摘要: 实验室通过连续传代致弱获得一株具有良好免疫保护效果的大口黑鲈蛙虹彩病毒减毒株(LMBV-ZJDSS-F110)。为评估该减毒株对鱼体的免疫作用,采集免疫后1d、4d、7d及28d的肝、脾、头肾组织样本,进行组织病理学和病毒载量分析,结果发现该减毒株对鱼体组织的损伤较轻,且病毒载量随时间推移在各组织中下降。此外,为进一步探究该减毒株对大口黑鲈的免疫调控机制,通过对头肾样本的转录组测序(RNAsequencing, RNA-Seq),发现免疫早期(1d和4d)的4979和6891个差异基因主要富集于先天性免疫通路,如细胞因子-细胞因子受体相互作用、胞质DNA感知及凋亡等通路;免疫中后期(7d和28d)的1693和1758个差异基因则主要富集于适应性免疫通路,如T细胞受体、B细胞受体、Fc epsilon RI信号及Th1/Th2细胞分化等通路。此外,代谢通路中半胱氨酸和蛋氨酸代谢,谷胱甘肽代谢通路主要在免疫前期富集,糖酵解/糖异生代谢通路主要在免疫中后期富集。研究筛选IRF3、MX、TRIM25、NAMPT、DHX58、SRC、RSAD2、TMEM38和C4九个基因进行RT-qPCR验证。结果显示转录组测序具有可靠性。研究为大口黑鲈的免疫应答机制提供了新见解,并为疫苗的进一步开发与应用奠定基础。

摘要: 实验旨在研究枳实提取物对牛蛙(Rana catesbeiana)生长及肠道的调节作用。以牛蛙基础饲料作为对照组(CON),在牛蛙基础饲料中添加枳实提取物作为添加组,添加量分别为500、1000和2000 mg/kg(F500、F1000和F2000),养殖实验持续56d。结果显示:(1)与CON组相比, F1000与F2000组牛蛙的末均重(FBW)与增重率(WGR)显著提高(P<0.05)。(2)与CON组相比, F1000组肠道胰蛋白酶(Trypsin)、脂肪酶(LPS)、α-淀粉酶(AMS)、血清碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性均显著提高(P<0.05)。(3)枳实提取物添加组牛蛙血清中谷草转氨酶(ALT)、谷丙转氨酶(AST)活性均显著低于CON组(P<0.05)。(4)与CON组相比,枳实提取物添加组牛蛙血清和肠道丙二醛(MDA)水平显著降低,超氧化物歧化酶(SOD)活性显著升高(P<0.05)。枳实提取物添加组牛蛙肠道过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、总抗氧化能力(T-AOC)水平显著提高(P<0.05)。(5)与CON组相比,添加组牛蛙肠道菌群Shannon指数、Simpson指数显著降低(P<0.05)。在门水平上,添加组牛蛙肠道中厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度降低,放线菌门(Actinobacteria)、变形菌门(Proteobacte-ria)和梭杆菌门(Fusobacteria)相对丰度升高。在属水平上,枳实提取物添加组牛蛙肠道分枝杆菌属(Mycobac-terium)、鲸杆菌属(Cetobacterium)、乳球菌属(Lactococcus)和红球菌属(Rhodococcus)的相对丰度高于CON组,而多尔氏菌属(Dorea)和支原体属(Mycoplasma)则降低。综上所述,饲料中适量添加枳实提取物可以促进牛蛙生长、提高肠道消化酶活性和抗氧化能力,并改善牛蛙肠道菌群结构。建议牛蛙饲料中枳实提取物的最适添加量为1000 mg/kg。

摘要: 为了探索东北林蛙在越冬期内生殖器官的生理变化,本研究自2013年10月至翌年3月,每月采集雌、雄成体林蛙各10只,测定雄蛙的体重、睾丸重、脂肪体重;雌蛙的体重、输卵管重和卵巢重,并进行测定器官的系数计算和相关性分析。结果表明:雄性林蛙睾丸的重量和系数在越冬期里无显著变化（P>0.05）,而脂肪体的重量和系数自1月之后显著降低（P<0.01）。雌性林蛙卵巢的重量和系数自1月开始显著增加（P<0.01）;而输卵管系数在越冬的第1个阶段（11月¹2月间）显著上升（P<0.01）。相关性分析证明脂肪体是雄蛙的主要越冬能量来源,而输卵管则是卵巢中卵子发育的主要营养物质来源。本研究揭示了林蛙越冬期生殖生理基本规律,并为林蛙养殖提供科学依据。

摘要: 由于环境、气候的恶化以及疾病的侵害,全球两栖动物种群数量呈现出整体衰退的趋势,其中虹彩病毒属蛙病毒科的蛙病毒是不可忽略的原因之一。环介导等温扩增技术(loop-mediated-isothermal-amplification,LAMP)是一种新型的核酸扩增技术,具有特异性强、快速、简便等特点,本研究利用LAMP技术,开发了针对中国东北林蛙种蛙蛙病毒的快速检测方法,针对蛙病毒MCP基因设计出能特异识别靶序列上6个位点的4条特异性引物,在链置换聚合酶(Bst酶)的作用下,62℃扩增30 min。通过对实验参数的优化,扩增后病毒的最低检出数可达到10～2个拷贝。该方法可用于东北林蛙养殖厂种蛙蛙病毒的临床快速检测,保证种蛙的存活质量和数量。

摘要: TBK1是IKKs蛋白激酶家族中的一员,也是免疫应答的重要调节因子之一,在Toll样受体通路等多条信号通路中均能发挥作用。Toll受体作为先天免疫中最为重要的一类模式识别受体,能够特异性地识别病原微生物的保守结构。为了探究东北林蛙在LPS和嗜水气单胞菌刺激下TBK1表达量变化的规律,本研究运用荧光定量PCR检测东北林蛙在嗜水气单胞菌和LPS两种不同的刺激源刺激下肾脏、肺脏、脾脏和肝脏中TBK1的表达水平。结果表明:在嗜水气单胞菌和LPS处理下,肾脏、肺脏、脾脏和肝脏中的TBK1表达量变化显著(P <0. 01),但在不同组织中,LPS和嗜水气单胞菌刺激下TBK1的表达量变化趋势并不完全一致。推测在不同的组织中不同的刺激源产生免疫应答的时间不尽相同。和不同物种的实验数据对比分析,发现各物种TBK1分子的表达量变化关系的规律不显著,推测在不同物种的不同器官中,受到外源微生物侵染时会有选择的激活不同的信号转导通路完成免疫应答。