物信息学软件进行ame-miR-bantam的靶向预测及分析。通过RT-qPCR检测4-6日龄意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道中ame-miR-bantam的过表达和敲减效果及靶基因USP和P300的相对表达量。【结果】相较于饲喂mimic-NC-ame-miR-bantam,饲喂mimic-ame-miR-bantam后，ame-miR-bantam在意大利蜜蜂4-6日龄工蜂幼虫肠道中均显著上调；相较于饲喂inhibitor-NC-ame-miR-bantam,饲喂inhibitor-ame-miR-bantam后，ame-miR-bantam在4日龄工蜂幼虫肠道中显著下调，在5日龄和6日龄工蜂幼虫肠道中下调表达。ame-miR-bantam共靶向222个基因，可注释到细胞进程等35个GO条目和Wnt信号通路等160条KEGG通路。相比于饲喂mimic-NC-ame-miR-bantam的阴性对照组，过表达ame-miR-bantam后，4日龄工蜂幼虫肠道中USP和P300的表达量均为上调；5日龄工蜂幼虫肠道中USP的表达量下调，P300显著下调表达；6日龄工蜂幼虫肠道中USP和P300均显著下调表达。相比于饲喂inhibitor-NC-ame-miR-bantam的阴性对照组，敲减ame-miR-bantam后，4和5日龄工蜂幼虫肠道中USP和P300的表达量均为上调；6日龄工蜂幼虫肠道中USP显著上调表达，P300的表达量上调。【结论】通过饲喂模拟物和抑制物能够分别实现意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道中ame-miR-bantam的有效过表达和敲减；幼虫肠道中ame-miR-bantam可负调控USP和P300的表达。

摘要: 【目的】烟蚜茧蜂Aphidius gifuensis对烟蚜Myzus persicae有着极高的寄生率，而被广泛用于烟田防治烟蚜。但在人工扩繁烟蚜茧蜂过程中，环境因素对烟蚜茧蜂的生长发育有一定影响。本研究旨在明确光周期、湿度和温度对烟蚜茧蜂在烟蚜上寄生力的影响。【方法】在室内分别调查温度25℃、相对湿度70%与4个光周期(9L∶15D,12L∶12D, 14L∶10D和19L∶5D)组合条件下，温度25℃、光周期14L∶10D与4个相对湿度(65%, 70%, 75%和80%)条件下，以及相对湿度70%、光周期14L∶10D与4个温度(10℃, 15℃, 25℃和35℃)组合条件下，烟蚜茧蜂成蜂对烟蚜若蚜的寄生率及成蜂羽化率、寿命、性比(雌性占比)和后足胫节长度。【结果】结果表明光照时间过长或过短均会对烟蚜茧蜂的生长发育造成负面影响。在温度25℃和相对湿度70%时，光周期14L∶10D下烟蚜茧蜂成蜂的体型最大，其成蜂后足胫节最长，为0.439 mm;光周期为12L∶12D下烟蚜茧蜂成蜂的体型最小，后足胫节长度只有0.345 mm;光周期14L∶10D下烟蚜茧蜂成蜂对烟蚜若蚜的寄生率、寿命也最高，分别为42.61%和42.33 h。在温度25℃和光周期14L∶10D时，烟蚜茧蜂成蜂在烟蚜若蚜上的寄生率随着相对湿度的增加出现先升高后减小的变化情况，在相对湿度为75%下寄生率最高，达54.44%;在相对湿度为65%下寄生率最低，只有21.67%;相对湿度70%下烟蚜茧蜂成蜂的寿命和后足胫节最长，分别为42.33 h和0.439 mm;相对湿度75%下烟蚜茧蜂的寿命最短，只有20.42 h;相对湿度65%下烟蚜茧蜂成蜂的后足胫节最短，仅有0.373 mm。在相对湿度70%和光周期14L∶10D时，温度为25℃比低温为10℃和15℃更有利于烟蚜茧蜂成蜂的生长发育，其寄生率、雌性占比和后足胫节长度分别为42.61%, 39.04%和0.439 mm,均高于10℃和15℃下的值；而高温35℃则不利于烟蚜茧蜂成蜂在烟蚜若蚜上的寄生行为，并无僵蚜产生，甚至会使寄主烟蚜死亡。【结论】在温度25℃和相对湿度70%时，光周期为14L∶10D更有利于提高烟蚜茧蜂成蜂的寄生率、体型和寿命；在温度25℃和光周期14L∶10D时，相对湿度为75%更有利于提高烟蚜茧蜂成蜂的寄生率，相对湿度为70%条件更有利于烟蚜茧蜂寿命、体型的增加；在相对湿度70%和光周期14L∶10D时，温度为25℃更有利于烟蚜茧蜂寄生率、体型以及雌性占比的增加，而低温10℃条件更有利于烟蚜茧蜂的寿命的延长。本研究结果为田间大棚或者室内小棚等烟蚜茧蜂人工扩繁及其复壮提供了科学参考。

摘要: 脂肪体是昆虫体内的一种多功能器官，近似于脊椎动物的肝脏，分布于昆虫腹部、胸部甚至头部腔体中，以腹部脂肪体最为发达。蜜蜂脂肪体有外周脂肪体和围脏脂肪体两种类型，由营养细胞、尿酸盐细胞和绛色细胞组成。同其他昆虫中类似，脂肪体在蜜蜂的生命活动中扮演着重要的角色，其形态和功能随发育阶段、季节和劳动分工的变化而变化。脂肪体结构相对简单，但生理功能非常复杂。脂肪体最主要的功能是能量物质的储存和代谢，其不仅是蜜蜂营养物质(即脂质、碳水化合物和蛋白质)的中央储存库，而且是营养代谢的中间站，具有多种能量和物质相互转换的酶系，承担代谢水的供应并合成嘌呤和嘧啶及许多重要的蛋白质。同时，脂肪体是昆虫发育和行为调控过程中各种激素和营养信号的交换中心，脂肪体激素和营养信号参与调控蜜蜂脂肪体发育、营养物质代谢、生殖及劳动分工。脂肪体兼具能量储存和释放、生物合成和分解、营养感知调节、代谢信号整合、内分泌调节、免疫和解毒、磁场感受、提高抗寒能力、保护体腔内器官等多种功能。鉴于脂肪体的重要作用，蜜蜂脂肪体形态和功能的研究成果可以对昆虫营养信号通路的解析、蜂产品高产良种的选育和蜜蜂病害防治的研究提供参考和思路。

摘要: 【目的】本研究旨在明确ace-miR-3720在中华蜜蜂Apis cerana cerana工蜂幼虫肠道发育中的功能，并为进一步探究ace-miR-3720调控肠道发育的分子机理提供理论和实验依据。【方法】根据ace-miR-3720的核苷酸序列设计合成相应的模拟物mimic-miR-3720和抑制物inhibitor-miR-3720,通过饲喂中华蜜蜂工蜂幼虫对ace-miR-3720分别进行过表达和敲减。采用RT-qPCR检测过表达和敲减ace-miR-3720后4-6日龄幼虫肠道内ace-miR-3720及其靶基因CKⅠ,MAPK1和βGBP1的相对表达量；使用分析天平称重过表达和敲减ace-miR-3720后的幼虫肠道重量。【结果】相较于无义模拟物(nonsense mimic, mimic-NC)组，mimic-miR-3720组中ace-miR-3720表达量在中华蜜蜂4和5日龄幼虫肠道中均极显著上调，在6日龄幼虫肠道中显著上调；相较于无义抑制物(nonsense inhibitor, inhibitor-NC)组，inhibitor-miR-3720组中ace-miR-3720表达量在4日龄幼虫肠道中极显著下调，在5和6日龄幼虫肠道中显著下调。ace-miR-3720与基因CKⅠ,MAPK1和βGBP1之间存在潜在靶向关系。与mimic-NC组相比，mimic-miR-3720组中CKⅠ表达量在4和5日龄幼虫肠道中皆极显著下调，在6日龄幼虫肠道中显著下调；MAPK1表达量在4日龄幼虫肠道中显著下调，在5和6日龄幼虫肠道中均极显著下调；βGBP1表达量在4日龄幼虫肠道中显著下调，在5和6日龄幼虫肠道中均极显著下调；此外，4和5日龄幼虫肠道重量均极显著降低，6日龄幼虫肠道重量显著降低。与inhibitor-NC组相比，inhibitor-miR-3720组中CKⅠ表达量在4-6日龄幼虫肠道中皆极显著上调；MAPK1表达量在4日龄幼虫肠道中显著上调，在5和6日龄幼虫肠道中极显著上调；βGBP1表达量在4和6日龄幼虫肠道中显著上调，在5日龄幼虫肠道中极显著上调；此外，4和6日龄幼虫肠道重量显著升高，5日龄幼虫肠道重量极显著升高。【结论】ace-miR-3720在中华蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在；通过饲喂模拟物和抑制物可对中华蜜蜂工蜂幼虫肠道内分别实现miRNA的有效过表达和敲减；ace-miR-3720可能通过调控CKⅠ,MAPK1和βGBP1的表达影响中华蜜蜂工蜂幼虫肠道重量并参与幼虫肠道发育。