摘要: 报告了蜕皮激素和保幼激素对天蚕Antheraeayamamai卵黄发生的调控作用。当单独以 2 0 羟基蜕皮酮或保幼激素类似物methoprene处理 ,以及同时用这两种激素处理天蚕蛹时 ,蛹期脂肪体和血淋巴中卵黄原蛋白(Vg)含量明显高于对照 ,即二者对Vg的合成起促进作用。然而 ,卵巢中卵黄蛋白 (Vt)含量则因激素种类而异 ,以保幼激素处理时明显低于对照 ,以 2 0 羟基蜕皮酮处理则反之 ,即前者抑制卵巢对Vg的摄取 ,而后者则起促进作用。离体培养脂肪体并以激素处理的结果表明 ,2 0 羟基蜕皮酮和methoprene均能促进Vg合成 ,但前者作用更明显。综合考虑上述结果可以认为蜕皮激素对该蚕的卵黄发生起主要调控作用。

摘要: 根据家蚕性附腺中含有的利它素能诱导野蚕黑卵蜂寄生涂有该利它素的人造卵及能用家蚕卵繁育野蚕黑卵蜂的特性 ,用化蛹 9天的家蚕雌蛹性附腺分泌部的高丰度的mRNA构建了富含利它素基因的cDNA文库。构建成的未扩增文库的滴度为 3.2 9× 10 4 pfu μL ,重组率为 90 .0 5 % ,扩增后的文库总滴度为 1.5 6× 10 7pfu μL。用PCR方法对总文库和随机挑取的噬菌斑进行扩增 ,表明λZiplox载体中已含有大小为 0 .5～ 8.0kb的cDNA插入片段 ,并在 2 .5kb、1.1kb和 0 .75kb处cDNA插入片段相对集中。所有分析结果表明 ,采用特定的发育时期和特定的组织提取的mRNA构建而成的cDNA表达文库具有较高频率的利它素基因片段和合适的滴度 ,定向插入技术并结合λZiplox噬菌体的表达功能 ,使构建的cDNA文库具有表达外源DNA的功能 ,有利于进行利它素基因的免疫筛选。

摘要: 本文研究了来自苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种HD 1菌株的CrylAδ 内毒素对家蚕中肠柱状上皮细胞Mg2 + 腺苷三磷酸酶活性的影响。细胞化学定位结果表明 ,该酶在家蚕中肠刷状缘的微绒毛膜上分布丰富、活性强。通过强迫饲喂过量CrylA毒素 ,中肠上皮细胞在短时间内出现了明显的病理特征 ,然而在肿胀、泡沫化的微绒毛膜乃至细胞碎片上Mg2 + 腺苷三磷酸酶仍具有很高的活性 ,而未观察到毒素对该酶的抑制作用。这说明Mg2 + 腺苷三磷酸酶可能不是δ 内毒素的作用靶子 ,也不是毒素所影响的天然的离子选择性通道。

摘要: 【目的】克隆获取柞蚕Antheraea pernyi中参与蜕皮激素合成的Halloween家族基因，并对长光照条件下柞蚕蛹解除滞育过程中Halloween基因的表达模式进行测定，为阐明柞蚕蛹滞育解除过程中蜕皮激素合成的特点奠定基础。【方法】利用RT-PCR从柞蚕中克隆获得5个Halloween家族基因(ApCyp307a1,ApCyp306a1,ApCyp302a1,ApCyp315a1和ApCyp314a1),并对其进行生物信息学分析；利用半定量RT-PCR检测柞蚕滞育期和发育期蛹脑、前胸腺、血淋巴、中肠、脂肪体、精巢/卵巢、气管和表皮中上述5个Halloween基因的表达量；利用RT-qPCR检测在室温(19～25℃)和低温(6℃)下储藏的柞蚕蛹在长光照(光周期17L∶7D)下前胸腺和脂肪体中上述5个Halloween基因及蜕皮激素受体基因ApEcR和ApUSP的表达量；利用RT-qPCR检测柞蚕4龄幼虫和预蛹中Cyp314a1 RNAi 24 h时脂肪体中Cyp314a1,ApEcR和ApUSP的表达量，观测RNAi对幼虫和预蛹发育的影响。【结果】克隆获得柞蚕5个Halloween家族基因，根据同源序列比对分别命名为ApCyp307a1,ApCyp306a1,ApCyp302a1,ApCyp315a1和ApCyp314a1(GenBank登录号分别为MW677192, MW677193, MW677194, MW677195和MW677196);系统进化树表明，Halloween基因在进化过程中高度保守。组织半定量PCR结果表明，ApCyp307a1,ApCyp306a1,ApCyp302a1和ApCyp315a1在柞蚕蛹前胸腺中表达量高，且ApCyp302a1和ApCyp315a1在柞蚕蛹发育期含量大幅上升；ApCyp314a1在发育期蛹中肠、脂肪体和精巢/卵巢中均有较高表达。低温保存的柞蚕蛹比室温保存蛹在光周期17L∶7D下能更快地羽化；室温储存的柞蚕蛹经光周期17L∶7D处理7 d时ApCyp315a1出现表达量高峰，ApCyp306a1,ApCyp302a1和ApUSP在处理21 d时表达量升高，ApCyp314a1和ApEcR在临近羽化时(处理35 d时)表达量达到高峰。低温保存的柞蚕蛹在光周期17L∶7D处理7 d时ApCyp307a1在羽化前期表达量较大升高，而ApCyp302a1在光周期17L∶7D处理21～35 d时出现高表达量，ApCyp315a1在临近羽化时出现表达量高峰，这与常温滞育蛹解除滞育过程中的表达模式不同；ApCyp314a1在临近羽化时出现表达量高峰，ApEcR和ApUSP与常温组均表现出类似的表达模式。与注射dseGFP的对照组比，ApCyp314a1的RNAi使4龄幼虫和预蛹脂肪体中ApCyp314a1的表达量显著降低，明显抑制柞蚕的幼虫蜕皮和化蛹。【结论】这些结果表明Halloween基因在20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone, 20E)合成及柞蚕生长发育中作用显著，长光照解除滞育过程中20E合成相关基因表达量高峰期多在7-21 d,而ApCyp314a1在羽化前期大量表达。低温处理后能够加速柞蚕蛹滞育的解除，除ApCyp306a1呈现多个表达量高峰，其他Halloween基因多在处理中后期表达量升高。

摘要: 滞育是昆虫为了躲避不利生存环境而进化出的一种发育停滞的适应性策略，家蚕Bombyx mori作为典型的胚胎滞育昆虫，其滞育诱导过程已得到广泛的研究，但蛹期滞育激素（DH）释放过程的分子机制仍不十分清楚。二化性家蚕滞育性受到母性跨世代影响，蚕卵在25℃催青时，蛹期DH经咽下神经节（SG）释放，产滞育卵；而蚕卵在15℃催青时，蛹期不释放DH，产非滞育卵。本研究分别对蚕卵采用25℃和15℃催青，在DH释放关键时期（蛹期第3天）解剖雌蛹脑-咽下神经节（Br-SG）进行转录组测序。共鉴定到888个差异表达基因，相比于25℃催青组，在15℃催青组中有568个上调表达基因和320个下调表达基因。GO分类和KEGG功能富集分析结果显示差异基因主要具有丝氨酸内肽酶活性、单加氧酶活性、GTP酶激活活性和G蛋白偶联受体活性；同时差异基因主要参与昆虫激素生物合成、萜类骨架生物合成、长寿调节途径-多物种、神经活性配体-受体相互作用等相关通路。该研究为进一步解析家蚕滞育诱导过程中蛹期DH释放分子机制提供靶标基因和参考。