摘要: 【目的】本研究旨在克隆西方蜜蜂Apis mellifera RNA m6A甲基转移酶14 (methyltransferase 14, METTL14)基因AmMETTL14,分析AmMETTL14的理化性质和分子特性以及AmMETTL14在工蜂不同发育阶段和不同组织中的表达模式，并制备AmMETTL14多克隆抗体，为持续深入开展AmMETTL14的功能研究提供参考和基础。【方法】通过PCR扩增西方蜜蜂AmMETTL14的CDS并进行Sanger测序验证。使用相关生物信息学软件对AmMETTL14进行生物信息学分析，并构建系统进化树。通过原核表达系统诱导表达AmMETTL14融合蛋白，免疫新西兰白兔以制备多克隆抗体，利用ELISA和Western blot分别检测抗体的效价及特异性。采用RT-qPCR检测AmMETTL14在卵、幼虫、预蛹、蛹及工蜂成虫中以及刚出房工蜂成虫的触角、毒腺、脑、中肠、咽下腺、脂肪体和表皮7种组织中的相对表达量。【结果】成功克隆到西方蜜蜂AmMETTL14的CDS;AmMETTL14的分子式为C_(1957)H_(3113)N_(567)O_(589)S_(15),分子量约为44.49 kD,脂溶系数为79.97,理论等电点为8.58,平均亲水系数为-0.59,不含典型的跨膜结构域和信号肽，可同时定位于细胞核、线粒体和细胞质；西方蜜蜂、中华蜜蜂A.cerana cerana、黑大蜜蜂A.laboriosa、东方蜜蜂A.cerana、大蜜蜂A.dorsata、小蜜蜂A.florea、欧洲熊蜂Bombus terrestris、金环胡蜂Vespa mandarinia、美洲东部熊蜂B.impatiens和黑腹果蝇Drosophila melanogaster的METTL14均含有MT-A70结构域和3个相同的保守基序；AmMETTL14与黑大蜜蜂的METTL14的氨基酸序列一致性最高(65.60%)且亲缘关系最近。制备的AmMETTL14多克隆抗体效价较高(大于512 K)且特异性较强。AmMETTL14在7和8日龄预蛹与卵中的表达量相近且均显著高于在3日龄幼虫中的表达量，在12日龄蛹中的表达量显著高于卵、幼虫和预蛹中的表达量，在6, 12和15日龄工蜂成虫体内的表达量显著高于1日龄工蜂成虫体内的表达量；AmMETTL14在刚出房工蜂成虫脑和咽下腺中的表达量与触角中的表达量相近且均显著高于在毒腺、中肠、脂肪体和表皮中的表达量。【结论】研究结果表明，AmMETTL14可能为亲水性、非跨膜和胞内蛋白，AmMETTL14在幼虫生长发育中发挥潜在的调控作用，制备得到的AmMETTL14的多克隆抗体效价高、灵敏度高和特异性强，为进一步探究AmMETTL14的功能及其参与的表观调控机制打下了基础。

摘要: 【目的】本研究旨在筛选西方蜜蜂Apis mellifera采集蜂咽下腺中高表达的基因，为进一步筛选和研究蜜蜂采集行为相关基因提供依据。【方法】基于前期已获得西方蜜蜂3日龄工蜂(3 d＿W)、10日龄哺育蜂(10 d＿N)、10日龄采集蜂(10 d＿F)、21日龄哺育蜂(21 d＿N)和21日龄采集蜂(21 d＿F)的咽下腺转录组数据，筛选咽下腺差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs),并对10日龄和21日龄采集蜂咽下腺中高表达的DEGs进行GO和KEGG富集分析；利用qPCR检测西方蜜蜂采集蜂咽下腺中高表达的4个DEGs (LOC409889,LOC406114,LOC408453和LOC100578735)在不同发育时期(卵、幼虫、蛹、刚出房工蜂、10日龄哺育蜂和21日龄采集蜂)和21日龄采集蜂组织(腹、胸、触角、上颚腺、咽下腺、蛰针、足、肠道、翅和脑)中的表达量。【结果】比较转录组结果表明，164个上调表达的DEGs在21日龄采集蜂咽下腺中的表达量明显高于在3日龄工蜂、10日龄哺育蜂和21日龄哺育蜂咽下腺中的表达量，且在10日龄采集蜂咽下腺中的表达量也高于在10日龄哺育蜂咽下腺中的表达量；105个下调表达的DEGs的表达趋势与上述164个DEGs的相反。GO分析结果表明，10日龄和21日龄采集蜂咽下腺中高表达的164个DEGs显著富集于硫酸盐跨膜转运蛋白活性、硫化合物跨膜转运蛋白活性、铁离子结合和氧化还原酶活性；下调表达的105个DEGs显著富集于核糖体、细胞内核糖核蛋白复合物和核糖核蛋白复合物；KEGG通路分析结果表明，105个下调表达的DEGs显著富集于核糖体以及淀粉和蔗糖代谢两个通路。qPCR检测结果显示，LOC409889,LOC406114,LOC408453和LOC100578735均在21日龄采集蜂中表达量最高；LOC406114和LOC100578735在21日龄采集蜂咽下腺中的表达量最高，而在其他组织中表达量较低或不表达。【结论】本研究通过比较转录组筛选鉴定了西方蜜蜂采集蜂咽下腺中高表达的DEGs,为深入研究采集蜂咽下腺的功能提供了数据，同时也为研究西方蜜蜂的采集行为及采集力强蜂种的分子选育提供新的视角。

摘要: 【目的】基于自然微栖境中两种寄生性天敌球孢白僵菌Beauveria bassiana-管氏肿腿蜂Sclerodermus guani之间存在竞争和寄生的复杂关系，探究球孢白僵菌胁迫下寄生蜂的适应性生殖策略，并综合评价寄生蜂亲代携带球孢白僵菌(简称“携菌”)后对自身及其子代的致死和寄生效应。【方法】采用浸虫法用不同浓度(1×104, 1×105和1×106孢子/mL)球孢白僵菌孢悬液(简称“菌液”)处理亲代(F_(48)代)管氏肿腿蜂雌成蜂后接入装有寄主松墨天牛Monochamus alternatus幼虫的试管中，测定亲代(F_(48)代)雌成蜂及其子代(F_(49)代)雌成蜂的死亡率、累计死亡率和校正死亡率、产卵前期、产卵期、总产卵量及单雌产卵量；子代(F_(49)代)和子二代(F_(50)代)的平均发育历期、存活率、单雌体重及性比(雄性占比),结合时间-剂量-死亡率模型(time-dose-mortality model, TDM)测定球孢白僵菌对F_(48)和F_(49)代雌成蜂致死过程中的剂量效应和时间效应。【结果】亲代(F_(48)代)雌成蜂携菌量随菌液浓度升高而增加，1×104, 1×105和1×106孢子/mL浓度下平均初始携菌量为0.91×104, 1.73×104和1.95×104孢子/雌，且能将病原菌传递给下一代(F_(49)代),1×104, 1×105和1×106孢子/mL浓度下平均携菌量为0.78×104, 1.40×104和1.51×104孢子/雌；该携菌现象还影响着F_(48)和F_(49)代雌成蜂的寿命与繁殖及其对应子代F_(49)和F_(50)代的适合度。与对照(未接种球孢白僵菌)相比，不同浓度球孢白僵菌孢悬液胁迫时，亲代(F_(48)代)雌成蜂及子代(F_(49)代)雌成蜂的表现发生了一系列显著变化，包括：平均产卵前期明显缩短(F_(48)代缩短了1.03, 1.43和2.03 d; F_(49)代缩短了0.30, 0.80和1.00 d),平均产卵期延长(F_(48)代延长了0.30, 1.00和1.30 d; F_(49)代延长了0.43, 0.73和1.43 d),总产卵量增加(F_(48)代增加了4.80, 17.16和10.33粒；F_(49)代增加了11.57, 25.04和9.14粒),但单雌产卵量减少(F_(48)代减少了4.07, 7.06和15.98粒；F_(49)代减少了5.30, 9.37和20.47粒);同样，相应后代(F_(49)和F_(50)代)适合度也呈同样变化趋势；因亲代(F_(48)代)雌成蜂携带的不同浓度球孢白僵菌(1×104, 1×105和1×106孢子/mL)传代，F_(49)和F_(50)代的幼虫发育进程加快，与F_(49)代相比，F_(50)代的代时分别缩短了3.00, 3.00和4.00 d;同时F_(50)代的存活率及羽化率分别降低了16.21%和19.40%,但单雌体重分别增加了0.09和0.94 mg,雄性后代比例分别下降了1.95%和0.22%。TDM模型检测表明，亲代(F_(48)代)雌成蜂在接种高浓度(1×106孢子/mL)菌液20 d时死亡率达到50.83%,其相应子代蜂(F_(49)代)在羽化后第18天死亡率达到50.00%,此时球孢白僵菌对F_(48)代雌成蜂的LT_(50)值为22.72 d,对F_(49)代雌成蜂的LT_(50)值为24.52 d;而同期1×104和1×105孢子/mL浓度处理下，F_(48)和F_(49)代雌成蜂死亡率均低于40.00%。【结论】管氏肿腿蜂亲代雌成蜂携菌后不仅降低了自身繁殖力还会间接影响其子代的存活和发育；亲代雌成蜂的携菌浓度直接影响着自身及其子代雌成蜂的累计死亡率，且随菌液浓度升高、时间延长而增加；球孢白僵菌对管氏肿腿蜂雌成蜂致死过程中的剂量效应和时间效应存在显著的互作关系。

摘要: 【目的】东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae作为蜜蜂微孢子虫病的主要病原体，对其侵染机制的相关研究鲜有报道。本研究旨在对团队前期通过质谱鉴定获得的东方蜜蜂微孢子虫候选孢壁蛋白NcER＿100148进行原核表达，明确其亚细胞定位，并初步探索其生物学功能。【方法】通过在线软件对前期鉴定的东方蜜蜂微孢子虫候选孢壁蛋白NcER＿100148序列进行生物信息学分析；利用RT-PCR检测东方蜜蜂微孢子虫侵染后西方蜜蜂Apis mellifera成蜂中肠中NcER＿100148的表达量；将NcER＿100148基因片段克隆至原核表达载体pET30a中，IPTG诱导表达重组蛋白并用于制备多克隆抗体；利用Western blot检测NcER＿100148在东方蜜蜂微孢子虫成熟孢子中的表达量；通过间接免疫荧光和免疫电镜技术分析NcER＿100148在东方蜜蜂微孢子虫成熟孢子中的亚细胞定位；利用Western blot和免疫共沉淀法分别分析重组蛋白NcER＿100148与东方蜜蜂微孢子虫几丁质孢子壳(chitin spore coats, CSCs)和极管蛋白NcPTP2和NcPTP3的相互作用关系。【结果】序列分析结果表明，东方蜜蜂微孢子虫NcER＿100148预测分子量为12.169 kD,含1个O-糖基化位点、1个N-糖基化位点和1个糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol, GPI)锚定位点；RT-PCR检测结果表明，NcER＿100148在东方蜜蜂微孢子虫感染后4 d时的西方蜜蜂成蜂中肠中开始表达；Western blot结果表明，NcER＿100148蛋白能在成熟孢子表面表达，并且能够与东方蜜蜂微孢子虫的CSCs互作；亚细胞定位结果显示NcER＿100148定位于东方蜜蜂微孢子虫的成熟孢子孢壁上；Western blot和免疫共沉淀结果显示重组蛋白NcER＿100148能够与极管蛋白NcPTP2和NcPTP3相互作用。【结论】NcER＿100148是定位在东方蜜蜂微孢子虫的成熟孢子孢壁上的一个新型孢壁蛋白，且其可能在孢子内壁的构建、极管的盘绕与固定和参与对宿主的侵染等过程中扮演重要的角色。

摘要: 【目的】台湾甲腹茧蜂Chelonus formosanus是多种鳞翅目(Lepidoptera)害虫的重要寄生性天敌。本研究旨在探明和筛选出台湾甲腹茧蜂合适的低温贮藏条件，以延长其货架期。【方法】将台湾甲腹茧蜂7日龄蛹在5, 9和13℃分别贮藏5, 10, 15, 20和25 d,观察和比较其成虫羽化率、成虫寿命雌成虫24 h内产卵量和成虫寄生率及子代成虫羽化率、雌性比和成虫寿命。【结果】台湾甲腹茧蜂7日龄蛹经不同低温贮藏后，其成虫羽化率和成虫寿命随着贮藏时间的延长呈下降趋势；相同贮藏时间除5 d外，成虫羽化率随温度升高呈上升趋势，13℃贮藏时成虫羽化率显著高于5和9℃下贮藏的；在9和13℃贮藏条件下，雌成虫24 h内产卵量随贮藏时间延长呈下降趋势；9℃贮藏10和15 d时成虫寄生率显著低于对照组(24℃下贮藏的),而其他低温贮藏处理与对照组间成虫的寄生率差异不显著；5℃贮藏5 d的子代雌性比最低，仅为35.27%,而经13℃贮藏的子代雌性比与对照无显著差异；7日龄蛹经不同低温贮藏后其子代的成虫羽化率和成虫寿命与对照间不存在显著差异。【结论】建议在13℃条件下贮藏台湾甲腹茧蜂7日龄蛹不超过15 d。