摘要: Chd64是含有钙结合蛋白同源(Calponin homology, CH)结构域的蛋白，在果蝇蜕皮激素与保幼激素信号通路中发挥重要作用。本研究以家蚕Bombyx mori为研究对象，利用PCR克隆了与果蝇Drosophila melanogasterDmChd64同源的BmChd64基因，与表达载体pET-28a连接后，成功获得体外原核表达的BmChd64蛋白，并对其进行了亚细胞定位分析。家蚕BmChd64基因开放阅读框(ORF)的序列为567 bp,编码188个氨基酸，预测分子量大小为20.9 kDa,理论等电点为8.41,编码的蛋白在第27～130个氨基酸处存在CH结构域。同源性比对与进化分析显示，BmChd64与赤拟谷盗Tribolium castaneum和果蝇的Chd亲缘关系较近。qRT-PCR结果显示，BmChd64在家蚕5龄游走期的不同组织中均有表达，且在翅原基中的表达趋势与家蚕体内蜕皮激素(20-hydroxyecdysone, 20E)滴度变化规律一致。亚细胞定位结果显示，BmChd64在细胞核与细胞质中均有分布，细胞核内荧光信号较强，且在细胞核外围较弱，推测细胞质中BmChd64也可入核，最终定位在细胞核中。研究结果表明BmChd64可能主要通过20E信号通路调控翅原基等的变态发育，这为进一步完善20E调控昆虫变态发育的分子机制提供了实验基础。

摘要: Fox家族蛋白广泛存在于植物以外的物种中，是一类与发育相关的重要转录因子。但是不同Fox基因在鳞翅目昆虫家蚕Bombyx mori精巢中的表达特征，以及BmFoxL2亚家族蛋白在精巢发育中的功能未知。本文检测了家蚕12个BmFox基因在家蚕精巢中的表达量，发现BmFoxL2-2的表达量最高，BmFoxL2-1次之。BmFoxL2-1和BmFoxL2-2在精巢中的表达量显著高于卵巢。亚细胞定位分析显示BmFoxL2-1在细胞核中表达，BmFoxL2-2在细胞核和细胞质中都有表达。生物信息学分析显示BmFoxL2-1和BmFoxL2-2都有保守的Fox结构域，但N端结构以及理化性质存在差异。BmFoxL2-1在家蚕精巢中的表达随着发育时间逐渐升高，BmFoxL2-2的表达在幼虫末期和蛹期达到高峰；BmFoxL2-1和BmFoxL2-2在精巢内容物中的表达均高于精巢膜。在Bm12细胞中分别过表达BmFoxL2-1和BmFoxL2-2蛋白后，BmNanos、BmVasa和BmCyclin A等发育相关基因的表达均显著上调，暗示这些基因受BmFoxL2亚族蛋白的调控。由此，本文推测家蚕FoxL2亚族蛋白可能通过调节精巢细胞周期或生殖细胞的功能来调节家蚕精巢的发育。

摘要: 昆虫双杂交(Insect two-hybrid, I2H)技术是研究昆虫细胞蛋白质相互作用的一种方法。本研究利用Gateway克隆技术，构建了家蚕Bombyx mori蛋白BmHSP83和BmPDIA5,以及BmMAD3和BmMAN1的I2H载体；然后，将载体与报告质粒pUAS-Luc一起转染SF-9细胞，检测其发光值。结果表明，转染pIE2-AD-BmHSP83或pIE2-AD-BmMAD3载体与转染pUAS-Luc的对照组的细胞发光值无明显差异，报告基因未被激活；分别单独用pIE2-DBD-BmHSP83或pIE2-DBD-BmMAD3质粒转染细胞时，发光强度显著增加，报告基因被激活，说明BmHSP83和BmMAD3造成了假阳性结果；并且当细胞共转染pIE2-DBD-BmHSP83和pIE2-AD-BmPDIA5、pIE2-DBD-BmMAD3和pIE2-AD-BmMAN1时报告基因的激活反应显著提高，提示BmHSP83与BmPDIA5、BmMAD3与BmMAN1存在互作关系从而引起阳性反应，且与BmHSP83和BmMAD3的假阳性形成叠加效应；然而，当共转染pIE2-AD-BmHSP83和pIE2-DBD-BmPDIA5、pIE2-AD-BmMAD3和pIE2-DBD-BmMAN1时报告基因未被激活，显示pIE2-AD-BmHSP83/BmMAD3导致了假阴性。BmHSP83和BmMAD3引起I2H假性现象可能与该二种蛋白具有转录激活功能有关，当其与DNA结合结构域(DNA binding domain, DBD)融合表达时，该融合体即具备了DNA结合及转录激活两个功能，因而可以启动下游报告基因的表达；反之，当其与转录激活结构域(AD)融合表达时，则阻止了他们各自与BmPDIA5、BmMAN1蛋白的互作。本研究结果为那些利用I2H体系研究具有转录激活功能的蛋白质相互作用提供借鉴。

摘要:

摘要: 双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis)俗称红虫,隶属于多毛纲(Polychaeta)、沙蚕亚科(Nereidinae)、围沙蚕属(Perinereis),是我国潮间带河口泥沙滩上的优势种,体大且肥,可做饵料,也是我国沿海河口增养殖种类之一。该种为热带、亚热带的广布种,分布于韩国、泰国、菲律宾、印度、印度尼西亚以及我国近海[1]。近年来随着沙蚕的采捕量增大及环境变化,导致沙蚕资源逐渐匮乏,影响到其资源的可持续利用与发展[2]。